振明正生合劑對(duì)裸鼠抗腫瘤作用的實(shí)驗(yàn)研究

振明正生合劑對(duì)裸鼠抗腫瘤作用的實(shí)驗(yàn)研究

在臨床初步觀察中，中藥復(fù)明正生合用對(duì)各種人的腫瘤有生長(zhǎng)抑制作用。筆者采用經(jīng)典的人腫瘤細(xì)胞裸鼠移植瘤模型,觀察了該藥物體內(nèi)對(duì)人肺癌、大腸癌、神經(jīng)膠質(zhì)瘤、肝癌和乳腺癌的生長(zhǎng)抑制作用,并做了急性毒性試驗(yàn),評(píng)估了該藥的安全性,報(bào)道如下。1實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及試劑中藥復(fù)方振明正生合劑(批號(hào):20071018、20080901,規(guī)格100mL/瓶),由北京立國(guó)之路科技有限公司提供,主要成分為藏紅花、西藏秦韭、昆明雞血藤、千里光、黑胡桃、啤酒花、訶子、臭草等。常規(guī)培養(yǎng)試劑:國(guó)產(chǎn)小牛血清及1640培養(yǎng)液,DMEM培養(yǎng)液。銫源照射裝置:美國(guó)BD公司。振明正生濃縮藥物(用于急性毒性試驗(yàn)):原液濃縮6倍。1.2病理細(xì)胞庫(kù)和細(xì)胞系人肺癌細(xì)胞系A(chǔ)549、人大腸癌細(xì)胞系SW480、人神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞系Ln229、人肝癌細(xì)胞系L7402和人乳腺癌細(xì)胞系MB231均為中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院血液學(xué)研究所病理細(xì)胞庫(kù)保存并提供。1.3動(dòng)物1.3.1裸鼠Balb/c裸鼠購(gòu)自中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物研究所、北京維通利華有限公司,飼養(yǎng)于中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院血液研究所SPF級(jí)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心。1.3.2昆明老鼠10只,雌雄各半,體質(zhì)量18～21g,購(gòu)自中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物研究所。1.4實(shí)驗(yàn)方法1.4.1動(dòng)物分組、給藥及觀察指標(biāo)1.4.1.1腫瘤細(xì)胞系常規(guī)培養(yǎng)人肺癌、大腸癌、肝癌、乳腺癌細(xì)胞系在含10%小牛血清的RPMI1640培養(yǎng)液中培養(yǎng),人神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞系在含10%小牛血清的DMEM(高糖)培養(yǎng)液中培養(yǎng)。培養(yǎng)條件為常規(guī)37℃,5%CO2孵箱培養(yǎng)。5種細(xì)胞均用0.25%的胰蛋白酶消化傳代。1.4.1.2裸鼠接種及分組Balb/c裸鼠4～5周齡,雌性。全身照射3Gy,于照射當(dāng)天皮下接種腫瘤細(xì)胞2×106只-1。接種后隨機(jī)分為實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組,每組5或6只裸鼠。1.4.1.3治療接種后24h開(kāi)始給藥,實(shí)驗(yàn)組每天口服振明正生合劑0.2mL/只,對(duì)照組每天口服生理鹽水0.2mL/只。