辣根過氧化物酶對(duì)大鼠下丘腦室旁核和終紋床核的射交反應(yīng)

辣根過氧化物酶對(duì)大鼠下丘腦室旁核和終紋床核的射交反應(yīng)

根據(jù)現(xiàn)代研究，大腦周圍的核（pvn）、最終紋尿核（bnst）和前額葉皮層（pbc）與情感反應(yīng)密切相關(guān)。然而，是否存在直接的神經(jīng)聯(lián)系及其在調(diào)節(jié)情緒方面的相關(guān)性尚不清楚。本文利用HRP既可逆向追蹤又可順向追蹤的特點(diǎn),通過將HRP分別注射到PVN和BNST區(qū),對(duì)PVN與BNST之間、PVN與PFC之間以及BNST與PFC之間的神經(jīng)纖維聯(lián)系進(jìn)行研究,為進(jìn)一步研究PFC、BNST和PVN之間的功能聯(lián)系提供解剖學(xué)基礎(chǔ)。1材料和方法1.1動(dòng)物組成年雄性SPF級(jí)SD大鼠8只(安徽省動(dòng)物中心),體重250～300g,分為PVN注射組和BNST注射組,每組4只。1.2asson圖譜動(dòng)物經(jīng)7%水合氯醛腹腔麻醉(10mL/kg)后開顱,將開顱后的大鼠固定于腦立體定位儀上(ZH-藍(lán)星C,淮北正華),參照Paxinos-Waston圖譜,采用1μL微量進(jìn)樣器(上海高鴿)將0.15μL的20%HRP(Sigma公司)定向注入。PVN注射組注入左側(cè)PVN,注射坐標(biāo)為(mm):冠矢點(diǎn)后1.5～1.6,旁開0.3～0.4,進(jìn)針深度7.8～7.9;BNST注射組注入左側(cè)BNST,注射坐標(biāo)為(mm):冠矢點(diǎn)后0.2～0.3,旁開1.4～1.5,進(jìn)針深度6.5～6.6。進(jìn)針后停針5min開始注射,注射時(shí)間為20min,注畢留針10min。1.3pvn、bnst腦片動(dòng)物的分離和誘導(dǎo)表達(dá)動(dòng)物存活48h后用7%水合氯醛腹腔淺麻,斷頭取腦,含4%多聚甲醛的PB固定2d,在含10%、20%、30%蔗糖的PB中(4℃)沉底移行。切取PFC,BNST至PVN間腦段,行冠狀凍切(LEICACM1900型),片厚30μm。PVN注射組對(duì)PVN部位行DAB法呈色,確定HRP準(zhǔn)確注射到PVN的動(dòng)物,對(duì)該動(dòng)物的PFC段、含BNST區(qū)的腦片行DAB顯色,脫水,透明,封固。顯微鏡(NikonE800)下觀察、拍照。BNST注射組對(duì)BNST部位行DAB法呈色,確定HRP準(zhǔn)確注射到BNST的腦片動(dòng)物,對(duì)該動(dòng)物的PFC段、含PVN區(qū)的腦片行DAB顯色,脫水,透明,封固。顯微鏡(NikonE800)下觀察、拍照。2bnst注射對(duì)hrp的影響每組動(dòng)物中均選擇HRP注射區(qū)準(zhǔn)確位于PVN或BNST的大鼠進(jìn)行觀察。經(jīng)DAB呈色后光鏡下觀察,PVN注射組4例大鼠中有2例HRP注射區(qū)局限于PVN內(nèi)(圖1A),將HRP注射入左側(cè)的PVN后,HRP逆行標(biāo)記的神經(jīng)元在BNST區(qū)主要局限于注射區(qū)同側(cè)(圖1B),對(duì)側(cè)BNST內(nèi)未見HRP逆行標(biāo)記神經(jīng)元。高倍鏡下觀察,BNST內(nèi)的HRP逆標(biāo)神經(jīng)元以雙級(jí)或梭形細(xì)胞為主,少數(shù)神經(jīng)元呈多突形,少數(shù)多突形神經(jīng)元有明顯的長突起,胞漿內(nèi)呈均勻的棕黃色,PFC處同側(cè)和對(duì)側(cè)均未見標(biāo)記的細(xì)胞或軸突。BNST注射組經(jīng)DAB呈色后光鏡下觀察,4例大鼠中有3例HRP注射區(qū)局限于BNST內(nèi)(圖1C),將HRP注射入左側(cè)的BNST后,HRP順行標(biāo)記的軸突末梢散在局限于注射區(qū)同側(cè)的PVN區(qū)域及第三腦室的室周區(qū)(圖1D),對(duì)側(cè)區(qū)也有極少量的分布。高倍鏡下觀察,PVN區(qū)內(nèi)的HRP順行標(biāo)記軸突末梢呈點(diǎn)狀,軸漿內(nèi)呈棕黃色。PFC處的同側(cè)和對(duì)側(cè)均未見HRP標(biāo)記的細(xì)胞或軸突。