第34講微生物的培養(yǎng)和利用

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2常用方法:圖11-34-1雜菌污染化學藥劑消毒法外來雜菌干熱滅菌3制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基①操作步驟計算→

→溶化→

→倒平板②倒平板的方法及注意事項a請用文字和箭頭寫出正確的倒平板操作流程:。

b甲、乙、丙中的滅菌方法是。

c丁中的操作需要等待后才能進行。圖11-34-2稱量滅菌丙→乙→甲→丁灼燒滅菌平板冷卻凝固培養(yǎng)基的配制原則1目的要明確:配制時應根據(jù)微生物的種類、培養(yǎng)目的等確定配制的培養(yǎng)基種類。2營養(yǎng)要協(xié)調:注意各種營養(yǎng)物質的濃度和比例。3pH要適宜:細菌為65~75,放線菌為75~85,真菌為50~60,培養(yǎng)不同微生物所需的pH不同。4純化大腸桿菌的方法1純化培養(yǎng)原理:在培養(yǎng)基上將細菌稀釋或分散成細胞,使其長成單個的菌落,這個菌落就是純化的細菌菌落。

2純化大腸桿菌的關鍵步驟:。

3常用的微生物接種方法①平板劃線法:是通過在瓊脂固體培養(yǎng)基表面的操作,將聚集的菌種逐步稀釋分散到培養(yǎng)基的表面。

②法:是將菌液進行一系列的,然后將的菌液分別涂布到瓊脂固體培養(yǎng)基的表面,進行培養(yǎng)。

單個接種接種環(huán)連續(xù)劃線不同稀釋度稀釋涂布平板梯度稀釋■易錯警示1用稀釋涂布平板法統(tǒng)計樣品中菌落的數(shù)目往往比實際數(shù)目低。這是因為當兩個或多個細胞連在一起時,平板上觀察到的只是一個菌落。而顯微計數(shù)法由于不能區(qū)分死菌與活菌,故所得數(shù)值可能比實際值偏高。2平板劃線法只適用于微生物的提純,不適用于微生物的計數(shù),并且在最后一次劃線的末端處的菌種最純。5菌種的保藏1對于頻繁使用的菌種,可以采用法。

2對于需要長期保存的菌種,可以采用法。

臨時保藏甘油管藏正誤辨析1培養(yǎng)基一般都含有水、碳源、氮源和無機鹽。 2在配制培養(yǎng)基時,除滿足營養(yǎng)需求外,還應考慮微生物生長對pH、O2及特殊營養(yǎng)物質的需求。 3高壓滅菌加熱結束時,打開放氣閥使壓力表指針回到零后,開啟鍋蓋?！獭獭粮邏簻缇訜峤Y束后,讓其自然冷卻,當壓力表的壓力降到零時打開排氣閥。4倒平板時,應將打開的皿蓋放到一邊,以免培養(yǎng)基濺到皿蓋上。5消毒的原則是既能殺死材料表面的微生物,又要減少消毒劑對細胞的傷害。 6為了防止污染,接種環(huán)經(jīng)酒精燈火焰灼燒滅菌后應趁熱快速挑取菌落?！恋蛊桨鍟r左手拿培養(yǎng)皿,右手拿錐形瓶,左手將培養(yǎng)皿打開一條稍大于瓶口的縫隙,倒入培養(yǎng)基后立即蓋上培養(yǎng)皿皿蓋?！獭磷茻臃N環(huán)之后,要冷卻后才能挑取菌落,以免溫度太高殺死菌種。7用稀釋涂布平板法純化大腸桿菌時,只有稀釋度足夠高,才能在培養(yǎng)基表面形成單個菌落。 √1培養(yǎng)基中營養(yǎng)物質的確定方法1自養(yǎng)型微生物所需的主要營養(yǎng)物質是無機物,碳源可來自大氣中的CO2,氮源可由含氮無機鹽提供。2異養(yǎng)型微生物所需的營養(yǎng)物質主要是有機物,即碳源必須由含碳有機物提供,氮源也主要由有機物提供,部分異養(yǎng)型微生物也可以利用無機氮源。2無菌技術1消毒和滅菌的區(qū)別

條件結果消毒較為溫和的物理或化學方法僅殺死物體表面或內部的部分對人體有害的微生物(不包括芽孢和孢子)滅菌強烈的理化因素殺死物體內外所有的微生物,包括芽孢和孢子2選擇無菌技術的原則①考慮無菌技術的效果:滅菌的效果比消毒要好。②考慮操作對象的承受能力:活體生物材料、操作者的手等只能采用消毒,而不能滅菌。3純化大腸桿菌的兩種方法的異同比較項目平板劃線法稀釋涂布平板法關鍵操作接種環(huán)在固體平板培養(yǎng)基表面連續(xù)劃線

①一系列的梯度稀釋;

②涂布平板操作注意事項每次劃線前后均需灼燒接種環(huán)稀釋度要足夠高,為確保實驗成功可以增加稀釋度的范圍菌體獲取在具有顯著菌落特征的區(qū)域的菌落中挑取菌體從適宜稀釋度的平板上的菌落中挑取菌體優(yōu)點可以根據(jù)菌落的特點獲得某種微生物的單個菌落既可以獲得單個菌落,又能對微生物計數(shù)缺點不能對微生物計數(shù)操作復雜,需要涂布多個平板平板劃線操作的3個易錯點1灼燒接種環(huán)之后,要冷卻后再進行接種,以免溫度太高殺死菌種。2劃線時最后一區(qū)域不要與第一區(qū)域相連。3劃線時用力要大小適當,防止用力過大將培養(yǎng)基劃破。生命觀念清概念明結論1下表所示為某微生物培養(yǎng)基的配方。下列說法中不正確的是A此培養(yǎng)基屬于液體培養(yǎng)基,其中的碳源是CH2OB配制培養(yǎng)基時,在各成分都溶化后、分裝前,必須要進行的是調節(jié)pH和滅菌C接種時應在酒精燈火焰附近操作D若用該培養(yǎng)液選擇培養(yǎng)纖維素分解菌,應除去青霉素,加入纖維素粉D成分NaNO3K2HPO4KClMgSO4·7H2O含量3g1g0.5g0.5g成分FeSO4(CH2O)H2O青霉素含量0.01g30g定容至1000mL0.1萬單位據(jù)表分析,該培養(yǎng)基配方中沒有加瓊脂,所以應該為液體培養(yǎng)基,碳源是CH2O,A正確;不論何種培養(yǎng)基,在各成分都溶化后、分裝前,要先進行pH調節(jié),然后再進行滅菌,B正確;酒精燈火焰附近存在一個無菌區(qū),為避免雜菌污染,接種時應在酒精燈火焰附近操作,C正確;纖維素分解菌對青霉素敏感,若用該培養(yǎng)基選擇培養(yǎng)纖維素分解菌,應除去青霉素和CH2O,同時加入纖維素粉作為唯一碳源,D錯誤。成分NaNO3K2HPO4KClMgSO4·7H2O含量3g1g0.5g0.5g成分FeSO4(CH2O)H2O青霉素含量0.01g30g定容至1000mL0.1萬單位2圖11-34-3表示小萌同學在實驗室培養(yǎng)大腸桿菌過程中的部分操作,下列說法錯誤的是A①②③步驟需要在酒精火焰旁操作B培養(yǎng)基中必須含碳源、無機鹽和水C③步驟接種環(huán)多方向劃線便于估計細菌數(shù)量D接種結束后,將④倒置放入培養(yǎng)箱中培養(yǎng)①②③④圖11-34-3C①②③步驟操作時需要在酒精燈火焰旁進行,防止被雜菌污染,A正確;培養(yǎng)基的營養(yǎng)成分必須含有碳源、氮源、無機鹽和水,B正確;③步驟接種環(huán)多方向劃線的目的是使菌種逐漸稀釋,以便得到單個菌落,但不能用于估計細菌數(shù)量,C錯誤;劃線接種結束后,將平板倒置放入培養(yǎng)箱中培養(yǎng),有利于表面的水分更好地揮發(fā)和防止皿蓋上的水珠落入培養(yǎng)基造成污染,D正確。①②③④圖11-34-3素養(yǎng)綜合重知識提能力3回答下列與細菌培養(yǎng)相關的問題。1在細菌培養(yǎng)時,培養(yǎng)基中能同時提供碳源、氮源的成分是填“蛋白胨”“葡萄糖”或“NaNO3”。通常,制備培養(yǎng)基時要根據(jù)所培養(yǎng)細菌的不同來調節(jié)培養(yǎng)基的pH,其原因是。硝化細菌在沒有碳源的培養(yǎng)基上填“能夠”或“不能”生長,原因是。

