曲克蘆丁片體外溶出度的考察

曲克蘆丁片體外溶出度的考察

特洛伊木丁是羥乙基丙烯酸酯的半合成產(chǎn)物。它主要由三羥乙基丙烯酸酯組成。同時(shí)，它含有單一羥乙基丙烯酸酯、二羥乙基丙烯酸酯和四羥乙基丙烯酸酯等許多成分。這是治療心腦血管疾病的基本藥物。目前,《英國(guó)藥典》(BP)2011年版及《歐洲藥典》(EP7.0)只收載了曲克蘆丁原料的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn),沒(méi)有收載相關(guān)制劑的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。《中國(guó)藥典》2010年版、《美國(guó)藥典》(USP34)以及日本藥局方則沒(méi)有收載該品種。我國(guó)《國(guó)家藥品標(biāo)準(zhǔn)》第八冊(cè)收載了曲克蘆丁片劑和膠囊劑的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn),但是未規(guī)定溶出度的檢查項(xiàng)。本文參考《歐洲藥典》7.0版中曲克蘆丁原料標(biāo)準(zhǔn)“組分測(cè)定”的色譜條件,考察了5個(gè)廠家生產(chǎn)的曲克蘆丁片在不同溶出介質(zhì)的溶出曲線,建立了曲克蘆丁片的體外溶出度方法,為評(píng)價(jià)曲克蘆丁制劑的內(nèi)在質(zhì)量和臨床用藥提供參考。1儀器和試劑盒1.1dfc-400rp標(biāo)準(zhǔn)Agilent1200四元低壓梯度液相色譜儀(美國(guó)安捷倫公司);DFC-310RP半自動(dòng)溶出度儀(德國(guó)Pharma-test公司);UV-2401PC紫外-可見(jiàn)光分光光度計(jì)(日本島津公司);ZKT-18真空脫氣儀(天大天發(fā)科技有限公司)。1.2曲克蘆丁片規(guī)格為60.曲克蘆丁對(duì)照品(中國(guó)食品藥品檢定研究院,批號(hào):100416-201004,質(zhì)量分?jǐn)?shù):95.2%);蘆丁對(duì)照品(中國(guó)食品藥品檢定研究院,批號(hào):100080-200707,質(zhì)量分?jǐn)?shù):90.5%);市售5個(gè)廠家的曲克蘆丁片(規(guī)格均為60mg/片),分別為A廠(3批糖衣片,批號(hào):090314、100412、100415,代號(hào)分別為A1、A2、A3)、B廠(3批薄膜衣片,批號(hào):2100315、2090251、2100146,代號(hào)分別為B1、B2、B3)、C廠(3批糖衣片,批號(hào):20080801、20080802、20080803,代號(hào)分別為C1、C2、C3)、D廠(1批糖衣片,批號(hào):1005196,代號(hào)D)、E廠(1批糖衣片,批號(hào):100521,代號(hào)E);乙腈(色譜純,默克公司);NaH2PO4(分析純,廣州化學(xué)試劑廠)。2方法和結(jié)果2.1測(cè)定波長(zhǎng)的確定精密稱取曲克蘆丁對(duì)照品適量,用NaH2PO4溶液(取NaH2PO415.6g,加水至1000mL,并用稀H3PO4或NaOH調(diào)pH值至4.4)-乙腈(體積比為80∶20)體系溶解并制成質(zhì)量濃度約為15μg/mL的溶液,在220～400nm波長(zhǎng)范圍進(jìn)行掃描,結(jié)果見(jiàn)圖1。圖1表明:曲克蘆丁在254nm和350nm波長(zhǎng)處均有最大吸收,但是在254nm波長(zhǎng)處的吸光度明顯大于350nm的吸光度,因此,選擇254nm作為測(cè)定波長(zhǎng)。取按片劑處方制成的輔料溶液在220～400nm波長(zhǎng)范圍進(jìn)行掃描,結(jié)果幾乎無(wú)紫外吸收,表明對(duì)測(cè)定無(wú)干擾。