3丘腦-腰椎-腎上腺素皮質(zhì)hpa軸和神經(jīng)核團(tuán)pvn神經(jīng)束路追蹤技術(shù)對(duì)示蹤劑的基本要求是注射區(qū)局限、追蹤的靈敏度高、追蹤結(jié)果便于觀察和保存。為了確認(rèn)逆行追蹤結(jié)果的可靠性,還常常需要用順行追蹤方法來驗(yàn)證,反之亦然。本研究選用了傳統(tǒng)的、具有逆行和順行示蹤功能的HRP作為示蹤劑,將其注入PVN區(qū)以觀察PVN向BNST和PFC的上行投射,又將其注入BNST區(qū)以觀察BNST向PFC的上行投射及向PVN的下行投射,在確認(rèn)靶區(qū)準(zhǔn)確并局限的前提下,用DAB法呈色,觀察PVN與BNST之間、PVN與PFC之間以及BNST與PFC之間是否存在直接的神經(jīng)通路。近年來,隨著應(yīng)激假說的提出,下丘腦在抑郁癥發(fā)病中的中樞調(diào)節(jié)機(jī)制越來越受到人們的關(guān)注。按應(yīng)激假說,腦內(nèi)應(yīng)激機(jī)制的過度驅(qū)動(dòng)是導(dǎo)致抑郁癥的重要因素,下丘腦-垂體-腎上腺皮質(zhì)(HPA)軸是應(yīng)激反應(yīng)的最后通路,PVN促腎上腺皮質(zhì)激素釋放激素(CRH)神經(jīng)元是應(yīng)激反應(yīng)的中樞驅(qū)動(dòng)力。大量的研究證實(shí),抑郁癥發(fā)生過程中,下丘腦-垂體-性腺(HPG)軸發(fā)生改變,血漿皮質(zhì)類固醇水平升高、生長減緩、腎上腺重量增加、胸腺重量降低,海馬等邊緣系統(tǒng)的體積減小和細(xì)胞丟失,腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子表達(dá)減少,糖皮質(zhì)激素和興奮性神經(jīng)遞質(zhì)水平提高,神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞增生以及神經(jīng)再生二次抑制],提示抑郁癥的發(fā)生是患者體內(nèi)多種生物化學(xué)、生理學(xué)及組織學(xué)方面的異常變化通過HPA軸共同作用的結(jié)果。Davis等的研究表明,BNST在機(jī)體面臨威脅性情境時(shí),可能主要負(fù)責(zé)處理焦慮信息。焦慮刺激信息在傳入丘腦和相應(yīng)皮質(zhì)后輸入杏仁基底外側(cè)核,BNST接受來自杏仁基底外側(cè)核的被處理過的感覺信息后,投射到參與介導(dǎo)恐懼和焦慮的特異性癥狀和體征的下丘腦和腦干等部位,由它們調(diào)節(jié)機(jī)體對(duì)焦慮刺激的生理和行為反應(yīng)。PFC是所有皮層中功能最復(fù)雜、了解最少的部位,目前普遍認(rèn)為其與意識(shí)、思維、想象、運(yùn)動(dòng)的組織和計(jì)劃、注意等有關(guān)。研究證據(jù)顯示,PFC與下丘腦在抑郁癥發(fā)病中都起到一定的作用,但PFC在抑郁癥發(fā)病中的作用是否通過HPA軸實(shí)現(xiàn)并不清楚。PFC與中樞神經(jīng)系統(tǒng)其他核團(tuán)的神經(jīng)回路特別是與PVN之間的功能聯(lián)系正越來越受到人們的關(guān)注。以往的研究表明,PVN與腦內(nèi)的許多神經(jīng)核團(tuán)具有廣泛的神經(jīng)聯(lián)系。根據(jù)Sawchenko和Roland的研究,PVN主要接受背中核、視交叉內(nèi)側(cè)、第三腦室前腹面區(qū)和腹內(nèi)側(cè)區(qū)、BNST及下丘腦室旁核鄰近部位的直接神經(jīng)投射,BNST是前腦傳入下丘腦室旁核主要的直接傳入聯(lián)系核團(tuán),也是杏仁核中央亞核、內(nèi)側(cè)前額皮質(zhì)和外側(cè)隔區(qū)等腦區(qū)傳入下丘腦室旁核的間接的中繼核團(tuán)。我們的實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)一步證實(shí)了BNST確有神經(jīng)纖維投射到PVN,但要證實(shí)當(dāng)機(jī)體面臨威脅性情境時(shí),BNST是否可以通過其對(duì)PVN的神經(jīng)投射激活HPA軸,刺激腎上腺皮質(zhì)合成和分泌糖皮質(zhì)類固