蛋白胨不同細菌生長繁殖所需的最適pH不同能夠硝化細菌可以利用空氣中的CO2作為碳源蛋白胨的組成元素是C、H、O、N等,葡萄糖的組成元素是C、H、O,NaNO3的組成元素中沒有C,故在細菌培養(yǎng)時,培養(yǎng)基中能同時提供碳源、氮源的成分是蛋白胨。通常,制備培養(yǎng)基時要根據(jù)所培養(yǎng)細菌的不同來調節(jié)培養(yǎng)基的pH,其原因是不同細菌生長繁殖所需的最適pH不同。硝化細菌在沒有碳源的培養(yǎng)基上能夠生長,原因是硝化細菌是自養(yǎng)型微生物,能將空氣中的CO2轉化為有機物。2用平板培養(yǎng)細菌時一般需要將平板填“倒置”或“正置”。

3單個細菌在平板上會形成菌落,研究人員通?？筛鶕?jù)菌落的形狀、大小、顏色等特征來初步區(qū)分不同種的微生物,原因是。

倒置在一定的培養(yǎng)條件下,不同種微生物表現(xiàn)出各自穩(wěn)定的菌落特征2用平板培養(yǎng)細菌時一般需要將平板倒置。3單個細菌在平板上會形成菌落,研究人員通?？筛鶕?jù)菌落的形狀、大小、顏色等特征來初步區(qū)分不同種的微生物,原因是在一定條件下,不同種微生物表現(xiàn)出各自穩(wěn)定的菌落特征。4有些使用后的培養(yǎng)基在丟棄前需要經(jīng)過處理,這種處理可以殺死丟棄物中所有的微生物。

滅菌有些使用后的培養(yǎng)基在丟棄前需要經(jīng)過滅菌處理,這種處理可以殺死丟棄物中所有的微生物。4下表是某種微生物培養(yǎng)基的配方表,請據(jù)表回答:1此培養(yǎng)基的營養(yǎng)成分有五類,其中蛋白胨提供的營養(yǎng)物質是。

2在培養(yǎng)基制備過程中,各種成分溶化后分裝前,必需的操作是。

牛肉膏蛋白胨NaCl瓊脂水0.5g1g0.5g2g200mL碳源、氮源、維生素調節(jié)pH1微生物培養(yǎng)基的成分一般包括碳源、氮源、水、無機鹽。蛋白胨在培養(yǎng)基中可以為微生物提供碳源、氮源和維生素。2配制培養(yǎng)基時為保證無菌,各種成分在溶化后分裝前必須調節(jié)pH,然后再滅菌。3微生物培養(yǎng)最基本的要求是無菌操作,下列對培養(yǎng)基、培養(yǎng)皿、接種環(huán)、雙手、空氣、牛奶所采用的滅菌或消毒方法的正確順序依次是填序號。

①化學消毒②高壓蒸汽滅菌③干熱滅菌④紫外線滅菌⑤灼燒滅菌⑥巴氏消毒法牛肉膏蛋白胨NaCl瓊脂水0.5g1g0.5g2g200mL②③⑤①④⑥培養(yǎng)基常用高壓蒸汽滅菌法進行滅菌,培養(yǎng)皿常用干熱滅菌法滅菌,接種環(huán)常用灼燒滅菌法滅菌,雙手應用化學藥劑消毒,空氣可用紫外線殺菌,牛奶常用巴氏消毒法消毒,故對培養(yǎng)基、培養(yǎng)皿、接種環(huán)、雙手、空氣、牛奶所采用的滅菌或消毒方法的正確順序依次是②③⑤①④⑥。4巴氏消毒法與煮沸消毒法相比,其優(yōu)點是。

在達到消毒目的的同時,營養(yǎng)物質損失較少與煮沸消毒法相比,巴氏消毒法在較低溫度下,既可以殺死微生物,又能保持物品中營養(yǎng)物質損失較少和風味不變。5用稀釋涂布平板法統(tǒng)計菌落數(shù)目時,最好選擇菌落數(shù)目在的平板進行計數(shù)。

30~300使用稀釋涂布平板法統(tǒng)計活菌數(shù)目時,為了保證結果準確,一般選擇菌落數(shù)目在30~300的平板進行計數(shù)。6純化菌株時,通常使用的劃線工具是。劃線的某個平板培養(yǎng)后,第一劃線區(qū)域的劃線上都不間斷地長滿了菌,第二劃線區(qū)域的第一條線上無菌落,其他劃線上有菌落。造成劃線無菌落的可能失誤操作有。

接種環(huán)灼燒后未冷卻;劃線未從第一區(qū)域末端開始接種環(huán)純化菌株時,通常使用的劃線工具是接種環(huán)。劃線的某個平板培養(yǎng)后,第一劃線區(qū)域的劃線上都不間斷地長滿了菌,第二劃線區(qū)域所劃的第一條線上無菌落,其他劃線上有菌落。造成劃線無菌落可能的失誤操作:①接種環(huán)灼燒后未冷卻;②劃線未從第一區(qū)域末端開始。考點二土壤中分解尿素的細菌的分離與計數(shù)基礎·自主診斷素養(yǎng)·全面提升 1篩選菌株1自然界中目的菌株篩選的依據(jù):根據(jù)它對的要求,到相應的環(huán)境中去尋找。

2實驗室中微生物篩選的原理:人為提供有利于生長的條件包括營養(yǎng)、溫度、pH等,同時抑制或阻止其他微生物生長。

3選擇培養(yǎng)基:允許特定種類的微生物生長,同時或其他種類微生物生長的培養(yǎng)基。

生存環(huán)境目的菌株抑制阻止2統(tǒng)計菌落數(shù)目1常用方法:法。

2統(tǒng)計依據(jù):當樣品的足夠高時,培養(yǎng)基表面生長的一個菌落,。通過統(tǒng)計平板上的菌落數(shù),就能推測出樣品中大約含有多少活菌。為了保證結果準確,一般選擇菌落數(shù)在的平板進行計數(shù)。

