BriCyte E6流式細胞儀標準操作程序

BriCyteE6流式細胞儀原則操作程序1目的規(guī)范原則的BriCyteE6流式細胞儀操作程序，確保儀器設備的正常使用，使得測量數據和檢測成果含有良好的溯源性、精確性和可靠性。2范疇僅合用于BriCyteE6流式細胞儀。3儀器檢測原理BriCyteE6流式細胞儀采用多路激發(fā)、熒光染色的流式細胞技術進行細胞分類和特性分析，并結合流量測定技術實現(xiàn)絕對計數。4儀器設備試劑BriCyteE6流式細胞儀專用試劑：見“淋巴細胞亞群檢測”、“HLA-B27檢測”試劑內容。全部試劑應參考試劑的使用闡明進行保存。變質、超出效期的全部試劑不能使用。5儀器設備標本原始樣品采集、制備、解決、檢查和寄存見檢查科有關規(guī)范。6儀器設備環(huán)境規(guī)定，使用安全方法6.1儀器設備環(huán)境規(guī)定6.1.1空間安裝規(guī)定儀器應安裝在穩(wěn)固工作臺上。在儀器兩側各保存最少0.5米的空間，以方便維護和保養(yǎng)。儀器后部分別最少要有0.25米的空間，以避免妨礙熱氣的排放并確保主機后的液路管道不受擠壓。將BriCyteE6流式細胞儀安放在通風良好、灰塵少的地方。避免在過熱或過冷以及日光直射的環(huán)境中使用BriCyteE6流式細胞儀。確保操作臺面有足夠的空間放置試劑托架及鞘液桶、廢液桶。6.1.2運行條件環(huán)境溫度規(guī)定：15℃～32℃。環(huán)境相對濕度規(guī)定：20%～85%。電源電壓規(guī)定：主機：100~240V，50Hz/60Hz，500VA。儀器設備周邊應盡量無塵、無機械振動、無污染、無大噪音源和電源干擾；遠離強電磁場干擾源；不要靠近電刷型電機、閃爍熒光燈和經常開關的電接觸性設備；建議在運行設備之前對實驗室的電磁環(huán)境進行評定；避免強光直接照射；避免置于熱源及風源前；選擇一種通風良好的位置；含有良好的接地環(huán)境；不要將主機放置在斜面上；室內使用。6.2儀器安全在儀器設備上面和周邊不要使用可燃性危險品，避免引發(fā)火災和爆炸。在電源打開狀態(tài)下，嚴禁打開儀器前面、側面及背面面板，以免損害線路板；嚴禁觸摸BriCyteE6流式細胞儀外殼里面的電子元件，特別避免濕手觸摸，以免造成電擊。儀器設備使用前，必須認真檢查設備之間連接及外接線(件)與否對的（連接辦法見BriCyteE6使用闡明書2.3節(jié)）、正常，電源插頭與否對的插接，設備與否處在正常狀態(tài)。實驗過程中如遇水、電故障或中斷，應立刻關閉影響儀器設備安全的有關開關，并實施安全保護方法。嚴禁魯莽裝卸儀器設備，運輸過程中應避免傾斜，振動和碰撞。如果標本、試劑溢出在分析儀上，立刻擦掉并根據檢查科有關規(guī)范解決。6.3人員安全儀器設備中全部與病人的樣品接觸或有潛在性接觸可能的表面與零件都視污染物。在操作、維護儀器設備時有必要穿戴保護性的外套和手套，頭發(fā)、衣物、手指等與全部的活動部件保持距離。在儀器工作過程中，勿觸及全部運動部件，避免人身傷害。嚴禁觸摸BriCyteE6流式細胞儀內部的電路，特別避免濕手觸摸，以免造成電擊。全部物品（樣本、質控物、校準物、試劑、廢液等），以及同這些物質接觸的區(qū)域都有潛在的生物傳染性危險。操作者在實驗室接觸有關物品和區(qū)域時，應恪守實驗室安全操作規(guī)定，并穿戴好個人防護裝備（如實驗室防護衣，手套等）。試劑一旦接觸皮膚，立刻用大量水沖洗，如有需要請接受醫(yī)生治療；試劑一旦接觸眼睛，立刻用大量水沖洗，并接受醫(yī)生治療。7開關機程序7.1開機準備確保鞘液余量充足，如需要，請更換鞘液桶。確保廢液桶已清空，且已進行了必要的消毒。