2.2柱5.4%參考《歐洲藥典》7.0版曲克蘆丁原料標(biāo)準(zhǔn)“組分測(cè)定”的色譜條件:色譜柱為Kromasil-C18柱(4.6mm×250mm,5μm);流動(dòng)相為NaH2PO4溶液(取NaH2PO415.6g,加水至1000mL,并用稀H3PO4或NaOH調(diào)pH值至4.4)-乙腈(體積比為80∶20);檢測(cè)波長(zhǎng)為254nm;流速為0.5mL/min;柱溫為35℃;進(jìn)樣量為10μL。2.3樣品溶液和輔料溶液的配制取曲克蘆丁對(duì)照品和蘆丁對(duì)照品用流動(dòng)相制成質(zhì)量濃度分別為1mg/mL和0.1mg/mL的混合溶液作為系統(tǒng)適用性溶液;取曲克蘆丁片樣品(A1)和處方量的輔料按“2.7.3”項(xiàng)下方法制備,45min取樣,得樣品溶液和輔料溶液。分別取上述3種溶液進(jìn)樣10μL,色譜圖見(jiàn)圖2。圖2的A中,曲克蘆丁色譜峰與蘆丁色譜峰、二羥乙基蘆丁色譜峰(根據(jù)《歐洲藥典》中曲克蘆丁原料的標(biāo)準(zhǔn),其色譜峰根據(jù)相對(duì)保留時(shí)間為1.1來(lái)定位)的分離度分別為4.2和2.3,曲克蘆丁色譜峰的理論板數(shù)為11478。2.4對(duì)照品溶液的制備精密稱取曲克蘆丁化學(xué)對(duì)照品適量,用流動(dòng)相溶解并制成質(zhì)量濃度為1.0mg/mL的對(duì)照品儲(chǔ)備液。分別精密量取對(duì)照品儲(chǔ)備液適量,用流動(dòng)相稀釋成質(zhì)量濃度范圍為0.99～119.26μg/mL的系列對(duì)照品溶液,分別進(jìn)樣10μL,記錄峰面積。以對(duì)照品溶液質(zhì)量濃度(ρ)為橫坐標(biāo),峰面積(A)為縱坐標(biāo),繪制工作曲線,得線性方程為A=29.12ρ-4.78,r=0.9999,表明曲克蘆丁質(zhì)量濃度在1～120μg/mL范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關(guān)系。2.5加輔料回收率測(cè)定采用加樣回收的方法,分別以曲克蘆丁80%、100%、120%的比例,按片劑處方加輔料配制成混合物,每個(gè)濃度制備3份供試品,測(cè)定回收率。結(jié)果測(cè)得低、中、高質(zhì)量濃度溶液的平均回收率分別為100.0%、99.5%、99.8%,RSD分別為0.7%、0.4%、0.6%(n=3)。2.6溶液ph的測(cè)定取曲克蘆丁片的細(xì)粉適量,分別用0.1mol/LHCl、水、pH6.8磷酸鹽緩沖液溶解稀釋制成約1mg/mL的溶液,搖勻,置37℃恒溫水浴。分別于0、30、60、90、120、150、180、210、240min時(shí)取溶液適量,濾過(guò),取續(xù)濾液10μL,注入液相色譜儀,記錄色譜圖。結(jié)果主峰和其他各組分峰面積、個(gè)數(shù)均無(wú)明顯變化,其中主峰面積的RSD分別為0.6%、0.9%、1.1%,表明曲克蘆丁在上述3種溶出介質(zhì)中穩(wěn)定性良好。2.7溶解度測(cè)定2.7.1轉(zhuǎn)速對(duì)溶出度的影響參考《中國(guó)藥典》2010年版,片劑通常采用槳法測(cè)定。取“1.2”項(xiàng)下的5個(gè)廠家樣品各1批(分別為A1、B1、C1、D和E),以水為溶劑,分別以轉(zhuǎn)速50r/min和75r/min進(jìn)行試驗(yàn),45min時(shí)取樣測(cè)定,考察不同轉(zhuǎn)速對(duì)溶出度的影響,結(jié)果見(jiàn)表1。從表1可見(jiàn),隨著轉(zhuǎn)速增加,在4批糖衣片中,有2批樣品(A1、D)的溶出度有所提高,其余2批(C1、E)溶出度無(wú)明顯變化且45min時(shí)包衣層亦均未崩解,片芯無(wú)法溶出。薄膜衣片(B1)在45min時(shí)均已溶出完全,所以不同轉(zhuǎn)速下的溶出度結(jié)果基本一致。曲克蘆丁易溶于水,包衣層的崩解決定了曲克蘆丁溶出速率的快慢,為了加快包衣層的崩解,轉(zhuǎn)速選擇75r/min。