稀釋涂布平板稀釋度一個30~3003每克樣品中的菌株數(shù)的計算方法:平均C÷涂布的稀釋液體積V×M

4其他方法:還可利用計數(shù)。

利用稀釋涂布平板法成功統(tǒng)計菌落數(shù)目的關鍵是恰當?shù)南♂尪?。顯微鏡直接菌落數(shù)稀釋倍數(shù)3設置對照和重復比較項目對照重復目的排除實驗組中

對實驗結果的影響,提高實驗結果的

排除

對實驗結果的影響

方法空白對照:為了排除培養(yǎng)基被雜菌污染的可能性,需以

培養(yǎng)基作為空白對照;

條件對照:用

培養(yǎng)基與選擇培養(yǎng)基對照,說明選擇培養(yǎng)基具有選擇作用

同一稀釋度涂布至少

個平板

非測試因素可信度偶然因素未接種的完全34實驗設計項目內容實驗原理

(1)能合成

的細菌才能分解尿素

(2)配制以

為唯一氮源的培養(yǎng)基,能夠生長的細菌就是能分解尿素的細菌

實驗流程土壤取樣(富含

)→配制土壤溶液和制備培養(yǎng)基→

→涂布平板與培養(yǎng)→菌落

鑒定

(1)方法:在以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基中加入

指示劑培養(yǎng)分解尿素的細菌

(2)原理:細菌分解尿素的反應中,細菌合成脲酶將尿素分解成了

,其會使培養(yǎng)基的

增強,pH升高

脲酶尿素有機質系列稀釋計數(shù)酚紅氨堿性正誤辨析1選擇培養(yǎng)基可以鑒定某種微生物的種類。 2只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素。 3篩選能分解尿素的細菌所利用的培養(yǎng)基中,尿素是唯一的氮源。 ×鑒別培養(yǎng)基可以鑒定某種微生物的種類?！獭?分解尿素的細菌在分解尿素時,可以將尿素轉化為氨,使得培養(yǎng)基的pH降低。 5在以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基中加入酚紅指示劑,若指示劑變藍,則說明篩選到能分解尿素的細菌。 細菌在分解尿素時,可將尿素轉化為氨,導致培養(yǎng)基堿性增強,使酚紅指示劑呈現(xiàn)紅色?！聊蛩剞D化為氨,使得培養(yǎng)基的pH上升?！?選擇培養(yǎng)基的作用原理1在培養(yǎng)基中加入某種化學物質,如加入青霉素可以分離出酵母菌和霉菌;加入高濃度的食鹽可以得到金黃色葡萄球菌。這里的加入是在滿足培養(yǎng)所需基本成分的基礎上加入。2改變培養(yǎng)基中的營養(yǎng)成分,如缺乏氮源時可以分離出固氮微生物;以石油為唯一碳源時,可以分離出能消除石油污染的微生物。3改變微生物的培養(yǎng)條件,如將培養(yǎng)基放在高溫環(huán)境中培養(yǎng)可以得到耐高溫的微生物。4通過某些特殊環(huán)境分離微生物,如在高鹽環(huán)境中可分離出耐鹽菌;在高溫環(huán)境中可分離得到耐高溫的微生物。2培養(yǎng)基的種類與應用分類依據(jù)種類特點應用物理性質液體培養(yǎng)基不加凝固劑工業(yè)生產(chǎn)半固體培養(yǎng)基加凝固劑(少)觀察微生物的運動、微生物的分離、鑒定固體培養(yǎng)基加凝固劑(多)微生物的分離、鑒定,活菌計數(shù)、保藏化學成分天然培養(yǎng)基含化學成分不明的天然物質工業(yè)生產(chǎn)合成培養(yǎng)基培養(yǎng)基成分明確或用一定化學物質配制分類、鑒定分類依據(jù)種類特點應用用途選擇培養(yǎng)基添加某物質,抑制雜菌生長,促進所需微生物生長培養(yǎng)分離出特定微生物鑒別培養(yǎng)基根據(jù)微生物的代謝特點,在培養(yǎng)基中加入某種指示劑鑒別微生物3兩種計數(shù)方法的比較比較項目間接計數(shù)法(稀釋涂布平板法)直接計數(shù)法(顯微計數(shù)法)原理當樣品的稀釋度足夠高時,培養(yǎng)基表面生長的一個菌落來源于樣品稀釋液中的一個活菌,通過統(tǒng)計平板上的菌落數(shù),就能推測出樣品中大約含有多少活菌利用特定細菌計數(shù)板或血細胞計數(shù)板,在顯微鏡下計算一定容積的樣品中微生物的數(shù)量比較項目間接計數(shù)法(稀釋涂布平板法)直接計數(shù)法(顯微計數(shù)法)公式每克樣品中的菌株數(shù)=(C÷V)×M。C:某稀釋度下平板上生長的平均菌落數(shù);V:涂布平板時所用的稀釋液的體積;M:稀釋倍數(shù)每毫升原液所含細菌數(shù)=每小格平均細菌數(shù)×400×10000×稀釋倍數(shù)缺點當兩個或多個細胞連在一起時,平板上觀察到的只是一個菌落不能區(qū)分細胞死活結果比實際值小比實際值大■易錯警示關于“選擇菌落數(shù)在30~300的平板”的兩個理解誤區(qū)1只得到1個菌落數(shù)在30~300的平板:不符合實驗的重復原則,易受到偶然因素的影響。2得到3個或3個以上菌落數(shù)在30~300的平板:也不一定正確,如得到3個平板,菌落數(shù)分別為230、34、240,雖然菌落數(shù)均在“30~300”,但由于34與另外兩個平板上的菌落數(shù)差異較大,應找出原因并重新實驗。4實驗結果分析與評價圖11-34-4生命觀念清概念明結論1如圖11-34-5是從土壤中篩選產(chǎn)脲酶細菌的過程,下列敘述錯誤的是A能產(chǎn)生脲酶的細菌可以分解利用尿素B圖中逐級稀釋的程度會直接影響細菌培養(yǎng)基上的菌落數(shù)量4、Na2HPO4以提供無機鹽和作為緩沖劑D培養(yǎng)基①應以尿素為唯一氮源,培養(yǎng)基②的作用是純化培養(yǎng)產(chǎn)脲酶細菌D圖11-34-5酶具有專一性,能產(chǎn)生脲酶的細菌可以分解利用尿素,A正確;稀釋度越低,細菌培養(yǎng)基上菌落數(shù)越多,稀釋度越高,細菌培養(yǎng)基上菌落數(shù)越少,所以逐級稀釋的程度會直接影響細菌培養(yǎng)基上的菌落數(shù)量,B正確;細菌的生長繁殖需要無機鹽,培養(yǎng)基中添加H2PO4,Na2HPO4可提供無機鹽同時也可以作為緩沖劑,C正確;培養(yǎng)基①為選擇培養(yǎng)基,以尿素作為唯一氮源,培養(yǎng)基②為鑒別培養(yǎng)基,通過加入酚紅指示劑,判斷菌落周圍指示劑是否變紅,D錯誤。圖11-34-52下列關于土壤中分解尿素的細菌的分離與計數(shù)實驗的敘述正確的是 A培養(yǎng)基應以尿素為唯一氮源,該細菌與硝化細菌所利用的碳源物質是相同的B選擇菌落數(shù)在30~300的所有平板進行計數(shù),以平均數(shù)為實驗結果C對10mL土樣稀釋106倍后,取01mL該溶液進行重復的涂布實驗,測得的菌落數(shù)分別為18、234、276,則該10mL土樣中分解尿素的細菌數(shù)為255×108個D應該設置對照以排除非測試因素對實驗結果的干擾,提高可信度D從土壤中分離分解尿素的細菌,培養(yǎng)基應以尿素為唯一氮源,尿素分解菌為異養(yǎng)型生物,利用的是有機碳源,硝化細菌是自養(yǎng)型生物,以二氧化碳為碳源,二氧化碳為無機物,A錯誤;用稀釋涂布平板法測定同一樣品中的細菌數(shù)時,為了保證結果準確,在每一個濃度梯度內,至少要涂布3個平板,確定對照組無菌后,選擇菌落數(shù)在30~300的平板進行記數(shù),應將菌落數(shù)明顯最少和最多的平板舍棄后,求其平均值,再通過計算得出土壤中的細菌總數(shù),B錯誤;對10mL土樣稀釋106倍后,取01mL該溶液進行重復的涂布實驗,測得的菌落數(shù)分別為18、234、276,則該10mL土樣中分解尿素的細菌數(shù)為÷01×106×10=255×1010個,C錯誤;分離微生物時,需要設置不接種的培養(yǎng)基與實驗組一起培養(yǎng)作空白對照,以排除實驗組中非測試因素對實驗結果的干擾,提高可信度,D正確。素養(yǎng)綜合重知識提能力3某些土壤細菌可將尿素分解成CO2和NH3,供植物吸收和利用?；卮鹣铝袉栴}:1有些細菌能分解尿素,有些細菌則不能,原因是前者能產(chǎn)生。能分解尿素的細菌不能以尿素的分解產(chǎn)物CO2作為碳源,原因是