確保鞘液、廢液的管路無彎折，連接可靠。確保儀器的電源插頭安全插入電源插座。確保計算機電纜與儀器連接就緒。確保條碼掃描儀（如選配）、鍵盤和鼠標的電纜與計算機連接就緒。7.2開機程序儀器開機：打開儀器背面電源開關，儀器正面批示燈變?yōu)榫G色閃爍狀態(tài)。操作軟件登錄：啟動電腦，雙擊電腦桌面上的MRFlow軟件圖標，輸入顧客名和密碼登錄，進入MRFlow操作軟件界面。系統(tǒng)自動進行初始化、開機倒計時及溫控。初始化及溫控過程結束后，彈出“開機完畢”提示，單擊“擬定”，開機完畢，即可進行正常測試。7.3關機程序單擊軟件界面上方快捷圖標區(qū)“（關機）”按鈕，彈出“與否擬定關機？”提示，單擊“是”。再按照提示信息，分別將裝有清洗液(用蒸餾水10倍稀釋)、蒸餾水的試管放置于指定位置，單擊“擬定”后，儀器自動執(zhí)行關機程序；關機流程結束后，彈出“關機完畢”提示，單擊“擬定”，再關閉儀器電源；清空廢液桶中的廢液，并妥善解決廢液；關閉MRFlow軟件窗口，再關閉電腦。8儀器質控8.1實驗試劑及解決通用名稱“流式細胞儀多色質控微球”，英文名稱“FluorescenceSetupParticles”；在渦旋混勻儀上激烈震蕩微球，在流式試管中滴加1滴微球，用0.5ml的流式鞘液稀釋，使用前充足混勻。8.2質控物信息設立單擊“質控”，進入“儀器質控”界面。單擊“基本信息”區(qū)“批號”下拉菜單，選擇一種預先保存的質控物批號，以下圖所示。該批號對應的質控物信息自動顯示在現(xiàn)在頁面。如果該批次質控品初次進行測試，需要通過掃描質控二維碼、從質控信息存儲介質中讀取、手動錄入等方式進行質控物信息的設立，具體辦法以下：掃描質控二維條碼：從質控物包裝中找到廠家提供的二維碼（碼制：QRCode），以下圖所示。單擊“質控物信息”界面下方“二維碼掃描”按鈕，彈出下列窗口。使用條碼掃描儀，逐個掃描二維碼，識別成功的二維碼顯示為綠色，不成功的二維碼顯示為紅色，以下圖所示。如需提前退出，可按鍵盤上的[ESC]鍵。三個二維碼全部掃描成功后，軟件自動解析質控物信息。解析完畢后，質控物信息被錄入現(xiàn)在界面。從質控信息存儲介質中讀取單擊“質控物信息”界面下方“導入”按鈕。選擇導入的途徑及質控物信息文獻后，單擊“打開”，則質控物信息被導入現(xiàn)在頁面。手動錄入在“基本信息”區(qū)設立質控物基本信息，涉及：批號、產品ID、FS閾值、流速。在“各通道靶值”區(qū)設立自動算法項目各通道靶值。在“賠償矩陣”區(qū)設立自動算法項目各通道之間賠償值。錄入完整后，內容被實時保存。8.3上機測試8.3.1BriCyteE6自動進樣機型將配制好的質控微球溶液，混勻后置于指定試管位。在“儀器控制”欄的位置的輸入框中單擊，即可出現(xiàn)樣本盤位置圖，在該圖上選擇質控試管放置的盤號和位置號。單擊“”按鈕，啟動測試。儀器自動完畢系統(tǒng)校準和電壓標定。質控分析完畢后，“質控詳情”界面下顯示當次質控報告，報告中質控狀態(tài)欄均顯示“pass”即可進行樣本測試，如果有“fail”項，需尋找因素重新進行質控測試。在“儀器質控圖”界面可查看一段時間內的質控圖，單擊質控圖上的質控點，右側可同時顯示該點當次的質控報告。8.3.2BriCyteE6開放進樣機型將配制好的質控微球溶液，混勻后置于試管托架上。單擊“”按鈕，啟動測試。儀器自動完畢系統(tǒng)校準和電壓標定。質控分析完畢后，“質控詳情”界面下顯示當次質控報告，報告中狀態(tài)欄均顯示“pass”即可進行樣本測試，如果有“fail”項，需尋找因素重新進行質控測試。在“儀器質控圖”界面可查看一段時間內的質控圖，單擊質控圖上的質控點，右側可同時顯示該點當次的質控報告。