均連續(xù)4周。1.4.1.4觀察指標(biāo)1.4.1.4.1腫瘤體積每周用游標(biāo)卡尺測(cè)量2組動(dòng)物腫瘤大小,腫瘤體積按照下列公式計(jì)算:V=1/2長(zhǎng)徑×短徑。腫瘤生長(zhǎng)抑制率=(對(duì)照組腫瘤體積-實(shí)驗(yàn)組腫瘤體積)/對(duì)照組腫瘤體積。1.4.1.4.2腫瘤質(zhì)量給藥后4周活殺動(dòng)物,剝離腫瘤,稱(chēng)質(zhì)量,計(jì)算抑制率。腫瘤生長(zhǎng)抑制率=(對(duì)照組腫瘤質(zhì)量-實(shí)驗(yàn)組腫瘤質(zhì)量)/對(duì)照組腫瘤質(zhì)量。1.4.2急性中毒試驗(yàn)按照每只小鼠灌胃最大容量,口服振明正生濃縮藥物0.6mL/20g,觀察24h,計(jì)算藥物L(fēng)D50。1.5統(tǒng)計(jì)處理成組數(shù)據(jù)比較采用t檢驗(yàn)。2結(jié)果2.1肺癌細(xì)胞系統(tǒng)淺棕色大鼠移植腫瘤的體積抑制經(jīng)過(guò)3周的治療,振明正生合劑對(duì)肺癌模型的體積抑制率為41%(見(jiàn)表1及圖1)。2.2有2.2回復(fù)突變器經(jīng)過(guò)4周的治療,振明正生合劑對(duì)大腸癌模型的體積抑制率為64%(見(jiàn)表2及圖2)。對(duì)照組腫瘤質(zhì)量(294.0±146.4)mg,實(shí)驗(yàn)組腫瘤質(zhì)量(116.0±54.13)mg,抑制率為61%,2組比較有顯著性差異(P<0.05)。見(jiàn)圖3。2.3腫瘤體積抑制率經(jīng)過(guò)4周的治療,振明正生合劑對(duì)人神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞系Ln229裸鼠移植瘤腫瘤體積抑制率為54%(見(jiàn)表3及圖4)。對(duì)照組腫瘤質(zhì)量(180.0±54.3)mg,實(shí)驗(yàn)組腫瘤質(zhì)量(55.0±45.2)mg,抑制率為69%,2組比較有顯著性差異(P<0.05),見(jiàn)圖5。2.4人體肝腫瘤細(xì)胞系統(tǒng)瘤的體積抑制該試驗(yàn)分別在2008年3月及2009年1月重復(fù)做了2次,2次試驗(yàn)中振明正生合劑用的是同一批號(hào):20071018。2.4.1實(shí)驗(yàn)組液設(shè)計(jì)將振明正生合劑原液靜置48h以上,取沉淀液為實(shí)驗(yàn)組1,取上清液為實(shí)驗(yàn)組2。經(jīng)過(guò)4周的治療,實(shí)驗(yàn)組1肝癌模型體積抑制率為80%(見(jiàn)表4及圖6),對(duì)肝癌模型的質(zhì)量抑制率為80%(見(jiàn)表5及圖7),各組人肝癌細(xì)胞系L7402裸鼠移植瘤體積的動(dòng)態(tài)觀察見(jiàn)圖8。2.4.2組積抑制率振明正生合劑用原液。經(jīng)過(guò)4周的治療,振明正生合劑對(duì)肝癌模型的腫瘤體積抑制率為76%(見(jiàn)表6及圖9),對(duì)照組腫瘤質(zhì)量(120.0±173.8)mg,實(shí)驗(yàn)組腫瘤質(zhì)量(24.5±8.8)mg,抑制率為80%,2組比較有顯著性差異(P<0.05),見(jiàn)圖10。2.5組患者腫瘤質(zhì)量比較經(jīng)過(guò)4周的治療,振明正生合劑對(duì)乳腺癌模型的體積抑制率為94%(見(jiàn)表7、圖11)。