食品添加劑的測定-合成著色劑的測定

HPLC法測定合成著色劑的含量

技能點：標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制合成著色劑標(biāo)準(zhǔn)貯備液的配制二合成著色劑標(biāo)準(zhǔn)使用液的配制三目錄儀器準(zhǔn)備一儀器準(zhǔn)備一儀器規(guī)格儀器規(guī)格電子天平0.0001g容量瓶100mL微孔濾膜0.45μm刻度移液管10mL燒杯100mL試劑瓶合成著色劑標(biāo)準(zhǔn)貯備液的配制（1mg/mL）二pH6的水準(zhǔn)確稱取按其純度折算為100%質(zhì)量的檸檬黃、日落黃、莧菜紅、胭脂紅、新紅、赤蘚紅、亮藍各0.1g（精確到0.0001g），置100mL容量瓶中，加pH6的水到刻度。配成水溶液（1.00mg/mL）。pH6的水定容至100mL合成著色劑標(biāo)準(zhǔn)貯備液（1mg/mL）合成著色劑標(biāo)準(zhǔn)使用液的配制（50μg/mL）臨用時將標(biāo)準(zhǔn)貯備液加水稀釋20倍，經(jīng)0.45μm微孔濾膜過濾。配成每毫升相當(dāng)50.0μg的合成著色劑。三1.00mg/mL50.0μg/mL加水稀釋20倍0.45μm微孔濾膜過濾HPLC法測定合成著色劑的含量

技能點：測定原理與試劑配制測定原理一適用范圍二試劑配制三目錄測定原理食品中人工合成著色劑用聚酰胺吸附法或液-液分配法提取，制成水溶液，注入高效液相色譜儀，經(jīng)反相色譜分離，根據(jù)保留時間定性和與峰面積比較進行定量。一適用范圍1.本法適用于飲料、配制酒、硬糖、蜜餞、淀粉軟糖、巧克力豆及著色糖衣制品中合成著色劑（不含鋁色錠）的測定。2.測定依據(jù)：GB5009.35-2016。二試劑配制1.試劑2.儀器準(zhǔn)備3.試劑配制4.標(biāo)準(zhǔn)品三（1）氨水（NH3·H2O）：含量20%~25%

。（2）鹽酸（HCl）。（3）冰醋酸（CH3COOH）。（4）無水乙醇（CH3CH2OH）。（5）正己烷（C6H14）。（6）聚酰胺粉（尼龍6）：過200μm（目）篩。（7）硫酸鈉（Na2SO4）。1.試劑（除另有說明，所用試劑均為分析純）HPLC法測定合成著色劑的含量（8）甲醇（CH3OH）：色譜純。（9）乙酸銨（CH3COONH4）：色譜純。（10）甲酸（HCOOH）：色譜純。（11）水：GB/T6682規(guī)定的一級水。（12）檸檬酸（C6H8O7·H2O）。（13）正丁醇（C4H10O）。（14）三正辛胺（C24H51N）。儀器規(guī)格儀器規(guī)格電子天平0.001g量筒100mL移液槍洗瓶塑料離心管50mL試管水性微孔濾膜0.45μm燒杯250mL容量瓶1000mL玻璃棒刻度移液管2mL試劑瓶2.儀器準(zhǔn)備HPLC法測定合成著色劑的含量（1）乙酸銨溶液（0.02mol/L）：稱取1.54g，加水至1000mL，溶解，經(jīng)0.45μm微孔濾膜過濾。3.試劑配制：氨水溶液HPLC法測定合成著色劑的含量一級水1.54g乙酸銨溶液一級水定容至1000mL乙酸銨溶液（0.02mol/L）0.45μm微孔濾膜過濾（2）氨水溶液：量取2mL氨水，加水至100mL，混勻。3.試劑配制：氨水溶液HPLC法測定合成著色劑的含量98mL水2mL氨水氨水溶液（3）甲醇-甲酸溶液（6＋4，體積比）：量取甲醇60mL，甲酸40mL，混勻。3.試劑配制：甲醇-甲酸溶液HPLC法測定合成著色劑的含量40mL甲酸60mL甲醇甲醇-甲酸溶液（4）檸檬酸溶液：稱取20g檸檬酸，加水至100mL，溶解混勻。3.試劑配制：甲醇-甲酸溶液HPLC法測定合成著色劑的含量一級水20g檸檬酸一級水定容至1000mL亞鐵氰化鉀溶液（92g/L）（5）無水乙醇-氨水-水溶液（7＋2＋1，體積比）：量取無水乙醇70mL、氨水溶液（2）20mL、水10mL，混勻。3.試劑配制：甲醇-甲酸溶液HPLC法測定合成著色劑的含量10mL水70mL無水乙醇20mL氨水溶液無水乙醇-氨水-水溶液（6）三正辛胺-正丁醇溶液（5%）：量取三正辛胺5mL，加正丁醇至100mL，混勻。3.試劑配制：氨水溶液HPLC法測定合成著色劑的含量95mL正丁醇5mL三正辛胺三正辛胺-正丁醇溶液檸檬黃（CAS：1934-21-0）。新紅（CAS：220658-76-4）。莧菜紅（CAS：915-67-3）。胭脂紅（CAS：2611-82-7）。日落黃（CAS：2783-94-0）。亮藍（CAS：3844-45-9）。赤蘚紅（CAS：16423-68-0）。4.標(biāo)準(zhǔn)品HPLC法測定合成著色劑的含量HPLC法測定合成著色劑的含量

