血絡(luò)復(fù)欣顆粒對(duì)大鼠頸動(dòng)脈血栓形成及腸系膜微循環(huán)障礙的影響

血絡(luò)復(fù)欣顆粒對(duì)大鼠頸動(dòng)脈血栓形成及腸系膜微循環(huán)障礙的影響

血絡(luò)回歸是遼寧省中醫(yī)藥大學(xué)著名的中醫(yī)臨床經(jīng)驗(yàn)處方。具有去粘液和抗瘀藥的功效，用于治療由粘液和血瘀酶引起的高血脂癥。本文重點(diǎn)研究了血絡(luò)復(fù)欣對(duì)電刺激大鼠頸動(dòng)脈導(dǎo)致血栓形成及對(duì)小鼠腸系膜微循環(huán)的影響,并分別與復(fù)方血栓通膠囊和曲克蘆丁片及消旋山莨菪堿片和丹蔞片進(jìn)行了比較,為臨床合理用藥提供理論依據(jù)。1材料表面1.1顆粒、設(shè)膠囊、通膠囊血絡(luò)復(fù)欣顆粒,由沙棘10g,槐花12g,黃芪8g組成,將以上中藥煎煮2次,合并濾液濃縮至稠膏狀放冷,加糊精淀粉制成顆粒,遼寧中醫(yī)藥大學(xué)附屬二院提供,批號(hào)090821;復(fù)方血栓通膠囊,廣東眾生藥業(yè)股份有限公司,批號(hào)091213;曲克蘆丁片,亞寶藥業(yè)集團(tuán)股份有限公司,批號(hào)091209;消旋山莨菪堿片,杭州民生藥業(yè)集團(tuán)有限公司,批號(hào)T08H290;丹蔞片,吉林康乃爾藥業(yè),批號(hào)20090501。1.3小鼠性別、體重Wistar大鼠,雌雄各半,體重180~220g;昆明種小鼠,雌雄各半,體重18~22g;購于北京中國人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心,許可證號(hào)SCXK-(軍)2007-004。1.4syxk觀察室溫度與濕度遼寧省中醫(yī)藥研究院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心觀察飼養(yǎng)1周后使用。許可證號(hào)SYXK(遼)2003-0010。觀察室溫度(20~23)℃,相對(duì)濕度50%~65%。顆粒飼料,沈陽前民試驗(yàn)動(dòng)物飼料廠提供。1.5儀器BW-YLS-14A小動(dòng)物血栓生成儀,濟(jì)南益延科技發(fā)展有限公司;BI-2000醫(yī)學(xué)圖像分析系統(tǒng),成都泰盟科技有限公司。2方法2.1單次給藥和大鼠試驗(yàn)取體重180~220g的Wistar大鼠60只,按性別體重隨機(jī)分為6組,每組10只,雌雄各5只,分別為空白對(duì)照組,血絡(luò)復(fù)欣低、中、高(5.2,10.4,20.8g·kg-1)3個(gè)劑量組,中藥陽性對(duì)照復(fù)方血栓通組0.4g·kg-1、西藥陽性對(duì)照曲克蘆丁片組48.6mg·kg-1。每天ig給藥1次,給藥體積均為20mL·kg-1,空白對(duì)照組ig給予同體積蒸餾水,連續(xù)給藥7d。實(shí)驗(yàn)前動(dòng)物禁食不禁水16h,末次給藥后30min,大鼠50mg·kg-1戊巴比妥鈉ip麻醉,仰臥位固定于小動(dòng)物血栓生成儀鼠板上,頸部正中切口,分離右側(cè)頸總動(dòng)脈約15mm,根據(jù)預(yù)試驗(yàn)結(jié)果,設(shè)置剌激電流1.2mA,剌激時(shí)間5min,間隔4s記錄1次血管栓塞率,以血管栓塞率作為評(píng)價(jià)大鼠頸動(dòng)脈血栓形成的指標(biāo)。將剝離好的頸總動(dòng)脈勾入探頭的溝槽內(nèi),調(diào)整好高度和方向,使探頭信號(hào)取值在大于一級(jí)的100而小于三級(jí)的100之內(nèi)進(jìn)行刺激測(cè)定,刺激結(jié)束后記錄結(jié)果。2.2動(dòng)物分組、給藥及動(dòng)力學(xué)指標(biāo)檢測(cè)取昆明種小鼠60只,體重18~22g的,按性別體重隨機(jī)分為6組,每組10只,雌雄各5只,分別為空白對(duì)照組,血絡(luò)復(fù)欣低、中、高(7.5,15.0,30.0g·kg-1)3個(gè)劑量組,中藥陽性對(duì)照丹蔞片組0.58g·kg-1、西藥陽性對(duì)照消旋山莨菪堿片組3.9mg·kg-1。