對(duì)照組腫瘤質(zhì)量(540.0±159.4)mg,實(shí)驗(yàn)組腫瘤質(zhì)量(32.0±34.7)mg,抑制率為94%,2組比較有極顯著性差異(P<0.01),見(jiàn)圖12。各組裸鼠移植瘤體積的動(dòng)態(tài)觀察見(jiàn)圖13。2.6裸鼠治療劑量選擇小鼠無(wú)一死亡。試驗(yàn)劑量相當(dāng)于每只20g體質(zhì)量的小鼠一次口服原藥3.6mL/20g,即180mL/kg,為裸鼠治療劑量的18倍。這樣大的劑量仍然沒(méi)有導(dǎo)致動(dòng)物死亡,證明本品為無(wú)毒/低毒(LD50>1g/kg或者1mL/kg為無(wú)毒或低毒)。3振明正生小制劑在中藥治療腫瘤的生長(zhǎng)和療效綜上所述,振明正生合劑對(duì)5種腫瘤細(xì)胞系裸鼠移植瘤均有明顯抑制腫瘤生長(zhǎng)作用。經(jīng)過(guò)3～4周的治療,該中藥對(duì)肺癌模型的體積抑制率達(dá)到41%(P<0.05),對(duì)大腸癌模型的質(zhì)量抑制率超過(guò)60%(P<0.05),對(duì)神經(jīng)膠質(zhì)瘤模型的質(zhì)量抑制率為69%(P<0.05),對(duì)肝癌模型的質(zhì)量抑制率超過(guò)79%(P<0.05),對(duì)乳腺癌模型的質(zhì)量抑制率達(dá)到94%(P<0.01)。同時(shí),振明正生合劑組方藥材均為無(wú)毒可食植物,無(wú)毒副作用,安全性良好。間隔近1a時(shí)間重復(fù)的人肝癌模型試驗(yàn)結(jié)果顯示:振明正生合劑質(zhì)量及療效穩(wěn)定性良好,不同劑量療效相同。傳統(tǒng)中藥治療腫瘤的研究大體走過(guò)了3個(gè)階段。第1個(gè)階段是從民間驗(yàn)方篩選抗腫瘤單方或復(fù)方;第2階段是在驗(yàn)方研究的基礎(chǔ)上進(jìn)行了大量的中藥單體研究;第3階段是近年來(lái)又開(kāi)始進(jìn)行的抗腫瘤復(fù)方研究。對(duì)于中藥抗腫瘤的機(jī)制,以往主要是從中醫(yī)傳統(tǒng)理論出發(fā),從扶正培本、軟堅(jiān)散結(jié)、清熱解毒等方面闡述;近年來(lái)研究發(fā)現(xiàn),中藥抗腫瘤的機(jī)制也可以通過(guò)誘導(dǎo)細(xì)胞分化(如三氧化二砷治療急性早幼粒細(xì)胞白血病)、促進(jìn)細(xì)胞凋亡、免疫調(diào)節(jié)作用(如參芪注射液、參芪扶正等均可以活化巨噬細(xì)胞,促使B細(xì)胞產(chǎn)生抗體,調(diào)節(jié)T細(xì)胞亞群,提高NK細(xì)胞、LAK細(xì)胞活性,誘生IL-2、INF殺傷瘤細(xì)胞)、殺傷瘤細(xì)胞、抗多藥耐藥(如漢防己甲素、川芎嗪等逆轉(zhuǎn)耐藥細(xì)胞株抗藥性)、抗侵襲轉(zhuǎn)移(如川芎嗪可有效控制黑色素瘤的肺轉(zhuǎn)移)、抗腫瘤血管生成、調(diào)節(jié)相關(guān)基因表達(dá)、影響細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)通路等途徑,發(fā)揮抗腫瘤作用。實(shí)際上,由于中藥復(fù)方成分復(fù)雜,其抗腫瘤效果很可能是多機(jī)制共同發(fā)生的作用。筆者將人的腫瘤細(xì)胞系接種給免疫缺陷小鼠,使人的腫瘤細(xì)胞在小鼠身上生長(zhǎng),建立了多種人的腫瘤體內(nèi)模型。該模型可以在體內(nèi)觀察抗腫瘤藥物對(duì)人腫瘤細(xì)胞的作用,是篩選新的抗癌藥物或者復(fù)方、研究藥物作用機(jī)制的良好體內(nèi)模型。本實(shí)驗(yàn)觀察到,振明正生合劑對(duì)人肺癌、大腸癌