血液學血細胞化學染色課件

第三章

血細胞化學染色

1醫(yī)學ppt第三章

血細胞化學染色1醫(yī)學ppt一、概述（一）研究對象

外周血和骨髓新鮮涂片單個細胞中的化學物質：

酶類、脂類、糖類、鐵、蛋白質、核酸等

2醫(yī)學ppt一、概述2醫(yī)學ppt

（二）臨床應用1.鑒別各類血細胞2.輔助血液系統(tǒng)等疾病診斷和鑒別診斷3.觀察疾病療效和判斷預后

3醫(yī)學ppt

（二）臨床應用1.鑒別各類血細胞3醫(yī)學p

二、常用細胞化學染色方法

過氧化物酶染色中性粒細胞堿性磷酸酶染色過碘酸-雪夫反應α-醋酸萘酚酯酶染色鐵染色

4醫(yī)學ppt

過氧化物酶染色

（peroxidase,POX）

5醫(yī)學ppt過氧化物酶染色

（peroxidase,POX

新生態(tài)氧[O]↑過氧化氫（基質中）四甲基聯(lián)苯胺（無色）聯(lián)苯胺藍（藍色）亞硝基鐵氰化鈉藍色顆粒（漿內酶部位）粒、單核細胞胞漿【原理】6醫(yī)學pptPOX新生態(tài)氧過氧化氫四甲基聯(lián)苯胺聯(lián)苯胺藍（藍色）亞硝基鐵【結果判斷】

-、+、++、+++、++++弱陽性顆粒小，分布稀疏陽性顆粒稍粗，分布較密集強陽性顆粒粗大，密布于整個胞漿7醫(yī)學ppt【結果判斷】7醫(yī)學ppt【正常血細胞染色反應】1.粒細胞系統(tǒng)

POX主要存在于粒系細胞中。分化差的原粒細胞陰性;分化好的原粒細胞至中性成熟粒細胞各階段均呈陽性，陽性反應程度隨細胞的成熟逐漸增強。

8醫(yī)學ppt【正常血細胞染色反應】8醫(yī)學ppt

2.單核細胞系統(tǒng)陰性或弱陽性3.淋巴細胞系統(tǒng)紅細胞系統(tǒng)巨核細胞系統(tǒng)陰性漿細胞組織細胞

9醫(yī)學ppt9醫(yī)學ppt10醫(yī)學ppt10醫(yī)學ppt【臨床評價】

急性髓細胞白血病急性淋巴細胞白血病

鑒別11醫(yī)學ppt【臨床評價】鑒別11醫(yī)學ppt

1.急性髓細胞白血?。?）急性粒細胞白血病

陽性反應

（2）急性單核細胞白血病

弱陽性反應12醫(yī)學ppt1.急性髓細胞白血病12醫(yī)學ppt

2.急性淋巴細胞白血病

陰性反應或陽性率<3%(殘留原粒細胞)13醫(yī)學ppt2.急性淋巴細胞白血病13醫(yī)學ppt

中性粒細胞堿性磷酸酶染色

（neutrophilicalkaline

phosphatase，NAP）14醫(yī)學ppt中性粒細胞堿性磷酸酶染色

（neutrop磷酸萘酚鈉（基質中）中性粒細胞胞漿中NAP磷酸鈉α-萘酚

重氮鹽（堅牢藍鹽RR）＋紫黑色偶氮染料

（胞漿中）水解【原理】Kaplow偶氮偶聯(lián)法15醫(yī)學ppt磷酸萘酚鈉中性粒細胞胞漿中NAP磷酸鈉α-萘酚重氮鹽＋紫黑【結果判斷】

胞漿中有紫黑色顆粒為陽性(+~++++）16醫(yī)學ppt【結果判斷】16醫(yī)學ppt【正常血細胞染色反應】1.中性成熟粒細胞陽性反應其他細胞呈陰性反應17醫(yī)學ppt【正常血細胞染色反應】1.中性成熟粒細胞陽性反應17醫(yī)18醫(yī)學ppt18醫(yī)學ppt