2.7.2曲克蘆丁片溶出度測(cè)定取“2.7.1”項(xiàng)下的5個(gè)廠家樣品分別以水、0.1mol/LHCl溶液、pH6.8的磷酸鹽緩沖液為溶出介質(zhì),按照《中國(guó)藥典》2010年版二部附錄ⅩC第二法的溶出度測(cè)定法,溶出介質(zhì)為900mL,轉(zhuǎn)速為75r/min,依法操作,分別在10、20、30、45、60、90、120min取樣5mL,用0.45μm微孔濾膜濾過(guò),并即時(shí)補(bǔ)充同溫度的溶出介質(zhì)5mL,取續(xù)濾液10μL,注入高效液相色譜儀,記錄色譜圖。另取曲克蘆丁對(duì)照品適量,用流動(dòng)相溶解并制成約67μg/mL的溶液,同法測(cè)定,按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算每片的溶出度。在不同溶出介質(zhì)中的溶出曲線見(jiàn)圖3。由圖3可見(jiàn):薄膜衣片(B1)在3種不同介質(zhì)中20min時(shí)已基本溶出完全,溶出度均大于90%;糖衣片(A1、C1、D和E)由于包衣層的崩解過(guò)程影響了片芯的溶出,在前10min均有明顯的溶出時(shí)滯,同時(shí)由于各個(gè)廠家包衣處方的不同導(dǎo)致包衣層崩解的速度也不同,從而在上述3種溶出介質(zhì)中溶出曲線有較大差異。以上結(jié)果表明,不論薄膜衣片還是糖衣片,一旦包衣層崩解,樣品在上述3種溶出介質(zhì)中均能較好溶出,為簡(jiǎn)化試驗(yàn)條件,采用水為溶出介質(zhì)。2.7.3樣品溶出度測(cè)定以水為溶出介質(zhì),取“1.2”項(xiàng)下的所有樣品,按“2.7.2”項(xiàng)下條件試驗(yàn),分別在30、45min時(shí)取樣測(cè)定,結(jié)果見(jiàn)表2。由表2可見(jiàn):30min時(shí)8批糖衣片中平均溶出度大于80%的樣品僅有1批,45min時(shí)則只有2批,且片間差異較大。為了提升產(chǎn)品質(zhì)量,同時(shí)結(jié)合市售樣品的實(shí)際生產(chǎn)情況,溶出度檢查取樣時(shí)間確定為45min,限度不得低于標(biāo)示量的80%。3曲克蘆丁片的溶出度3.1在實(shí)驗(yàn)條件摸索過(guò)程中發(fā)現(xiàn),采用紫外分光光度法測(cè)定的溶出度結(jié)果明顯高于高效液相色譜法的測(cè)定結(jié)果,差值在30%～40%。目前,國(guó)內(nèi)用于生產(chǎn)口服制劑的曲克蘆丁原料中三羥乙基蘆丁的純度較低,只有70%左右,其他組分約30%,因此在生產(chǎn)中以三羥乙基蘆丁為指標(biāo)100%投料時(shí),其他組分對(duì)紫外測(cè)定的影響較大,而樣品的紫外吸收值為各組分吸收值的總和,導(dǎo)致紫外測(cè)定的溶出度結(jié)果偏高。高效液相法可將主成分與各組分分開(kāi),測(cè)定結(jié)果準(zhǔn)確可靠,因此采用了高效液相法測(cè)定曲克蘆丁片的溶出度。3.2《歐洲藥典》7.0版中曲克蘆丁原料標(biāo)準(zhǔn)“組分測(cè)定”方法采用曲克蘆丁系統(tǒng)適用性對(duì)照品配制的溶液作系統(tǒng)適用性溶液,以主峰(即曲克蘆丁色譜峰)的保留時(shí)間為1,按相對(duì)保留時(shí)間為1.1的色譜峰來(lái)定位二羥乙基蘆丁,用最難分離的二羥乙基蘆丁色譜峰和曲克蘆丁色譜峰之間的峰高峰谷比來(lái)衡量系統(tǒng)適用性。經(jīng)液相色譜考察,按《歐洲藥典》7.0版的色譜條件以相對(duì)保留時(shí)間定位,國(guó)產(chǎn)的曲克蘆丁對(duì)照品色譜圖中也含有較大的二羥乙基蘆丁色譜峰。因此,本文的系統(tǒng)適用性溶液的配制采用了國(guó)產(chǎn)的曲克蘆丁對(duì)照品,并且加入合成曲克蘆丁的前體化合物——蘆丁,增強(qiáng)了系統(tǒng)適用性試驗(yàn)的操作性和有效性。在本文的液相色譜條件下,蘆丁、曲克蘆丁和二羥乙基蘆丁色譜峰三者均能達(dá)到基線分離。分別選用Inertsil、Kromas