原代培養(yǎng)定稿

細(xì)胞原代培養(yǎng)

(Cellprimaryculture)

實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/p>

了解細(xì)胞體外培養(yǎng)的原理、基本方法，掌握無菌操作方法及注意事項(xiàng)。學(xué)習(xí)觀察體外培養(yǎng)細(xì)胞的形態(tài)及生長(zhǎng)狀況。實(shí)驗(yàn)原理

用直接從機(jī)體獲得的細(xì)胞進(jìn)行的培養(yǎng)稱為原代培養(yǎng)。這種培養(yǎng)過程主要是采用無菌操作的方法，把組織（或器官）從動(dòng)物體內(nèi)取出，經(jīng)酶消化處理，使分散成單個(gè)細(xì)胞，然后在人工條件下培養(yǎng)，使其不斷地生長(zhǎng)和繁殖。原代培養(yǎng)是建立各種細(xì)胞系的第一步。組織塊培養(yǎng)法將組織剪成小塊后，接種于培養(yǎng)瓶，24小時(shí)貼壁后，細(xì)胞就從組織周圍長(zhǎng)出。培養(yǎng)瓶底預(yù)先涂以膠原薄層，以利上皮細(xì)胞的生長(zhǎng)。如需做組織染色或電鏡檢查，可將組織可放入小蓋玻片上后再放進(jìn)培養(yǎng)瓶培養(yǎng)。換液需輕巧，以免組織塊漂起，細(xì)胞死亡。消化培養(yǎng)法

采用前述的組織消化分散法。將妨礙細(xì)胞生長(zhǎng)的細(xì)胞間質(zhì)去除，使細(xì)胞分散，形成懸液，按不同濃度接種培養(yǎng)瓶培養(yǎng)。

實(shí)驗(yàn)儀器超凈工作臺(tái)，壓力蒸汽消毒器，電熱干燥箱，濾器，酸缸CO2培養(yǎng)箱倒置顯微鏡自動(dòng)雙重純水蒸餾器，純水儀耗材：培養(yǎng)瓶，吸管，電動(dòng)吸引器，培養(yǎng)瓶

超凈臺(tái)超凈工作臺(tái)的工作原理是利用鼓風(fēng)機(jī)驅(qū)動(dòng)空氣遁過高效濾器，除去空氣中的塵埃顆粒，使空氣得到凈化。凈化空氣徐徐通過工作臺(tái)面，使工作臺(tái)內(nèi)構(gòu)成無菌環(huán)境。濾器濾器工作原理

CO2培養(yǎng)箱CO2培養(yǎng)箱設(shè)定的條件為37℃，5％CO2。使用CO2培養(yǎng)箱應(yīng)注意的問題：①用螺旋口瓶培養(yǎng)細(xì)胞時(shí)，需將瓶蓋微松，以保證通氣。②保持培養(yǎng)箱內(nèi)空氣干凈。定期消毒（90℃，14h)。③箱內(nèi)無菌蒸餾水3000毫升蒸餾水槽中以保持箱內(nèi)濕度，避兔培養(yǎng)液蒸發(fā)。超凈臺(tái)倒置顯微鏡自動(dòng)雙重純水蒸餾器純水儀培養(yǎng)板

培養(yǎng)瓶實(shí)驗(yàn)材料

3齡的乳鼠或乳兔實(shí)驗(yàn)試劑

（1）1640-RPMI培養(yǎng)液（2）

小牛血清（3）

青、鏈霉素（4）PBS液（5）

5％NaHCO3（6）

75％酒精實(shí)驗(yàn)步驟

一、培養(yǎng)前的準(zhǔn)備工作

（1）

清洗與消毒（2