。

但可用葡萄糖作為碳源,進入細菌體內的葡萄糖的主要作用是

答出兩點即可。

脲酶分解尿素的細菌是異養(yǎng)生物,不能利用CO2來合成有機物為細胞生命活動提供能量,為其他有機物的合成提供原料催化尿素分解的酶為脲酶。分解尿素的細菌是異養(yǎng)生物,不能利用CO2來合成有機物。進入細菌體內的葡萄糖的主要作用是為細胞生命活動提供能量,葡萄糖的代謝中間產(chǎn)物可以作為合成其他有機物的原料。2為了篩選可分解尿素的細菌,在配制培養(yǎng)基時,應選擇填“尿素”“NH4NO3”或“尿素NH4NO3”作為氮源,不選擇其他兩組的原因是

。

尿素其他兩組都含有NH4NO3,能分解尿素的細菌和不能分解尿素的細菌都能利用NH4NO3,不能起到篩選作用能分解尿素的細菌和不能分解尿素的細菌都能利用NH4NO3,如果培養(yǎng)基中含有NH4NO3,則不能起到篩選作用。3用來篩選分解尿素細菌的培養(yǎng)基含有H2PO4和Na2HPO4,其作用有

答出兩點即可。

為細菌生長提供無機營養(yǎng),作為緩沖劑保持細胞生長過程中pH穩(wěn)定培養(yǎng)基中的H2PO4和Na2HPO4可以為微生物生長提供鈉離子、鉀離子等,其還可以作為緩沖劑保持細胞生長過程中pH穩(wěn)定?！鲱}后歸納目的微生物選擇的“三種”方法1利用平板劃線法或稀釋涂布平板法接種在固體平板培養(yǎng)基上,根據(jù)目的微生物特定的菌落特征挑選目的微生物。2利用選擇培養(yǎng)基直接篩選目的微生物。3利用鑒別培養(yǎng)基鑒別篩選目的微生物。4金黃色葡萄球菌具有高度耐鹽性,在血平板培養(yǎng)基中添加適量血液上生長時,可破壞菌落周圍的紅細胞,使其褪色。下面是某研究小組測定自來水中金黃色葡萄球菌濃度的實驗操作。請回答下列問題:1金黃色葡萄球菌的培養(yǎng)基為75%NaCl牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基,此培養(yǎng)基能為金黃色葡萄球菌的生長提供,培養(yǎng)基中加入75%NaCl利于金黃色葡萄球菌的篩選,原因是。

碳源、氮源、水和無機鹽不影響金黃色葡萄球菌生長的同時抑制其他菌的生長培養(yǎng)基能為微生物的生長提供碳源、氮源、水和無機鹽。培養(yǎng)基中加入75%NaCl不影響金黃色葡萄球菌生長,同時抑制其他菌的生長,因此利于金黃色葡萄球菌的篩選。2上述培養(yǎng)基的滅菌方法是,在制作血平板時需等平板后,方可加入血液,以防止。

高壓蒸汽滅菌法冷卻高溫破壞血細胞對培養(yǎng)基滅菌常用高壓蒸汽滅菌法。在制作血平板時需等平板冷卻后,方可加入血液,以防止高溫破壞血細胞。3現(xiàn)將10mL自來水樣進行梯度稀釋,依次稀釋成10-4~10-1的四個稀釋樣液,再取四個稀釋樣液各01mL分別接種到4組血平板上每組3個,每個接種01mL,所用方法是。在血平板上,金黃色葡萄球菌菌落的周圍會出現(xiàn),若在10-3組的3個血平板上,金黃色葡萄球菌菌落數(shù)分別為35、36和37,則每升自來水中的活菌數(shù)約為個。

稀釋涂布平板法透明圈溶血圈36×108

考點三分解纖維素的微生物的分離基礎·自主診斷素養(yǎng)·全面提升 1纖維素與纖維素酶1纖維素:一種由首尾相連而成的高分子化合物,是地球上含量最豐富的類物質。