每天ig給藥1次,給藥體積均為20mL·kg-1,空白對(duì)照組ig給予同體積蒸餾水,連續(xù)給藥7d。實(shí)驗(yàn)前動(dòng)物禁食不禁水16h,末次給藥后30min,小鼠50mg·kg-1戊巴比妥鈉ip麻醉,右下腹部剪開2cm切口,拉出一段空腸袢平鋪于盛有37℃洛氏液恒溫有機(jī)玻璃灌流小池平臺(tái)上,顯微鏡6×10倍放大觀察微動(dòng)脈,固定視野,通過BI-2000醫(yī)學(xué)圖像分析系統(tǒng)在電腦上記錄相應(yīng)指標(biāo),于鏡下觀察給藥前的血管入口直徑和出口直徑,流速,流態(tài)(線流5分、線粒流4分、粒線流3、粒流2分、擺流1分、停止0分),然后記錄給予腎上腺素(50mg·L-1,15μL/只)后2min和8min時(shí)的血管出口直徑,入口直徑,流速和流態(tài)。以血管出口直徑和入口直徑平均值,流速和流態(tài)為指標(biāo),檢驗(yàn)比較給藥前后的差異。2.3統(tǒng)計(jì)處理采用Excel軟件處理數(shù)據(jù),組間比較采用t檢驗(yàn),以P<0.05及P<0.01表示組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。3結(jié)果3.1對(duì)大鼠頸動(dòng)脈栓塞的影響結(jié)果見表1,血絡(luò)復(fù)欣低、中、高3個(gè)劑量組,中藥陽性對(duì)照藥復(fù)方血栓通組及西藥陽性對(duì)照藥曲克蘆丁片組均顯著降低電刺激引起的大鼠頸動(dòng)脈栓塞率,與空白對(duì)照組比較差異顯著(P<0.05,P<0.01)。表明血絡(luò)復(fù)欣可使電刺激引起的大鼠血栓栓塞率明顯下降,具有活血作用。3.2各組大鼠輸注后2min和8min時(shí)血管直徑的變化結(jié)果見表2,血絡(luò)復(fù)欣低、中、高3個(gè)劑量組,中藥陽性對(duì)照藥丹蔞片組及西藥陽性對(duì)照藥消旋山莨菪堿片組均顯著改善給予腎上腺素后2min和8min時(shí)的血管直徑,流速和流態(tài),與空白對(duì)照組及滴加腎上腺素前比較均有顯著性差異(P<0.05,P<0.01)。表明血絡(luò)復(fù)欣對(duì)腎上腺素引起的微循環(huán)障礙具有明顯的改善作用。4血絡(luò)復(fù)欣、通利療血栓是在血管內(nèi)皮損傷;凝血、抗凝、纖溶系統(tǒng);血小板黏附,聚集和釋放反應(yīng)及凝血活性增高等多種因素綜合作用下形成的。近年來研究表明血栓形成及微循環(huán)障礙與許多嚴(yán)重疾病如高血脂、冠心病、腦梗死等心腦血管疾病的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。電刺激大鼠頸總動(dòng)脈可使血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷,內(nèi)皮下膠原暴露,血小板與之接觸而被激活和黏附,促使血栓形成;同時(shí)電刺激頸總動(dòng)脈可激活Ⅻ因子以及損傷的內(nèi)皮細(xì)胞釋放組織因子,啟動(dòng)內(nèi)源性和外源性凝血途徑,使凝血因子大量激活,血流速度緩慢,從而加重血栓的形成。而微循環(huán)障礙主要表現(xiàn)在微血流緩慢或瘀滯,微血管縮窄或閉塞等。血絡(luò)復(fù)欣是多年臨床經(jīng)驗(yàn)方劑,用于治療痰濁瘀阻證引起的高血脂癥,處方中丹參、沙棘、山楂具有活血祛瘀的作用;栝蔞具有清熱化痰之功效;何首烏具有促進(jìn)纖維蛋白溶解活性的作用;與其他中藥相輔使用共奏化痰祛瘀之功效。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明血絡(luò)復(fù)欣可使電刺激引起的大鼠血栓栓塞率明顯下降,具有預(yù)防血栓形成的作用;血絡(luò)復(fù)欣顯著改善給予腎上腺素后的血管直徑,流速和流態(tài),具有明顯改善小鼠空腸局部微循環(huán)障礙的作用。前期研究了血絡(luò)復(fù)欣對(duì)急性血瘀證大鼠的血流變學(xué)的改善作用,本試驗(yàn)從血絡(luò)復(fù)欣對(duì)大鼠頸動(dòng)脈血栓形成的影響,對(duì)小鼠腸系膜微循環(huán)障礙的影響進(jìn)行了研究,從抗血栓形