基因的體外轉(zhuǎn)錄和翻譯課件

1712019年11月12日星期1711什么是基因的體外轉(zhuǎn)錄和翻譯基因的體外轉(zhuǎn)錄和翻譯是20世紀(jì)70年代發(fā)展起來(lái)的一項(xiàng)分子生物學(xué)和細(xì)胞生物學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù),是研究離體條件下(非細(xì)胞體系)基因表達(dá)情況的理想體系2019年11月12日星期什么是基因的體外轉(zhuǎn)錄和翻譯2基因表達(dá)包括:轉(zhuǎn)錄和翻譯兩個(gè)過(guò)程基因表達(dá)的調(diào)控包括:染色體結(jié)構(gòu)的調(diào)節(jié)、DNA結(jié)構(gòu)的調(diào)節(jié)、轉(zhuǎn)錄過(guò)程的調(diào)控、轉(zhuǎn)錄后的調(diào)控、翻譯過(guò)程的調(diào)控及翻譯后的調(diào)控。2019年11月12日星期基因表達(dá)包括:轉(zhuǎn)錄和翻譯兩個(gè)過(guò)3基因體外轉(zhuǎn)錄和翻譯的作用:為研究基因轉(zhuǎn)錄和蛋白質(zhì)翻譯提供了個(gè)十分理想實(shí)驗(yàn)體系和技術(shù)平臺(tái)及找到了—個(gè)研究與探討轉(zhuǎn)錄和翻譯這兩個(gè)復(fù)雜的現(xiàn)象的重要手段和方2019年11月12日星期基因體外轉(zhuǎn)錄和翻譯的作用:為研4第一節(jié)基因的體外轉(zhuǎn)錄基因體外轉(zhuǎn)錄的目的和意義基因的體外轉(zhuǎn)錄體系最早由Pelham和Jakson于1976年創(chuàng)立的,經(jīng)很多實(shí)驗(yàn)室的不斷修訂和改進(jìn),現(xiàn)已成為一項(xiàng)成熟的分子生物學(xué)和細(xì)胞生物學(xué)技術(shù),已被多家試劑公司提供標(biāo)準(zhǔn)的實(shí)驗(yàn)程序。2019年11月12日星期第一節(jié)基因的體外轉(zhuǎn)錄5基因體外轉(zhuǎn)錄體糸在分子生物學(xué)和細(xì)胞生物學(xué)研究中的用途和意義:1、快速檢測(cè)目的基因的轉(zhuǎn)錄情況;2、分析轉(zhuǎn)錄因子調(diào)節(jié)基因轉(zhuǎn)錄的過(guò)程;3、分析啟動(dòng)子序列的活性;4、分析轉(zhuǎn)錄因子、DNA結(jié)合蛋白和RNA剪切因子的組成和作用5、染色質(zhì)結(jié)構(gòu)調(diào)整與基因轉(zhuǎn)錄的關(guān)系6、制備RNA探钅2019年11月12日星期基因體外轉(zhuǎn)錄體糸在分子生物學(xué)和6基因體外轉(zhuǎn)錄的基本原理基本原理:以DNA為模板,在無(wú)細(xì)胞體系中一系列轉(zhuǎn)錄因子的作用下經(jīng)RNA聚合酶合成RNA的過(guò)程。質(zhì)粒DNA模)線性DNA板核小體形式存在的DNA2019年11月12日星期基因體外轉(zhuǎn)錄的基本原理7能用于體外轉(zhuǎn)錄的質(zhì)粒載體轉(zhuǎn)錄的必要條件:無(wú)論是真核細(xì)胞的轉(zhuǎn)錄體系還是原核細(xì)胞的轉(zhuǎn)錄體系,基因轉(zhuǎn)錄時(shí)都必須有啟動(dòng)子序列,且該序列能被轉(zhuǎn)錄體系識(shí)別。原核細(xì)胞體外轉(zhuǎn)錄體糸常用的啟動(dòng)子有T3、T7及SP6啟動(dòng)子。真核細(xì)胞體外轉(zhuǎn)錄體糸除需啟動(dòng)子增強(qiáng)子等順式作用元件外,還需各種反式作用元件的參與2019年11月12日星期能用于體外轉(zhuǎn)錄的質(zhì)粒載體8基因體外轉(zhuǎn)錄體系DNA模板:含有轉(zhuǎn)錄啟動(dòng)子及必要的調(diào)控序列(起始和終止序列等)的DNA及為研究基因轉(zhuǎn)錄調(diào)控的需要在體外組裝成的核小體鏈(注意避免RNase的污染)。2019年11月12日星期基因體外轉(zhuǎn)錄體系9細(xì)胞核抽提物的制備:細(xì)胞核抽提物:DNA轉(zhuǎn)錄由RNA聚合酶各種轉(zhuǎn)錄因子及必要的環(huán)境條件等,這切必需由細(xì)胞提供。常用于制備細(xì)胞核抽提物的細(xì)胞有酵母細(xì)胞、兔網(wǎng)織紅細(xì)胞和Hela細(xì)胞1、一般方法優(yōu)點(diǎn):細(xì)胞核完整、內(nèi)含物豐富缺點(diǎn):在分離的細(xì)胞核中可能存在少量細(xì)胞質(zhì)成分2019年11月12日星期細(xì)胞核抽提物的制備:10基因的體外轉(zhuǎn)錄和翻譯課件11基因的體外轉(zhuǎn)錄和翻譯課件12基因的體外轉(zhuǎn)錄和翻譯課件13基因的體外轉(zhuǎn)錄和翻譯課件14基因的體外轉(zhuǎn)錄和翻譯課件15基因的體外轉(zhuǎn)錄和翻譯課件16基因的體外轉(zhuǎn)錄和翻譯課件17基因的體外轉(zhuǎn)錄和翻譯課件18基因的體外轉(zhuǎn)錄和翻譯課件19基因的體外轉(zhuǎn)錄和翻譯課件20基因的體外轉(zhuǎn)錄和翻譯課件21基因的體外轉(zhuǎn)錄和翻譯課件22基因的體外轉(zhuǎn)錄和翻譯課件23基因的體外轉(zhuǎn)錄和翻譯課件24基因的體外轉(zhuǎn)錄和翻譯課件25基因的體外轉(zhuǎn)錄和翻譯課件26基因的體外轉(zhuǎn)錄和翻譯課件27基因的體外轉(zhuǎn)錄和翻譯課件28基因的體外轉(zhuǎn)錄和翻譯課件29基因的體外轉(zhuǎn)錄和翻譯課件30基因的體外轉(zhuǎn)錄和翻譯課件31基因的體外轉(zhuǎn)錄和翻譯課件32基因的體外轉(zhuǎn)錄和翻譯課件33基因的體外轉(zhuǎn)錄和翻譯課件34基因的體外轉(zhuǎn)錄和翻譯課件35基因的體外轉(zhuǎn)錄和翻譯課件36基因的體外轉(zhuǎn)錄和翻譯課件37基因的體外轉(zhuǎn)錄和翻譯課件38基因的體外轉(zhuǎn)錄和翻譯課件39基因的體外轉(zhuǎn)錄和翻譯課件40基因的體