2纖維素酶①組成:纖維素酶是一種酶,包括三種組分。

葡萄糖多糖復合C1酶、C酶和葡萄糖苷酶②作用纖維素纖維二糖葡萄糖2纖維素分解菌的篩選1方法:染色法。

2培養(yǎng)基:的選擇培養(yǎng)基。

葡萄糖苷酶剛果紅以纖維素為唯一碳源3篩選原理4菌落的挑選:挑選產(chǎn)生的菌落。

紅色復合物透明圈透明圈3實驗流程及注意事項纖維素富含纖維素單個透明圈4關于纖維素分解菌的篩選的“三點”提醒1纖維素分解菌的選擇培養(yǎng)基中的碳源并不只有纖維素,其中酵母膏和水解酪素也可作為碳源。2在纖維素分解菌的選擇培養(yǎng)基上生長的也不只有纖維素分解菌。因此,選擇培養(yǎng)后要進行鑒別培養(yǎng),才能獲得纖維素分解菌。3出現(xiàn)透明圈的菌落也不一定就是纖維素分解菌。正誤辨析1纖維素酶是一類酶,它是由C1酶、C酶和葡萄糖苷酶組成的。2在篩選能分解纖維素的細菌的實驗中,擴大培養(yǎng)的目的是增大樣品中目的菌的濃度。 3篩選纖維素分解菌可采用剛果紅染色法,剛果紅染色后的培養(yǎng)基上透明圈越大,說明纖維素分解菌分解纖維素的能力越強?！晾w維素酶是一種復合酶,一般認為它至少包括三種組分:C1酶、C酶和葡萄糖苷酶。纖維素在這三種酶的共同作用下才能被分解成葡萄糖?！獭?剛果紅染色法只能在培養(yǎng)微生物的時候加入剛果紅。 5分離纖維素分解菌的流程是土壤取樣→選擇培養(yǎng)→涂布到鑒別培養(yǎng)基上→培養(yǎng)→挑選產(chǎn)生透明圈的菌落。 ×剛果紅染色法既可以先培養(yǎng)微生物,再加入剛果紅進行顏色反應,也可以在倒平板時就加入剛果紅?！练蛛x纖維素分解菌的流程是土壤取樣→選擇培養(yǎng)→梯度稀釋→將樣品涂布到鑒別培養(yǎng)基上→培養(yǎng)→挑選產(chǎn)生透明圈的菌落。6土壤中纖維素分解菌的篩選流程中的“選擇培養(yǎng)”是必不可少的。 土壤中纖維素分解菌的篩選流程中的“選擇培養(yǎng)”是否需要,應根據(jù)樣品中目的菌株數(shù)量的多少來確定?！?分離纖維素分解菌所用的兩種培養(yǎng)基比較種類制備方法原理用途舉例選擇培養(yǎng)基培養(yǎng)基中加入某些化學物質依據(jù)某些微生物對某些物質或環(huán)境條件的嗜好或抗性而設計從眾多微生物中“分離”所需的微生物,淘汰不需要的微生物加入青霉素分離得到酵母菌和霉菌鑒別培養(yǎng)基培養(yǎng)基中加入某種指示劑或化學藥品

依據(jù)微生物產(chǎn)生的某種代謝產(chǎn)物與培養(yǎng)基中的特定試劑或化學藥品反應,產(chǎn)生明顯的特征變化而設計

“鑒別”不同種類的微生物(注:未淘汰其他微生物)伊紅美藍培養(yǎng)基可以鑒別大腸桿菌2篩選微生物的兩個實例比較比較項目土壤中分解尿素的細菌的分離分解纖維素的微生物的分離方法利用以尿素為唯一氮源的選擇培養(yǎng)基進行選擇培養(yǎng)利用以纖維素為唯一碳源的選擇培養(yǎng)基進行選擇培養(yǎng)原理分解尿素的細菌能夠合成脲酶,故能在以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基上生長培養(yǎng)基中含有豐富的纖維素,能夠分解纖維素的微生物因具有更多的生存機會而大量繁殖鑒定在培養(yǎng)基中加入酚紅指示劑,指示劑變紅說明尿素被分解,從而說明菌落中的細菌為分解尿素的細菌剛果紅染色法,菌落周圍出現(xiàn)紅色消失的透明圈,該菌落為分解纖維素的微生物的菌落生命觀念清概念明結論1下列與分解纖維素的微生物的分離實驗有關的說法,錯誤的是能為纖維素分解菌提供碳源B纖維素分解菌的選擇培養(yǎng)基只能以纖維素粉作為唯一碳源C兩種剛果紅染色法篩選出來的目的菌不一定都能分解纖維素D實驗可以通過是否產(chǎn)生透明圈來篩選能分解纖維素的目的菌B解析]CMC-Na是水溶性羧甲纖維素鈉,是天然纖維素經(jīng)化學改性后得到的纖維素衍生物,能為纖維素分解菌提供碳源,A正確;纖維素分解菌的選擇培養(yǎng)基不一定要選擇纖維素粉作為唯一碳源,也可以選擇那些富含纖維素的物質,如濾紙等,B錯誤;兩種剛果紅染色法篩選出來的目的菌不一定都能分解纖維素,可能還會生長一些能利用纖維素分解的產(chǎn)物——葡萄糖的微生物,C正確;實驗可以通過是否產(chǎn)生透明圈來篩選能分解纖維素的目的菌,D正確。2在篩選纖維素分解菌的培養(yǎng)基中加入剛果紅染料,研究者觀察到幾個有透明圈的菌落。據(jù)圖11-34-6分析下列說法正確的是 A透明圈內的剛果紅染料已被分解B菌落②中的菌株降解纖維素能力最強C圖中菌落可能是細菌也可能是真菌D圖中培養(yǎng)基可用牛肉膏、蛋白胨配制C圖11-34-6透明圈不顯紅色的原因是其中的纖維素已被分解,A錯誤;菌落①形成的透明圈直徑與菌落直徑之比最大,說明菌落①降解纖維素能力最強,B錯誤;根據(jù)題干信息不能判斷圖中菌落的微生物類型,可能是細菌也可能是真菌,C正確;圖中培養(yǎng)基應以纖維素為唯一碳源,不可用牛肉膏、蛋白胨配制,D錯誤。圖11-34-6素養(yǎng)綜合重知識提能力3請回答下列問題:1某些微生物能分解纖維素,因為他們能產(chǎn)生纖維素酶。纖維素酶是一種復合酶,一般認為它至少包括三種組分,即C1酶、C酶和,前兩種酶使纖維素分解成。

葡萄糖苷酶纖維二糖纖維素酶是一種復合酶,包括C1酶、C酶和葡萄糖苷酶,前兩種酶使纖維素分解成纖維二糖,第三種酶將纖維二糖分解成葡萄糖。2實驗室中篩選微生物的原理是。篩選纖維素分解菌應先將從土壤中獲得的微生物在以為唯一碳源的液體培養(yǎng)基中進行選擇培養(yǎng),選擇培養(yǎng)的目的是。

人為提供有利于目的菌株生長的條件,同時抑制或阻止其他微生物生長纖維素選擇纖維素分解菌并增加其濃度實驗室中篩選微生物的原理是人為提供有利于目的菌株生長的條件,同時抑制或阻止其他微生物生長。篩選纖維素分解菌時在以纖維素作為唯一碳源的選擇培養(yǎng)基中,纖維素分解菌能夠很好地生長,其他微生物則不能生長,選擇培養(yǎng)的目的是增加纖維素分解菌的濃度。3用剛果紅染色法對分離出的微生物進行篩選,剛果紅可以與纖維素形成,當纖維素被纖維素酶分解后,培養(yǎng)基中會出現(xiàn)以纖維素分解菌為中心的。從培養(yǎng)基的用途上分類,剛果紅培養(yǎng)基屬于培養(yǎng)基。

紅色復合物透明圈鑒別在培養(yǎng)基中加入剛果紅,其可與培養(yǎng)基中的纖維素形成紅色復合物,當纖維素被分解后,剛果紅—纖維素紅色復合物不能形成,培養(yǎng)基中會出現(xiàn)以纖維素分解菌為中心的透明圈;纖維素分解菌可以用剛果紅染色法進行鑒別,能夠產(chǎn)生透明圈的菌落就是纖維素分解菌,所以剛果紅培養(yǎng)基屬于鑒別培養(yǎng)基。4某課題組就固氮菌和纖維素分解菌混合培養(yǎng)對纖維素降解的效果進行研究,實驗步驟大致如下:取250mL三角瓶裝入50mL基礎培養(yǎng)基,接種不同比例的混合菌種,放入濾紙條,150r/min搖床振蕩培養(yǎng)。根據(jù)濾紙條的分解情況測定纖維素酶的活性,實驗結果如下表。組別固氮菌接種量(%)纖維素分解菌接種量(%)纖維素酶活性Ⅰ2853.2Ⅱ4638.5Ⅲ6434.9Ⅳ01015.6Ⅴ100—1上述實驗中,培養(yǎng)基中填“需要”或“不需要”加入瓊脂,濾紙條的作用是。

