中醫(yī)健脾單元療法對(duì)強(qiáng)直性脊柱炎患者調(diào)節(jié)性細(xì)胞的影響

中醫(yī)健脾單元療法對(duì)強(qiáng)直性脊柱炎患者調(diào)節(jié)性細(xì)胞的影響

sd4和sd25（treg）是具有免疫抑制特性的t淋巴結(jié)亞組，在調(diào)節(jié)外周免疫反應(yīng)方面發(fā)揮著重要作用。該細(xì)胞亞群能夠抑制自身免疫病的發(fā)生,參與免疫調(diào)節(jié)。近年來(lái),CD4+CD25+Treg已成為自身免疫性疾病研究的焦點(diǎn)。本研究觀察強(qiáng)直性脊柱炎(AS)患者外周血CD4+CD25+Treg的變化及新風(fēng)膠囊為主的中醫(yī)健脾單元療法對(duì)其影響,并探討中醫(yī)健脾單元療法治療AS的可能機(jī)制。1對(duì)象和方法1.1治療急性眼炎及并發(fā)癥的特點(diǎn)60例AS患者均來(lái)自于安徽中醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院風(fēng)濕科2010年8月至2011年5月住院患者,所有患者均符合1984年美國(guó)風(fēng)濕病協(xié)會(huì)修訂的強(qiáng)直性脊柱炎的診斷標(biāo)準(zhǔn)及中醫(yī)辨證(參照《中藥新藥臨床研究指導(dǎo)原則·中藥新藥治療強(qiáng)直性脊柱炎的臨床研究指導(dǎo)原則》)屬濕熱痹阻證:主癥可見(jiàn)腰骶疼痛,脊背疼痛,腰脊活動(dòng)受限,晨僵,發(fā)熱,四肢關(guān)節(jié)紅腫熱痛,目赤腫痛;次癥見(jiàn)口渴或口干不欲飲,肢體困重,大便干,溲黃;舌脈見(jiàn)舌紅,苔黃或黃厚、膩,脈滑數(shù)。并排除同時(shí)患有類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎,干燥綜合征,風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎,妊娠、哺乳期的女性患者,其他血清陰性脊柱關(guān)節(jié)病,晚期脊柱強(qiáng)直,嚴(yán)重關(guān)節(jié)畸形患者;合并急性眼炎需用腎上腺皮質(zhì)激素治療者;合并有心腦血管、肝、腎和造血系統(tǒng)等嚴(yán)重疾病者。其中男性38例(63.3%),女22例(36.7%);年齡16~57歲,平均(31.5±9.1)歲;病程0.3~20年,平均(4.7±4.6)年;文化水平最高為碩士,最低為小學(xué)。另選擇同一時(shí)期健康體檢者作為健康對(duì)照組,其中男19例(63.3%),女11例(36.7%),健康對(duì)照組的性別、年齡、婚姻狀況、文化程度與患者組差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),兩組具有可比性。1.2流式細(xì)胞儀檢測(cè)抽取受試者新鮮靜脈血3ml,取50μl,先后加入10μl抗CD4-FITC、5μl抗CD25-PC5、10μl抗CD127-PE,振蕩搖勻,避光靜置20min后,加入紅細(xì)胞裂解液,振蕩搖勻,避光15min,流式細(xì)胞儀檢測(cè)(采用美國(guó)產(chǎn)Beckman-CoulterXL-ESPICMCL型流式細(xì)胞儀檢測(cè),試劑均購(gòu)于美國(guó)BeckmanCoulter公司)。以前向散射(FSC)為橫坐標(biāo),以縱向散射為縱坐標(biāo)(SSC)做散點(diǎn)圖,設(shè)定淋巴細(xì)胞門(mén),然后確定各熒光的分界游標(biāo),每個(gè)樣品收集10000個(gè)細(xì)胞,根據(jù)PE熒光強(qiáng)度圈定CD4+CD25nt/hiCD127low群,CellQuest軟件分析結(jié)果。1.3治療方法1.3.1中藥湯劑制備采用中醫(yī)健脾單元療法,即新風(fēng)膠囊+中醫(yī)辨證論治+中藥熏蒸治療。(1)健脾化濕通絡(luò)中藥新風(fēng)膠囊(安徽中醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院制劑中心生產(chǎn),批號(hào):20100829),每粒0.5g,每次3粒,每日3次。