2.NAP積分值計數(shù)100個成熟中性粒細胞（桿狀和分葉）,分別記錄其分級情況：

19醫(yī)學ppt19醫(yī)學ppt(-)0分(+)1分(++)2分(+++)3分(++++)4分

陽性率全部陽性反應細胞之和

積分值各種陽性程度細胞的分值之和20醫(yī)學ppt(-)0分20醫(yī)學ppt3.參考值

積分值35-70分

(各實驗室參考值不同)

21醫(yī)學ppt3.參考值

積分值35-70分

(各實驗室【臨床評價】（1）細菌性感染與病毒性感染

（尤其是化膿性感染）

明顯增加無明顯變化22醫(yī)學ppt22醫(yī)學ppt(2）類白血病反應與慢性粒細胞白血病明顯增加明顯下降且常為零分，緩解時又上升到正常23醫(yī)學ppt(2）類白血病反應與慢性粒細胞白血病23醫(yī)學ppt過碘酸-雪夫反應

(糖原染色)

（periodicacid-Schiffreaction，PAS）24醫(yī)學ppt過碘酸-雪夫反應

(糖原染色)

（periodica雙醛基過碘酸雪夫試劑中的無色品紅

紫紅色化合物(附于含多糖類的胞漿內)乙二醇基(多糖類物質含有)氧化【原理】25醫(yī)學ppt雙醛基過碘酸雪夫試劑中紫紅色化合物乙二醇基氧化【原理【結果判斷】陽性胞漿內紅色陽性物呈彌散狀、顆粒狀或塊狀。陰性胞漿內無色或無顆粒,核淡綠。

26醫(yī)學ppt【結果判斷】陽性胞漿內紅色陽性物呈彌散狀、顆26醫(yī)學pp【正常血細胞染色反應】1.粒細胞系統(tǒng)分化差的原粒細胞為陰性；分化好的原粒細胞至中性分葉核粒細胞各階段均呈陽性反應，陽性程度隨細

胞的成熟逐漸增強。

陽性物呈細顆粒、均勻紅色。27醫(yī)學ppt【正常血細胞染色反應】1.粒細胞系統(tǒng)27醫(yī)學ppt2.紅細胞系統(tǒng)

陰性3.單核細胞系統(tǒng)

絕大多數(shù)陽性呈細顆粒，有時分布于細胞邊緣的陽性顆粒較粗大。28醫(yī)學ppt2.紅細胞系統(tǒng)28醫(yī)學ppt4.淋巴細胞系統(tǒng)

大多數(shù)淋巴細胞呈陰性；

少于20%淋巴細胞呈粗顆粒狀或塊狀陽性。5.巨核細胞系統(tǒng)

呈顆粒狀或塊狀陽性（含血小板）。29醫(yī)學ppt29醫(yī)學ppt【臨床評價】1.紅血病或紅白血病幼紅細胞陽性巨幼細胞性貧血幼紅細胞陰性

30醫(yī)學ppt【臨床評價】1.紅血病或紅白血病幼紅細胞陽性30醫(yī)學p31醫(yī)學ppt31醫(yī)學ppt3.鑒別急性白血病類型（1）急性淋巴細胞白血病

陽性率20%-80%，呈紅色粗顆粒狀或塊狀。32醫(yī)學ppt3.鑒別急性白血病類型（1）急性淋巴細胞白血病32醫(yī)學（2）急性粒細胞白血病

少數(shù)陽性，呈細顆粒狀或均勻紅色。（3）急性單核細胞白血病

可陽性，呈細顆粒狀、彌散分布，有時胞質邊緣處顆粒較粗大。33醫(yī)學ppt（2）急性粒細胞白血病33醫(yī)學pptα-醋酸萘酚酯酶染色

（α-naphtholacetateesterase，α-NAE）34醫(yī)學pptα-醋酸萘酚酯酶染色

（α-naphtholaα-醋酸萘酚酯酶（細胞內）α-醋酸萘酚（基質液中）α-萘酚

重氮鹽（堅牢藍B）胞漿不溶性灰黑色或棕黑色沉淀水解【原理】35醫(yī)學pptα-醋酸萘酚酯酶α-醋酸萘酚α-萘酚重氮鹽胞漿不溶性灰黑色【結果判斷】

胞漿內有灰黑色或棕黑色彌散性顆粒狀沉淀為陽性。36醫(yī)學ppt【結果判斷】36醫(yī)學ppt

氟化鈉抑制試驗

在基質液中加入適量NaF,其余染色方法同上。兩種方法染色后用油鏡計數(shù)100或200個被檢細胞，分別計算出抑制前和抑制后的陽性率或陽性積分。37醫(yī)學ppt37醫(yī)學ppt