2完成上述實驗時,還必須進行。

組別固氮菌接種量(%)纖維素分解菌接種量(%)纖維素酶活性Ⅰ2853.2Ⅱ4638.5Ⅲ6434.9Ⅳ01015.6Ⅴ100—不需要測定纖維素酶活性滅菌及無菌操作1據(jù)題干“搖床振蕩培養(yǎng)”可判斷該培養(yǎng)基為液體培養(yǎng)基,不需要加入瓊脂。濾紙條的成分為纖維素,通過濾紙條的分解情況可測定纖維素酶活性。2微生物培養(yǎng)的關鍵是滅菌和無菌操作,故完成題述實驗還需嚴格滅菌,并注意無菌操作。3由上表可得出如下實驗結論:。

組別固氮菌接種量(%)纖維素分解菌接種量(%)纖維素酶活性Ⅰ2853.2Ⅱ4638.5Ⅲ6434.9Ⅳ01015.6Ⅴ100—固氮菌與纖維素分解菌混合培養(yǎng)能促進纖維素降解的效果,且2%的固氮菌與8%的纖維素分解菌混合時促進效果最好分析題表,固氮菌和纖維素分解菌混合培養(yǎng)時,比單獨培養(yǎng)纖維素分解菌時,纖維素酶活性高,說明固氮菌與纖維素分解菌混合培養(yǎng)可促進纖維素降解的效果,在2%的固氮菌和8%的纖維素分解菌混合培養(yǎng)時促進效果最明顯。4有同學推測混合培養(yǎng)也能促進固氮菌的生長,理由是。若想比較Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅴ組的固氮菌數(shù)目,實驗思路如下:,最后統(tǒng)計各組固氮菌的菌落數(shù)。

組別固氮菌接種量(%)纖維素分解菌接種量(%)纖維素酶活性Ⅰ2853.2Ⅱ4638.5Ⅲ6434.9Ⅳ01015.6Ⅴ100—纖維素分解菌能為固氮菌提供碳源分別取Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅴ組等量菌液,進行相同倍數(shù)的稀釋,在無氮培養(yǎng)基平板上涂布,培養(yǎng)相同時間固氮菌為異養(yǎng)菌,纖維素分解菌分解纖維素產(chǎn)生的葡萄糖可以為固氮菌提供碳源,所以推測混合培養(yǎng)時可促進固氮菌生長。若要比較Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅴ組的固氮菌數(shù)目,需要測定微生物數(shù)量,常采用稀釋涂布平板法,實驗思路為分別取各組等量菌液,進行相同倍數(shù)的梯度稀釋,然后在無氮培養(yǎng)基平板上涂布,培養(yǎng)相同時間并計數(shù)。真題·新題五年真題1下列關于幾種微生物的營養(yǎng)代謝和生長繁殖的描述,正確的是A根瘤菌通過生物固氮,制造了含氮養(yǎng)料和含碳有機物B接種到培養(yǎng)基上的青霉菌,進入對數(shù)期能大量積累青毒素C培養(yǎng)液中溶氧量的變化,會影響酵母菌的生長繁殖和代謝途徑標記的噬菌體感染細菌,在新形成的噬菌體中都能檢測到C含碳有機物不是根瘤菌制造的,是植物光合作用制造的,A錯誤;接種到培養(yǎng)基上的青霉菌,進入穩(wěn)定期能大量積累青毒素,B錯誤;用32P標記的噬菌體感染細菌,在新形成的噬菌體中只有部分可以檢測到放射性,D錯誤。2下列關于產(chǎn)纖維素酶菌分離及運用的敘述,不合理的是A篩選培養(yǎng)基中應含有大量的葡萄糖或蔗糖提供生長營養(yǎng)B可從富含腐殖質的林下土壤中篩選產(chǎn)纖維素酶菌C在分離平板上長出的菌落需進一步確定其產(chǎn)纖維素酶的能力D用產(chǎn)纖維素酶菌發(fā)酵處理農(nóng)作物秸稈可提高其飼用價值A篩選培養(yǎng)基中的營養(yǎng)物質隨篩選目的的不同而不同,篩選產(chǎn)纖維素酶菌,培養(yǎng)基中應含有大量纖維素提供生長營養(yǎng),A錯誤。采集土樣時,可以選擇含纖維素豐富的環(huán)境,如富含腐殖質的林下土壤,B正確。在分離平板上長出的菌落,還需進行進一步實驗確定其產(chǎn)纖維素酶的能力,C正確。用產(chǎn)纖維素酶菌發(fā)酵處理農(nóng)作物秸稈可催化纖維素分解,提高其飼用價值,D正確。3篩選淀粉分解菌需使用以淀粉為唯一碳源的培養(yǎng)基。接種培養(yǎng)后,若細菌能分解淀粉,培養(yǎng)平板經(jīng)稀碘液處理,會出現(xiàn)以菌落為中心的透明圈如圖11-34-7,實驗結果見下表。圖11-34-7菌種菌落直:C(mm)透明圈直:H(mm)H/C細菌Ⅰ5.111.22.2細菌Ⅱ8.113.01.6有關本實驗的敘述,錯誤的是 A培養(yǎng)基除淀粉外還含有氮源等其他營養(yǎng)物質B篩選分解淀粉的細菌時,菌液應稀釋后涂布C以上兩種細菌均不能將淀粉酶分泌至細胞外值反映了兩種細菌分解淀粉能力的差異C本題考查微生物的培養(yǎng)、目的菌種的篩選以及菌種分解特定物質能力的判斷。培養(yǎng)微生物的培養(yǎng)基應含有碳源、氮源、水、無機鹽等營養(yǎng)物質,A項正確。為防止培養(yǎng)基上出現(xiàn)大量菌落,無法區(qū)分不同菌種對淀粉的分解情況,菌液應稀釋以后再涂布,這樣形成的菌落數(shù)量少,便于觀察形成透明圈的情況,B項正確。兩種細菌周圍都形成了透明圈,說明兩者都將菌體外的淀粉分解了,因此兩種細菌產(chǎn)生的淀粉酶都能分泌到細胞外,C項錯誤。H/C值可反映兩種細菌分解淀粉能力的差異,該值越大,說明細菌分解淀粉的能力越強,D項正確。圖11-34-7菌種菌落直:C(mm)透明圈直:H(mm)H/C細菌Ⅰ5.111.22.2細菌Ⅱ8.113.01.64下列關于微生物實驗操作的敘述,錯誤的是A培養(yǎng)微生物的試劑和器具都要進行高壓蒸汽滅菌B接種前后,接種環(huán)都要在酒精燈火焰上進行灼燒C接種后的培養(yǎng)皿要倒置,以防培養(yǎng)污染D菌種分離和菌落計數(shù)都可以使用固體培養(yǎng)基A接種工具可以進行灼燒滅菌,能耐高溫、需要保持干燥的物品如玻璃器皿吸管、培養(yǎng)皿和金屬用具等,可采用干熱滅菌,A錯誤。接種前灼燒接種環(huán)是為了避免接種環(huán)上可能存在的微生物污染培養(yǎng)基,接種結束后灼燒接種環(huán)是為了及時殺死其上殘留的菌種,B正確。接種后的培養(yǎng)皿要倒置,以防培養(yǎng)污染,C正確。菌種分離使用的選擇培養(yǎng)基可以是固體培養(yǎng)基,菌落計數(shù)可使用稀釋涂布平板法,其培養(yǎng)基是固體培養(yǎng)基,D正確。5已知一種有機物僅含有C、H兩種元素不易降解,會造成環(huán)境污染。某小組用三種培養(yǎng)基篩選土壤中能高效降解的細菌目標菌。Ⅰ號培養(yǎng)基:在牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基中加入5g/L。Ⅱ號培養(yǎng)基:氯化鈉5g/L,硝酸銨3g/L,其他無機鹽適量,15g/L。Ⅲ號培養(yǎng)基:氯化鈉5g/L,硝酸銨3g/L,其他無機鹽適量,45g/L?；卮鹣铝袉栴}。1在Ⅰ號培養(yǎng)基中,為微生物提供氮源的是。Ⅱ、Ⅲ號培養(yǎng)基中為微生物提供碳源的有機物是。