技能點：試樣溶液的測定試樣制備二色素提取三儀器參考條件四試樣溶液的測定五目錄儀器準(zhǔn)備一儀器準(zhǔn)備一儀器規(guī)格儀器規(guī)格高效液相色譜儀G3垂漏斗電子天平0.001g蒸發(fā)皿恒溫水浴鍋100℃±1℃分液漏斗微孔濾膜0.45μm刻度移液管1mL容量瓶5mL試樣制備二色素提取1.聚酰胺吸附法2.液-液分配法三1.聚酰胺吸附法HPLC法測定合成著色劑的含量（4）經(jīng)0.45μm微孔濾膜過濾，進高效液相色譜儀分析。（3）收集解吸液，加乙酸中和，蒸發(fā)至近干，加水溶解，定容至5mL。（2）用60℃pH為4的水洗滌3到5次，用甲醇-甲酸混合溶液洗滌3到5次，再用水洗至中性，用乙醇-氨水-水混合溶液解吸3到5次，直至色素完全解吸。（1）樣品溶液加檸檬酸溶液調(diào)pH到6，加熱至60℃，1g聚酰胺粉加少許水調(diào)成粥狀，倒入樣品溶液中攪拌片刻，以G3垂熔漏斗抽濾。2.液-液分配法（適用于含赤蘚紅的樣品）HPLC法測定合成著色劑的含量（4）經(jīng)0.45μm微孔濾膜過濾，進高效液相色譜儀分析。（3）加氨水溶液提取2到3次，每次5mL，合并氨水溶液層（含水溶性酸性色素），用正己烷洗2次，氨水層加乙酸調(diào)成中性，水浴加熱蒸發(fā)至近干，加水溶解，定容至5mL。（2）合并有機相，用飽和硫酸鈉溶液洗2次，每次10mL，分取有機相，放蒸發(fā)皿中，水浴加熱濃縮至10mL，轉(zhuǎn)移至分液漏斗，加10mL正己烷混勻。（1）樣品溶液放入分液漏斗中，加2mL鹽酸、三正辛胺-正丁醇溶液（5%）10mL~20mL，振搖提取，分取有機相，重復(fù)提取，直至有機相無色。儀器參考條件色譜柱：C18柱，4.6mm×250mm，5μm。進樣量：10μL。柱溫：35℃。二列管陣列檢測器波長范圍：400nm~800nm，或紫外檢測器檢測波長：254nm。梯度洗脫表見表1。四時間min流速mL/min0.02mol/L乙酸銨溶液%甲醇%01.095531.0653571.00100101.0010010.11.0955211.0955表1梯度洗脫表試樣溶液的測定將樣品提取液