煙草青枯病菌接種煙草葉片的發(fā)病觀察

煙草青枯病菌接種煙草葉片的發(fā)病觀察

卷煙旱澇是我國南方煙區(qū)最重要的疾病之一，每年給煙草業(yè)帶來巨大的經(jīng)濟損失。因此，抗旱性文化的形成一直是湖南省第一位追求卷煙文化的目標。但在抗病育種過程中,大田期對青枯病進行抗性鑒定往往由于氣候條件不適宜發(fā)病而無法進行,而苗期進行抗性鑒定則溫濕條件較易控制。對煙草青枯病菌苗期抗性鑒定的最佳接種方法進行了探索,現(xiàn)將研究結(jié)果報道如下。1材料和方法1.1紅松林市,金朝ac供試煙草品種為K326(A)、88-41(B)、紅花大金元(C)。供試菌株為青枯菌Ps750(湖南農(nóng)業(yè)大學植病教研室提供)。1.2方法1.2.1煙苗培育自3月10日開始,每隔10d播一批煙種,共播3批。播后置于溫室中培養(yǎng)。1.2.2懸浮液的制備用紅四氮唑青枯菌培養(yǎng)基移青枯菌株P(guān)s750于溫箱內(nèi)30℃下培養(yǎng)。48h后,洗配成懸浮液。通過云度計數(shù)法設(shè)置5個濃度,即109、108、107、106、105cfc/ml。1.2.3莖部注射法(1)葉片注射法:用注射器針頭先在葉片主脈兩側(cè)不完全對稱的位置上各刺2~3下,然后取下針頭,用注射器注孔抵壓住已刺孔部位,將配制好的青枯菌液注射至上下表皮之間。置于溫室內(nèi),每天噴水,定期觀察記載葉片注射區(qū)癥狀的變化。(2)莖部穿刺法:用四號注射器將準備好的菌液1.2.4葉片發(fā)病癥狀分級:0級,無明顯癥狀;1級,注射區(qū)褪綠變黃;2級,注射區(qū)形成黃色壞死斑;3級,注射區(qū)形成褐色壞死斑;4級,注射區(qū)壞死斑明顯擴展,葉片萎蔫。2結(jié)果與分析2.1注射葉子2.1.1苗齡葉片發(fā)病鑒定將Ps750配制成5個濃度,即109、108、107、106、105cfc/ml,注射接種煙草品種88-41的3~4葉期和5~6葉期(不同批次)的葉片(頂部第2葉),對照接無菌水。每處理接種5片葉,重復3次。溫室測溫白天為25~28℃,晚上為15~19℃。接種10d后調(diào)查發(fā)病情況,結(jié)果表明,不同濃度對不同苗齡葉片的發(fā)病有影響。濃度為107~109cfc/ml時,葉片發(fā)病癥狀3~4葉期為0.2~1.0級,5~6葉期為0~0.6級;<107cfc/ml時,各苗齡葉片均不發(fā)病。這說明在同一條件下,接種菌液濃度增大,煙草發(fā)病加重,煙草苗齡增大,葉片抗病性增強。2.1.2發(fā)病情況調(diào)查按2.1.1的接種法,將已配制好的Ps7505個濃度的菌液在各品種的3~4葉期葉片上分別接種。每處理5片葉,重復3次。對照(CK)用無菌水。溫室測溫白天為25~28℃,晚上為15~19℃。10d后調(diào)查發(fā)病情況,結(jié)果見表1。由表1可以看出,雖然3個品種發(fā)病均較輕,但仍存在差異,其中A(K326)發(fā)病最輕,其次是B(88-41),C(紅花大金元)發(fā)病最重,最高平均病級達2.0。2.2獨立葉注射2.2.1小齡葉發(fā)病癥狀將已配制的5個不同濃度的Ps750菌液按離體葉片注射法接種于88-41的大、小齡煙葉上,對照(CK)用無菌水。每處理5片葉,重復3次。溫室測溫白天29~32℃,晚上21~24℃。6d后的調(diào)查結(jié)果表明(表2),小齡葉發(fā)病癥狀比大齡葉重,5個接種濃度均發(fā)病,且整體發(fā)病程度比非離體葉片注射接種重,發(fā)病所需時間也比非離體條件下的短。由此可知,離體葉片注射接種法能更快更好地測定煙草苗期抗性。2.2.2材料6、84-33和麻黃大金屬將配制好的Ps7505個不同濃度的菌液,按離體葉片注射法分別接種于K326、88-41和紅花大金元的小齡葉上,其它設(shè)置同2.2.1。6d后進行調(diào)查,結(jié)果(表1)表明,C發(fā)病最重,B其次,A最輕,這與前面非離體條件下鑒定的結(jié)果一致,所不同的是3個品種在5個接種濃度下均發(fā)病,較為理想。2.2.3溫度對煙苗葉片發(fā)病的影響用離體葉片注射法將5個濃度的菌液分別接種于88-41的小齡葉上。每處理10片葉,重復3次,對照用無菌水。然后置不同溫度設(shè)置的光照培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。發(fā)病后(6d)的調(diào)查結(jié)果表明,溫度升高,葉片發(fā)病癥狀加重。在白天溫度≥30℃時,5個接種濃度處理均發(fā)病,這說明在一定溫度范圍內(nèi),溫度越高,煙苗葉片就越易發(fā)生青枯病。為此,煙草青枯病菌苗期抗性的鑒定應選擇在適當高溫條件下進行。2.3煙苗的處理將配制好的Ps750的5個濃度的菌液,按莖部穿刺接種法分別接種于K326、88-41和紅花大金元的煙苗(3~4葉期)上。每處理5株,重復3次,對照用無菌水。經(jīng)過30d的溫室保濕培養(yǎng)后,3個品種均未發(fā)病,解剖煙莖,亦未見維管束變褐,其原因有待探討。3離體葉片注射法接種的抗性特征煙草青枯病菌從根部傷口侵入,一般都可以引起維管束變褐,植株萎蔫,但其在葉片內(nèi)接種的反應不盡一致。本研究結(jié)果表明,不同菌液濃度、不同溫度及不同苗齡和葉齡對煙草葉片發(fā)病癥狀有不同程度的影響。在近似條件下,離體葉片注射法接種比非離體葉片注射法接種發(fā)病程度要重,發(fā)病所需時間較短,而莖部穿刺接種不能使煙苗發(fā)病。無論是葉片注射法(非離體)還是離體葉片注射法均能較好地反映品種間抗性差異,鑒定結(jié)果與周清明等大田鑒定的結(jié)果一致。可以認為,通過離體葉片注射法,在適當高溫(30~35℃)、較低苗齡(3~4葉)或葉齡(頂部)、較高接種濃度