牛肉膏、蛋白胨本題考查微生物的培養(yǎng)。1Ⅰ號培養(yǎng)基中的牛肉膏和蛋白胨可為微生物提供氮源,僅含C、H兩種元素;Ⅱ、Ⅲ號培養(yǎng)基中只有含有碳元素,故Ⅱ、Ⅲ號培養(yǎng)基中為微生物提供碳源的有機物是。2若將土壤懸浮液接種在Ⅱ號液體培養(yǎng)基中,培養(yǎng)一段時間后,不能降解的細菌比例會,其原因是。

下降不能降解的細菌因缺乏碳源不能增殖,而能降解的細菌能夠增殖土壤懸浮液中的細菌在培養(yǎng)基上生長繁殖必須從培養(yǎng)基中獲得水、碳源、氮源和無機鹽等物質,Ⅱ號液體培養(yǎng)基中提供碳源的物質僅有,不能降解的細菌因缺乏碳源不能增殖,而能降解的細菌能夠增殖。3Ⅱ號培養(yǎng)基加入瓊脂后可以制成固體培養(yǎng)基,若要以該固體培養(yǎng)基培養(yǎng)目標菌并對菌落進行計數(shù),接種時,應采用的方法是。

稀釋涂布平板法接種的方法一般有平板劃線法和稀釋涂布平板法,其中稀釋涂布平板法是將菌液進行一系列的梯度稀釋,然后將不同稀釋度的菌液分別涂布到瓊脂固體培養(yǎng)基的表面進行培養(yǎng)。在稀釋度足夠高的菌液里,聚集在一起的微生物將被分散成單個細胞,從而在培養(yǎng)基的表面形成單菌落,此時可對菌落進行計數(shù)。4假設從Ⅲ號培養(yǎng)基中得到了能高效降解的細菌,且該菌能將代謝為丙酮酸,則在有氧條件下,丙酮酸可為該菌的生長提供和。

能量合成其他物質的原料在有氧條件下,該細菌可利用丙酮酸進行有氧呼吸,丙酮酸為該細菌的生長提供能量,同時該細菌內的酶類也可催化丙酮酸轉化為細菌生長需要的其他物質。6物質W是一種含氮有機物,會污染土壤。W在培養(yǎng)基中達到一定量時培養(yǎng)基表現(xiàn)為不透明。某研究小組欲從土壤中篩選出能降解W的細菌目標菌?；卮鹣铝袉栴}。1要從土壤中分離目標菌,所用選擇培養(yǎng)基中的氮源應該是。

W本題考查目標菌種的篩選以及對酶活力的鑒定。1若篩選能降解W的細菌,培養(yǎng)基中的氮源應為W,這樣只有目標菌可以存活,其他菌因缺乏可利用的氮源不能存活。2在從土壤中分離目標菌的過程中,發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)基上甲、乙兩種細菌都能生長并形成菌落如圖11-34-8所示。如果要得到目標菌,應該選擇菌落進一步純化,選擇的依據(jù)是。

圖11-34-8乙乙菌落周圍出現(xiàn)透明圈,說明乙菌能降解W根據(jù)圖示可以看到,乙細菌菌落周圍形成了透明圈,甲細菌菌落周圍沒有形成透明圈,說明乙細菌可以降解W。3土壤中的某些微生物可以利用空氣中的氮氣作為氮源。若要設計實驗進一步確定甲、乙菌能否利用空氣中的氮氣作為氮源,請簡要寫出實驗思路、預期結果和結論,即

。

將甲、乙菌分別接種在無氮源培養(yǎng)基上,若細菌能生長,則說明該細菌能利用空氣中的氮氣作為氮源若要確定甲、乙細菌能否利用空氣中的氮氣作為氮源,需將甲、乙菌分別接種在無氮培養(yǎng)基上,若細菌能生長,則說明該細菌可以利用空氣中的氮氣作為氮源。4該小組將人工合成的一段DNA轉入大腸桿菌,使大腸桿菌產(chǎn)生能降解W的酶酶E。為了比較酶E與天然酶降解W能力的差異,該小組擬進行如下實驗,請完善相關內容。①在含有一定濃度W的固體培養(yǎng)基上,A處滴加含有酶E的緩沖液,B處滴加含有相同濃度天然酶的緩沖液,C處滴加,三處滴加量相同。

②一段時間后,測量透明圈的直徑。若C處沒有出現(xiàn)透明圈,說明;若A、B處形成的透明圈直徑大小相近,說明。

酶E與天然酶降解W的能力相近緩沖液緩沖液不能降解W①根據(jù)實驗的單一變量原則,A、B處滴加的都是含有相應酶的緩沖液,為確定緩沖液能否降解W排除其對實驗的干擾,對照組需滴加等量的緩沖液;②如果在緩沖液周圍不出現(xiàn)透明圈,說明緩沖液不能降解W;如果A、B處形成的透明圈直徑大小相近,說明酶E和天然酶降解W的能力相近。新題精選1不定選生長圖形法是一種測定微生物營養(yǎng)需求的簡便方法。為探究某嗜熱菌所需生長因子的種類,研究小組把該菌的懸浮液與不含任何生長因子但含有其他必需營養(yǎng)物質的培養(yǎng)基混合后倒成平板,然后在平板上劃分數(shù)區(qū),將甲、乙、丙三種生長因子分別添加到不同區(qū)域,培養(yǎng)結果如圖所示,下列說法正確的是 A倒成平板后直接培養(yǎng)可判斷有無污染B倒成平板后需要進行滅菌處理C圖示結果表明該菌需要生長因子乙或丙D生長圖形法還可用于某些菌種的篩選AD圖11-34-9倒平板后不接種任何菌種直接進行培養(yǎng)觀察有無菌落出現(xiàn),可以判斷培養(yǎng)基有無污染,A正確;在制作培養(yǎng)基的過程中,需要先進行滅菌再倒平板,B錯誤;分析題圖可知,嗜熱菌在添加了乙、丙生長因子的區(qū)域生長,故該菌需要的生長因子是乙和丙,C錯誤;不同的菌種所需的生長因子不同,生長圖形法可用于某些菌種的篩選,某菌種只會在提供了其需要的生長因子的區(qū)域生長,D正確。圖11-34-92殺蟲脒,又名氯苯脒,是一種有機氮農(nóng)藥,具有高效廣譜殺蟲殺螨的作用,但長期使用容易導致土壤污染,為探究能降解殺蟲脒的細菌,研究人員進行了圖11-34-10所示實驗?；卮鹣铝袉栴}:1微生物生長繁殖所需的主要營養(yǎng)物質有碳源、、水、無機鹽四類,該實驗所用的選擇培養(yǎng)基只能以殺蟲脒作為唯一碳源,其原因是,從功能上講,該培養(yǎng)基屬于培養(yǎng)基。

