氣相色譜法測定艾片中l(wèi)-龍腦、異龍腦和樟腦

氣相色譜法測定艾片中l(wèi)-龍腦、異龍腦和樟腦

aip艾片是薔薇科植物愛納香的一部分。它具有開孔、醒神、清熱、止痛的作用。用于發(fā)熱、頭暈、痙攣性疾病、粘液性疾病、氣短性疾病、半麻痹、目紅、口嚨痛、咽喉嚨痛和耳道流鼻涕。另有研究證實l-龍腦的抑菌能力強于d-龍腦?！吨袊幍洹?010年版對艾片成分的量提出了嚴(yán)格規(guī)定。目前使用GC法測定龍腦(冰片)等的文獻(xiàn)報道很多,而嚴(yán)格分離測定l-龍腦、d-龍腦和dl-龍腦的并不多,測定艾片的相關(guān)文獻(xiàn)更少。研究證實本方法操作簡便、準(zhǔn)確,精密度、分離度良好,分析時間短,為艾片的測定及其質(zhì)量控制提供參考。1材料和試劑日本島津GC—2010氣相色譜儀(配有氫火焰離子化檢測器FID),GC-Solution工作站,AOC-20i自動進(jìn)樣器。對照品l-龍腦(質(zhì)量分?jǐn)?shù)97%,批號S53225)和異龍腦(質(zhì)量分?jǐn)?shù)95%,批號28598LJ)購自Sigma-Aldrich公司,樟腦(質(zhì)量分?jǐn)?shù)96%,批號20100126)和內(nèi)標(biāo)物萘(質(zhì)量分?jǐn)?shù)99.5%,批號W20100817)購自國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司;所用試劑均為分析純。艾片樣品由貴州艾源生態(tài)藥業(yè)開發(fā)有限公司提供,批號112301、112901、120501、121901、122701、123001。2方法和結(jié)果2.1空氣溫度和陣風(fēng)溫度色譜柱為CP-WAX毛細(xì)管柱(30m×0.32mm,0.5μm,PEG-20M);升溫程序:80℃保持5min,以10℃/min快速升溫至220℃,保持5min;分流比1∶8;FID檢測器溫度250℃;進(jìn)樣口溫度250℃;載氣為高純氮氣,體積流量3.0mL/min,空氣體積流量400mL/min,氫氣體積流量47mL/min;進(jìn)樣量1μL。2.2對照品儲備液的制備混合對照品儲備液:分別精密稱取樟腦、異龍腦、l-龍腦對照品適量,以醋酸乙酯溶解并定容,制成樟腦、異龍腦、l-龍腦質(zhì)量濃度分別為10.1、9.975、10.2mg/mL的混合液,作為混合對照品儲備液。內(nèi)標(biāo)溶液:精密量取萘1.0006g,以醋酸乙酯溶解,置100mL量瓶定容,作為內(nèi)標(biāo)溶液。2.3試驗溶液的制備精密稱取樣品艾片(批號112301)0.5001g,以醋酸乙酯溶解,置50mL量瓶定容即得。2.4標(biāo)混合對照品和加內(nèi)標(biāo)艾片的gc圖譜選用萘為內(nèi)標(biāo),樟腦、異龍腦、l-龍腦和內(nèi)標(biāo)物萘的分離度均大于2,萘與各對照品較好地分離,加內(nèi)標(biāo)混合對照品和加內(nèi)標(biāo)艾片的GC圖譜見圖1。各物質(zhì)的保留時間均在13min內(nèi),測定速度較快。以樟腦、異龍腦、l-龍腦和萘色譜峰計算的理論塔板數(shù)分別為146929、210343、285379和390807,遠(yuǎn)遠(yuǎn)大于《中國藥典》2010年版規(guī)定的理論塔板數(shù)超過3000的要求。