氟化鈉抑制率=抑制前陽性率或陽性積分-抑制后陽性率或陽性積分抑制前陽性率或陽性積分100%38醫(yī)學ppt氟化鈉抑制率=抑制前陽性率或陽性積分-抑制前陽性率或【正常血細胞染色反應】1.單核細胞系統(tǒng)

原始單核細胞

分化差陰性分化好陽性

幼稚及成熟單核細胞陽性被氟化鈉抑制39醫(yī)學ppt【正常血細胞染色反應】1.單核細胞系統(tǒng)被氟化鈉抑制39醫(yī)2.粒細胞系統(tǒng)

原粒細胞陰性或弱陽性以下階段為弱陽性3.淋巴細胞系統(tǒng)

多數(shù)陰性，少數(shù)弱陽性

不被氟化鈉抑制40醫(yī)學ppt2.粒細胞系統(tǒng)不被氟化鈉抑制40醫(yī)學ppt41醫(yī)學ppt41醫(yī)學ppt【臨床評價】急單急粒急性早幼粒急粒單急淋α-NAE+++或-或++陽性-++++弱+NaF被抑制不被不被抑制部分被抑制抑制部分未被抑制主要用于鑒別急性白血病類型42醫(yī)學ppt【臨床評價】急單急粒急性早幼粒急鐵染色

（ferricstain）43醫(yī)學ppt鐵染色

（fer亞鐵氰化鉀亞鐵氰化鐵(藍色沉淀在含F(xiàn)e部位)鐵＋酸性環(huán)境普魯士藍反應骨髓小粒中的含F(xiàn)e血黃素（細胞外鐵）骨髓中貯存鐵幼紅細胞內的Fe（細胞內鐵）原理44醫(yī)學ppt亞鐵氰化鉀亞鐵氰化鐵鐵＋酸性環(huán)境普魯士藍【結果判斷】

幼紅細胞核染色為鮮紅色,鐵粒呈藍綠色。

45醫(yī)學ppt45醫(yī)學ppt細胞外鐵

低倍鏡觀察涂片尾部和骨髓小粒,細胞外鐵位于幼紅細胞外或骨髓小粒巨噬細胞漿內，呈藍色顆粒狀、小珠狀或團塊狀。

46醫(yī)學ppt46醫(yī)學ppt

再用油鏡判斷陽性程度，根據(jù)鐵量多少分五級:（-）（+）（++）（+++）（++++）47醫(yī)學ppt47醫(yī)學ppt48醫(yī)學ppt48醫(yī)學ppt細胞內鐵

存在于中幼紅細胞、晚幼紅細胞及成熟紅細胞中的鐵。

油鏡下計數(shù)100個中幼紅細胞和晚幼紅細胞，記錄胞漿中含有藍色顆粒細胞的百分率。49醫(yī)學ppt細胞內鐵49醫(yī)學ppt

根據(jù)細胞內鐵顆粒的數(shù)目、大小、染色深淺和顆粒分布情況,將鐵粒幼紅細胞分為四型:

Ⅰ型Ⅱ型Ⅲ型Ⅳ型50醫(yī)學ppt50醫(yī)學ppt細胞內鐵51醫(yī)學ppt細胞內鐵51醫(yī)學ppt52醫(yī)學ppt52醫(yī)學ppt1.細胞外鐵

+～++，約2/3人為++，約1/3人為+。2.細胞內鐵

陽性率19%～44%Ⅰ型為主，少數(shù)為Ⅱ型（無環(huán)形鐵粒幼紅細胞和鐵粒紅細胞）【參考值】53醫(yī)學ppt1.細胞外鐵【參考值】53醫(yī)學ppt

【臨床評價】1.診斷缺鐵性貧血、指導鐵劑治療

細胞內、外鐵明顯減低甚至消失