圖11-34-10氮源只有能利用殺蟲脒的微生物才能正常生長和繁殖選擇微生物生長所需的營養(yǎng)物質有碳源、氮源、水和無機鹽。該實驗的目的是篩選能降解殺蟲脒的細菌,所以應使用以殺蟲脒為唯一碳源的培養(yǎng)基,在此培養(yǎng)基上只有能降解殺蟲脒的細菌能夠生長。這種培養(yǎng)基屬于選擇培養(yǎng)基。圖11-34-102微生物接種的方法很多,最常用的是平板劃線法和稀釋涂布平板法,這兩種方法在功能上的區(qū)別是,此外,也是測定微生物數(shù)量的常用方法。

稀釋涂布平板法可以用于統(tǒng)計樣品中活菌數(shù)目而平板劃線法不可以顯微鏡直接計數(shù)法平板劃線法和稀釋涂布平板法是常用的兩種接種方法,其中稀釋涂布平板法能夠統(tǒng)計樣品中的活菌數(shù)目,而平板劃線法不能。測定微生物數(shù)量的另一常用方法是顯微鏡直接計數(shù)法。3為了篩選出高效菌株,可比較單菌落周圍分解圈的大小,分解圈大說明該菌株的降解能力。

強高效降解殺蟲脒的菌種能降解菌落周圍的殺蟲脒,從而形成分解圈,降解能力越強,形成的分解圈會越大。4通常情況下,在微生物培養(yǎng)過程中實驗室常用的滅菌方法有灼燒滅菌、干熱滅菌和。培養(yǎng)基一般不使用干熱滅菌的原因是。

高壓蒸汽滅菌濕度低會破壞培養(yǎng)基中的營養(yǎng)成分微生物培養(yǎng)過程中,常用的滅菌方法有高壓蒸汽滅菌、干熱滅菌和灼燒滅菌。培養(yǎng)基常使用高壓蒸汽滅菌法滅菌,干熱滅菌法濕度低,會破壞培養(yǎng)基中的營養(yǎng)成分,因此不適合對培養(yǎng)基進行干熱滅菌。1P14在實驗室培養(yǎng)微生物,一方面需要為培養(yǎng)的微生物提供合適的營養(yǎng)和環(huán)境條件,另一方面需要確保無處不在的其他微生物無法混入。2P15牛肉膏和蛋白胨有機氮等營養(yǎng)物質。3P15無菌技術除了用來防止實驗室的培養(yǎng)物被其他外來微生物的污染外,還能有效避免操作者自身被微生物感染。4P18微生物的接種技術還包括斜面接種、穿刺接種等方法。雖然這些技術的操作方法各不相同,但其核心都是要防止雜菌的污染,保證培養(yǎng)物的純度。5P24分離不同的微生物要采用不同的稀釋度,因為土壤中各類微生物的數(shù)量是不同的。6P24一般來說,在一定的培養(yǎng)條件下,同種微生物表現(xiàn)出穩(wěn)定的菌落特征。這些特征包括菌落的形狀、大小、隆起程度和顏色等方面。7P26細菌的數(shù)目還可以通過濾膜法來測定以測定飲用水中大腸桿菌的數(shù)目為例。將已知體積的水過濾后,將濾膜放在伊紅美藍培養(yǎng)基上培養(yǎng)。在該培養(yǎng)基上,大腸桿菌的菌落呈現(xiàn)黑色。可以根據(jù)培養(yǎng)基上黑色菌落的數(shù)目,計算出水樣中大腸桿菌的數(shù)量。8P29選擇培養(yǎng)能夠“濃縮”所需的微生物,原因是在選擇培養(yǎng)的條件下,可以使那些能夠適應這種營養(yǎng)條件的微生物得到迅速增殖,而那些不適應這種營養(yǎng)條件的微生物的繁殖受到抑制,從而達到“濃縮”作用。1生物降解法是常用的降解農(nóng)藥的方法,某研究小組為分離出能降解敵敵畏一種有毒的有機農(nóng)藥的細菌,進行了以下相關操作。回答下列問題:1分離原理:土壤中的某種細菌能合成,這種物質在把敵敵畏分解成無機物過程中發(fā)揮重要作用。

分解敵敵畏的酶土壤中的某種細菌能將敵敵畏分解成無機物,說明該細菌能合成分解敵敵畏的酶。2實驗流程:①從富含敵敵畏的環(huán)境中采集土樣配制成土壤菌液。從稀釋10倍的菌液中取1mL菌液,加入中,獲得稀釋100倍的菌懸液,如此操作直到稀釋1000倍。

②配制以為唯一碳源的培養(yǎng)基并滅菌,滅菌后倒平板,冷卻后需將平板倒置,目的是。

③用法接種細菌,該方法能成功統(tǒng)計菌落數(shù)目的關鍵是選擇恰當?shù)?統(tǒng)計的菌落數(shù)通常比實際數(shù)目低的原因是。

9mL無菌水敵敵畏防止皿蓋上凝結的水珠落入培養(yǎng)基造成污染稀釋涂布平板稀釋度當兩個或多個細胞連在一起時,平板上觀察到的只是一個菌落①從稀釋10倍的菌液中取1mL菌液,加入9mL無菌水中,就可以將菌液稀釋到100倍。②要將能分解敵敵畏的細菌分離出來,則要配制以敵敵畏為唯一碳源的培養(yǎng)基,為防止皿蓋上凝結的水珠落入培養(yǎng)基造成污染,待平板冷卻后需將平板倒置。③接種該細菌時采用稀釋涂布平板法,該方法能成功統(tǒng)計菌落數(shù)目的關鍵是選擇恰當?shù)南♂尪?當兩個或多個細胞連在一起時,平板上觀察到的只是一個菌落,故利用該方法統(tǒng)計的菌落數(shù)通常比實際數(shù)目低。2淀粉酶可以通過微生物發(fā)酵生產(chǎn)。某科研小組想利用誘變育種的方法獲得淀粉酶高產(chǎn)菌株,從而提高酶的產(chǎn)量?；卮鹣铝袉栴}:1實驗步驟:第一步:將菌株分為兩組,甲組用一定劑量的誘變劑處理,乙組不處理,作對照。第二步:配制填“固體”或“液體”培養(yǎng)基,該培養(yǎng)基的碳源應為。

第三步:將甲、乙兩組的菌株采用法進行接種,以便使菌落分布較均勻,然后放在相同且適宜條件下培養(yǎng)。

第四步:菌落形成后加入染色,比較兩組菌株菌落周圍透明圈的大小。

固體淀粉稀釋涂布平板碘液第二步:篩選菌株用固體培養(yǎng)基,該實驗是為了篩選淀粉酶高產(chǎn)菌株,因此該培養(yǎng)基的碳源應為淀粉。第三步:將甲、乙兩組的菌株采用稀釋涂布平板法進行接種,以便使菌落分布較均勻,然后放在相同且適宜條件