連錢草的化學(xué)成分測(cè)定

連錢草的化學(xué)成分測(cè)定

連草是嘴唇科植物的活血丹干燥部位。具有潤(rùn)水、通粘液、清熱解毒、祛瘀、止咳、止咳的功效。臨床上用于治療熱淋、石淋、濕熱黃疸等疾病，沒(méi)有關(guān)于這些成分的研究。通過(guò)系統(tǒng)預(yù)試發(fā)現(xiàn),本品含有較多量的黃酮類成分,為控制其質(zhì)量,保證臨床療效,本研究對(duì)其含有的總黃酮進(jìn)行了含量測(cè)定。1藥品檢驗(yàn)所提供的藥品蘆丁對(duì)照品(由中國(guó)生物制品檢定所提供,批號(hào)0080-9705);連錢草[Glechomalongituba(Nakai)kupr.,上海市藥品檢驗(yàn)所提供]。亞硝酸鈉(太倉(cāng)化工二廠,批號(hào)20001201,分析純)及三氯化鋁(中國(guó)金山區(qū)興塔美興化工廠,批號(hào)990829,分析純)和氫氧化鈉(威爾昆化學(xué)試劑有限公司上海華美藥房經(jīng)銷,批號(hào)20020130,分析純)。UV-2101PC分光光度計(jì)(日本島津);CQ250超聲波清洗儀(上海超聲波儀器廠)。2方法和結(jié)果2.1連錢草粉的制備精密稱取蘆丁對(duì)照品5mg,置于25ml的容量瓶中,加60%乙醇約15ml,超聲使其溶解,放冷,加60%乙醇至刻度,搖勻,得蘆丁標(biāo)準(zhǔn)溶液(0.2mg/ml)。精吸蘆丁標(biāo)準(zhǔn)溶液8ml,置于25ml的容量瓶中,加5%亞硝酸鈉溶液1ml,搖勻,放置6min,加三氯化鋁試液1ml,搖勻,放置6min,再加5%的氫氧化鈉10ml,加水至刻度,搖勻,于波長(zhǎng)200～800nm間掃描,可見在510nm處有最大吸收。精稱2g連錢草粗粉,置于具塞錐形瓶中,加50ml60%乙醇,超聲50min。過(guò)濾,取連錢草續(xù)濾液,不顯色,直接于波長(zhǎng)200～800nm間掃描;取續(xù)濾液1ml,同對(duì)照品蘆丁一樣顯色操作后,于波長(zhǎng)200～800nm間掃描,可見在493nm處有最大吸收,見圖1。2.2蘆丁標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備精密稱取120℃常壓干燥至恒重的蘆丁對(duì)照品21.75mg,置于100ml的容量瓶中,加60%乙醇約60ml,密塞,超聲使其溶解,放冷,加60%乙醇至刻度,搖勻,得蘆丁標(biāo)準(zhǔn)溶液(0.2175mg/ml)。2.3乙醇溶液的配制取連錢草粉末約0.5g(同時(shí)另取連錢草測(cè)定水分),精密稱定,置于具塞錐形瓶中,精密加60%乙醇60ml,密塞,稱定重量,超聲50min。放冷,密塞,再稱定重量,用60%乙醇補(bǔ)足減失的重量,搖均,過(guò)濾,得續(xù)濾液,即供試品溶液。2.4空白對(duì)照法精密量取蘆丁標(biāo)準(zhǔn)溶液0.0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0ml,分別置于25ml的容量瓶中,分別加水6、5、4、3、2、1、0ml,加5%亞硝酸鈉溶液1ml,搖勻,放置6min,加三氯化鋁試液1ml,搖勻,放置6min,再加5%的氫氧化鈉溶液10ml,加水至刻度,搖勻,以第一管作空白對(duì)照,在510nm處測(cè)吸光度。繪制濃度-吸光度曲線,求出回歸方程為y=0.0858A-0.0000597,r=0.9993,式中y代表對(duì)照品濃度(mg/ml),A代表吸光度,對(duì)照品在0～0.04340mg/ml范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。2.5容量瓶吸收劑用量取供試品溶液3ml,按標(biāo)準(zhǔn)曲線項(xiàng)下方法,自“分別置于25ml的容量瓶中”起,同法操作,并每隔1min測(cè)定1次吸光度。結(jié)果表明,供試品溶液與三氯化鋁形成的紅色絡(luò)合物不穩(wěn)定,顯色30min后吸光度下降約2%,建議定容后立即測(cè)定。2.6總黃酮含量測(cè)定ls-ls取同一批號(hào)的連錢草粗粉5份,每份約0.5g(同時(shí)另取本品測(cè)定水分),精密稱定,然后按供試品溶液的制備和標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備項(xiàng)下方法測(cè)定總黃酮的含量,均值為4.22%,RSD=2.19%(n=5)。2.7加樣回收率試驗(yàn)取已知總黃酮含量的連錢草約0.18g,精密稱定,然后按供試品溶液的制備和標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備項(xiàng)下方法測(cè)定總黃酮的含量,計(jì)算平均加樣回收率。結(jié)果平均回收率為102.42%,RSD2.20%(n=5)。2.8樣品測(cè)定精密量取供試品溶液3.0ml,然后按標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備項(xiàng)下方法測(cè)定總黃酮的含量,結(jié)果見表1。3最佳超聲提取時(shí)間的確定及含量測(cè)定根據(jù)黃酮的性質(zhì),曾嘗試用甲醇和不同濃度的乙醇來(lái)提取連錢草中的黃酮類成分,結(jié)果顯示以50%甲醇與60%乙醇提取率最高,又考慮到甲醇的毒性,故最后選用60%乙醇為提取溶媒。最佳超聲提取時(shí)間的考察是通過(guò)精密稱定一定量本品粉末,加一定量的60%乙醇,分別超聲提取10～60min,最后確定50min為最佳提取時(shí)間。通過(guò)比較加不同體積的60%乙醇于本品粉末中,超聲提取50min,最后優(yōu)選出0.5g本品粗粉加60ml的60%乙醇為好。本品的含量測(cè)定