新風(fēng)膠囊組方:黃芪、薏苡仁、蜈蚣、雷公藤,服用3個(gè)月。(2)中醫(yī)辨證論治—濕熱痹阻證,治法:清熱除濕,通絡(luò)止痛。采用經(jīng)驗(yàn)方:蒲公英30g、白花蛇舌草30g、薏苡仁30g、黃芪20g、陳皮15g、川樸15g、茯苓20g、山藥20g、法半夏15g、桃仁15g、紅花15g、丹參15g、川芎15g、狗脊10g、甘草5g。隨證加減:發(fā)熱甚者加石膏15g、知母10g;肢冷畏寒加制附子10g;關(guān)節(jié)腫甚加澤瀉15g、豬苓15g;頸痛加葛根15g;肩痛加姜黃15g、葳靈仙15g;胸脅痛加柴胡10g、郁金15g;疼痛甚加全蝎5g、蜈蚣2條,或加制乳沒(méi)各5g;大便干加玄參15g、生地15g或大黃5g;口渴加天花粉15g、黃芩10g。服用方法:中藥湯劑,每日1劑。服用3個(gè)月。(3)中藥熏蒸治療:使用自擬熏蒸方,主要由羌活20g,獨(dú)活20g,防風(fēng)15g,桂枝15g,細(xì)辛10g,川芎20g,海風(fēng)藤30g,徐長(zhǎng)卿30g,姜黃20g,蘇木20g,冰片1g等組成,具有祛風(fēng)除濕,活血通絡(luò)之功。熏蒸每天1次,每次20min。7d為1個(gè)療程,共熏蒸2個(gè)療程。1.3.2中藥外治合同材采用柳氮磺吡啶(SASP)+中醫(yī)辨證論治+中藥外治治療。柳氮磺吡啶(上海三維制藥有限公司,產(chǎn)品批號(hào)201008c20)口服,1.0g,每日3次。中醫(yī)辨證論治和中藥外治同研究組。兩組在治療期間均可根據(jù)具體情況使用非甾體抗炎藥及抗生素等,不加服其他治療本病的藥物。1.4中醫(yī)癥候積分療效標(biāo)準(zhǔn)(1)臨床治愈:中醫(yī)癥狀、體征消失或基本消失,癥候積分減少≥95%。(2)顯效:中醫(yī)癥狀、體征明顯改善,癥候積分減少≥70%。(3)有效:中醫(yī)癥狀、體征明顯均有好轉(zhuǎn),癥候積分減少≥30%。(4)無(wú)效:中醫(yī)癥狀、體征均無(wú)明顯改善甚或加重,癥候積分減少不足30%。1.5統(tǒng)計(jì)分析方法采用SPSS11.5統(tǒng)計(jì)軟件,計(jì)量資料數(shù)據(jù)以“均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差”表示,兩組間比較采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)法進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析,療效評(píng)定采用Ridit分析,檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05或α=0.01。2結(jié)果2.1治療前后中醫(yī)癥狀的療效兩組中醫(yī)證候療效比較,研究組總有效率及顯效率顯著高于對(duì)照組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),見(jiàn)表1。2.2cd25+treg、cd4+cd127-treg表達(dá)頻率與健康對(duì)照組者比較,AS患者的CD4+CD25+Treg、CD4+CD25+CD127-Treg表達(dá)頻率顯著降低(P<0.01),見(jiàn)表2,圖1、2。2.3cd4+cd2+treg表達(dá)頻率與治療前相比較,研究組和對(duì)照組治療后CD4+CD25+CD127-Treg和CD4+CD25+Treg表達(dá)頻率均明顯增高(P<0.01),研究組治療后CD4+CD25+Treg表達(dá)頻率有上升的趨勢(shì),但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05);與對(duì)照組治療后比較,研究組治療后CD4+CD25+CD127-Treg表達(dá)頻率顯著增高(P<0.05),見(jiàn)表3,圖3、4。3as發(fā)病機(jī)制及中藥健脾單元療法的合理使用CD4+CD25+Treg分為天然性CD4+CD25+Treg和后天性CD4+CD25+Treg:天然性CD4+CD25+Treg起源于胸腺,占人和小鼠外周CD4+T細(xì)胞5%~10%;后天性CD4+CD25+Treg在外周由自體抗原刺激產(chǎn)生。