2.5標(biāo)準(zhǔn)曲線及線性回歸法精密量取混合對照品儲備液0.05、0.125、0.25、0.5、1、2、3、4mL,分別置5mL量瓶中,再加入1mL內(nèi)標(biāo)溶液,加醋酸乙酯稀釋并定容,搖勻,分別進(jìn)樣測定,每次1μL。以各對照品與內(nèi)標(biāo)物的峰面積比為橫坐標(biāo)(X),對照品與內(nèi)標(biāo)物的質(zhì)量濃度比為縱坐標(biāo)(Y)進(jìn)行線性回歸,得回歸方程:樟腦Y=1.3222X+0.0394,r=0.9994;異龍腦Y=1.2097X+0.0387,r=0.9995;l-龍腦Y=1.2523X+0.0398,r=0.9995;線性范圍分別為樟腦0.101~8.080mg/mL、異龍腦0.09975~7.980mg/mL、l-龍腦0.102~8.160mg/mL。2.6峰面積比的rsd對同一加內(nèi)標(biāo)混合對照品儲備液連續(xù)測定8次,結(jié)果樟腦、異龍腦、l-龍腦與內(nèi)標(biāo)物的峰面積比的RSD分別為0.15%、0.08%、0.16%。2.7平均質(zhì)量分?jǐn)?shù)的測定取艾片樣品(批號112301)5份,平行制備加內(nèi)標(biāo)供試品溶液,測定,結(jié)果樟腦、異龍腦、l-龍腦的平均質(zhì)量分?jǐn)?shù)的RSD分別為1.33%、2.62%、1.18%。2.8加標(biāo)穩(wěn)定性測定分別在0、0.5、1、2、4、8、16、24h對加內(nèi)標(biāo)供試品溶液(批號112301)進(jìn)行測定,結(jié)果樟腦、異龍腦、l-龍腦與內(nèi)標(biāo)物的峰面積比的RSD分別為0.19%、0.23%、0.22%,結(jié)果說明被測溶液在24h內(nèi)穩(wěn)定。2.9對照品的稀釋及檢出限使用“2.5”項中進(jìn)行線性關(guān)系考察時配置的樟腦0.101mg/mL、異龍腦99.75μg/mL、l-龍腦0.102mg/mL的混合對照品儲備液,以10倍為梯度進(jìn)行稀釋,然后測定各梯度稀釋液,觀察對照品的檢出限,結(jié)果樟腦、異龍腦、l-龍腦的檢出限分別為0.101、0.09975、0.102μg/mL。2.10加樣回收率試驗精密稱定供試品艾片(批號112301)約100mg,9份,分別置50mL量瓶中,3份為1組作為一個水平的平行樣,每組分別精密加入對照品混合儲備液5、10、15mL,每個量瓶中加入內(nèi)標(biāo)溶液10mL,加醋酸乙酯稀釋并定容,搖勻,每個樣平行測定3次,計算得樟腦、異龍腦、l-龍腦的平均回收率分別為97.52%、98.31%、98.16%,RSD分別為1.45%、1.18%、1.32%。2.11樣品測定結(jié)果精密稱定各批次艾片0.1g,置25mL量瓶,加入5mL內(nèi)標(biāo)溶液,加醋酸乙酯稀釋并定容,搖勻,精密量取1μL進(jìn)樣測定,每批次平行測定3份,各成分測定結(jié)果見表1,結(jié)果表明各批次樣品均達(dá)到《中國藥典》2010年版的質(zhì)量要求。3p-woa和db-5艾片是由艾納香葉通過蒸餾法制得,艾片主要成分為l-龍腦,還含有少量的樟腦和異龍腦。傳統(tǒng)填充柱對異龍腦和l-龍腦不能完全分離,分別嘗試毛細(xì)管柱CP-WAX和DB-5,以及不同程序升溫進(jìn)行測定,結(jié)果以毛細(xì)管柱CP-WAX和上述升溫程序分離效果好。如需要更快的分析速度,還可調(diào)整升溫程序降低保留時間。本實驗采用自動進(jìn)樣