CD4+CD25+Treg表面有多種表型,但大多不具有特異性,CD4+CD25+Treg活化后也可表達(dá)。相關(guān)研究表明,CD127在人和小鼠天然的CD4+CD25+Treg表面低表達(dá),故CD4+CD25+CD127low/-Treg是能反映更具有特異性。CD4+CD25+Treg在維持外周免疫耐受中起重要作用,其數(shù)量減少或功能缺失可導(dǎo)致自身免疫性疾病的發(fā)生。CD4+CD25+CD127-Treg作為T(mén)reg細(xì)胞表面的特征性標(biāo)志,可在分選時(shí)排除其他細(xì)胞干擾,獲得較完整的Treg細(xì)胞。AS是一種主要侵犯骶髂關(guān)節(jié)、脊柱棘突、脊柱旁軟組織及外周關(guān)節(jié)的慢性進(jìn)行性疾病,可伴有關(guān)節(jié)外表現(xiàn)。目前該病的病因和發(fā)病機(jī)制尚不明確,但免疫功能紊亂在AS的發(fā)病機(jī)制中具有相當(dāng)重要的作用。本研究從CD4+CD25+Treg和CD4+CD25+CD127-Treg的表達(dá)頻率角度來(lái)研究AS可能的發(fā)病機(jī)制及中藥新風(fēng)膠囊為主的中醫(yī)健脾單元療法對(duì)其影響。結(jié)果表明,AS患者外周血中CD4+CD25+Treg和CD4+CD25+CD127-Treg表達(dá)頻率均顯著低于健康人群,提示CD4+CD25+Treg和CD4+CD25+CD127-Treg表達(dá)頻率的降低尤其是CD4+CD25+CD127-Treg表達(dá)頻率的降低在AS發(fā)病中起到關(guān)鍵作用。中醫(yī)健脾單元療法包括中醫(yī)特色治療、中醫(yī)辨證論治、中藥外治。中醫(yī)特色治療采用益氣健脾化濕通絡(luò)中藥新風(fēng)膠囊(XFC),方中重用薏苡仁為君藥,薏苡仁健脾利濕、舒筋除痹;黃芪為君藥,具有益氣養(yǎng)血、固表止汗、利水消腫、健脾化濕、除痹之功;雷公藤為臣藥,功可祛風(fēng)除濕,活血通絡(luò),消腫止痛;蜈蚣為臣藥,祛風(fēng)止痙、通絡(luò)止痛、攻毒散結(jié)。四藥共奏健脾益氣,化濕通絡(luò)之功。中醫(yī)辨證屬濕熱痹阻證,治療時(shí),我們選用蒲公英、白花蛇舌草為君藥,以求其發(fā)揮主要治療作用,同時(shí)根據(jù)AS病機(jī)特點(diǎn)為脾虛濕盛始終貫徹于AS患者的各個(gè)階段及各證型中,故濕熱痹阻證患者均配伍大隊(duì)化濕健脾中藥,如黃芪、薏苡仁、茯苓、山藥等,再根據(jù)兼證不同隨證加減,臨床上取得顯著效果。中藥外治采用中藥熏蒸療法,該方為我科自擬方,方中羌活、獨(dú)活祛風(fēng)除濕為君;桂枝、細(xì)辛溫經(jīng)散寒、祛風(fēng)止痛為臣;川芎、姜黃、蘇木活血祛瘀止痛,取其“治風(fēng)先治血,血行風(fēng)自滅”之意,與防風(fēng)、海風(fēng)藤、徐長(zhǎng)卿之祛風(fēng)除濕、通絡(luò)止痛共為佐藥;冰片辛香走竄,助諸藥直達(dá)病所為使,共奏祛風(fēng)除濕,活血通絡(luò)之功。新風(fēng)膠囊中各藥均具有一定的抗炎鎮(zhèn)痛、免疫調(diào)節(jié)作用,黃芪含有黃酮、多糖、苷類和多種氨基酸,能增強(qiáng)免疫功能;雷公藤具有免疫抑制作用,可抑制AS患者體內(nèi)異常免疫應(yīng)答反應(yīng);薏苡仁的浸出物能顯著抑制中性粒細(xì)胞、淋巴細(xì)胞膜的甲基轉(zhuǎn)移酶、前列腺素E2和磷脂酶A2的分泌;蜈蚣通過(guò)改善血液循環(huán)而起到良好的鎮(zhèn)痛作用。黃芪、薏苡仁與雷公藤相伍,可通過(guò)調(diào)節(jié)免疫以防止雷公藤的免疫抑制作用過(guò)強(qiáng)而造成機(jī)體免疫功能過(guò)于低下的缺點(diǎn)。既往研究表明,XFC還具有促進(jìn)血液循環(huán)、保護(hù)胃黏膜、改善貧血的作用。柳氮磺吡啶也具有抗炎鎮(zhèn)痛、免疫調(diào)節(jié)作用,可抑制絲裂原誘導(dǎo)的淋巴細(xì)胞增殖,大劑量時(shí)還可抑制自然殺傷細(xì)胞的活性。故研究組和對(duì)照組均能有效的提高AS患者外周血Treg的表達(dá)頻率,改善患者的臨床癥狀體征,故