淋巴細胞亞群檢測9.1實驗試劑CD3-FITC/CD8-PE/CD45-PerCP/CD4-APC四色試劑（流式細胞法）；CD3-FITC/CD16+56-PE/CD45-PerCP/CD19-APC四色試劑（流式細胞法）；流式溶血劑（使用前用蒸餾水做10倍稀釋，即溶血劑:蒸餾水=1:9）。9.2樣本解決取兩支試管，其中1支試管中加入20ulCD3-FITC/CD8-PE/CD45-PerCP/CD4-APC四色試劑，標記為“T_001”，另一支試管中加入20ulCD3-FITC/CD16+56-PE/CD45-PerCP/CD19-APC四色試劑，標記為“BNK_001”；各吸取50ulEDTA抗凝靜脈血分別加入兩支試管底部（避免將血樣沾到試管壁上）；試管在渦旋混勻器上輕旋混勻，室溫（20℃~25℃）避光孵育15min；分別向兩個試管中加入450ul1×溶血素，在渦旋混勻器上輕旋混勻，室溫（20℃~25℃）避光孵育15min；上機檢測。9.3儀器檢測9.3.1BriCyteE6自動進樣機型的自動檢測單擊“”按鈕新增樣本；輸入樣本編號；單擊“檢查項目”框下拉列表，從中選擇“T/B/NK-Auto”模板；雙擊待測樣本T試管的“位置”框，彈出樣本盤示意圖，單擊盤號兩側的左/右箭頭按鈕，切換到欲選擇的盤號，單擊孔位選擇T試管在樣本盤上的位置；雙擊待測樣本BNK試管的“位置”框，彈出樣本盤示意圖，單擊孔位選擇BNK試管在樣本盤上的位置（樣本下的全部試管的盤號自動保持一致，更換任何試管的盤號，該樣本下其它試管會自動更改為與其一致的盤號）；在“樣本”界面“樣本信息”區(qū)中可錄入樣本及病人信息；將準備好的樣本放入與工作單一致的樣本盤及試管位，對的安裝樣本盤。選中工作單列表中待測樣本的起始試管T試管（非常重要，自動測試只識別工作單中起始試管下列的樣本）；單擊“儀器控制”中的“”啟動自動進樣按鈕，儀器自動從設定的起始位置處開始依次執(zhí)行樣本測定。全部試管測定完畢后，自動進樣停止，儀器狀態(tài)批示燈恢復為綠色長亮，此時可安全打開倉門，取出試管或卸下樣本盤。兩管樣本都測試完畢后，軟件自動分析測試成果，并可在報告預覽中出具檢測報告。同時也可根據需要，調節(jié)圖形中的設門位置，統(tǒng)計成果隨之更新。檢測報告9.3.2BriCyteE6開放進樣機型的檢測單擊“”按鈕新增樣本；輸入樣本編號；單擊“檢查項目”框下拉列表，從中選擇“T/B/NK-Auto”模板；在“樣本”界面“樣本信息”區(qū)中可錄入樣本及病人信息；將T試管混勻后置于試管托架上，單擊“儀器控制”中的“”啟動測試；當T試管測試完畢后，將T試管取下，將BNK試管混勻后置于試管托架上，單擊“儀器控制”中的“”啟動測試；兩管樣本都測試完畢后，軟件自動分析測試成果，并可在報告預覽中出具檢測報告。同時也可根據需要調節(jié)圖形中的設門位置，統(tǒng)計成果隨之更新；檢測報告：HLA-B27檢測10.1實驗試劑IgG2a-FITC/IgG1-PE雙色試劑（流式細胞法）；HLA-B27-FITC/HLA-B7-PE雙色試劑（流式細胞法）；流式溶血劑（使用前用蒸餾水做10倍稀釋，即溶血劑:蒸餾水=1:9）；磷酸鹽緩沖液（自配）。10.2樣本解決取兩支試管，其中1支試管中加入20ulIgG2a-FITC/IgG1-PE雙色同型對照，標記為“Isotype_001”，另一支試管中加入20ulHLA-B27-FITC/HLA-B7-PE雙色試劑，標記為“B27_001”；各吸取100ulEDTA抗凝靜脈血分別加入2支試管底部（避免將血樣沾到試管壁上）；試管在渦旋混勻器上輕旋混勻，室溫（20℃～25℃）避光孵育15min；每管各加入2ml1×溶血素，在渦旋混勻器上輕旋混勻，室溫（20℃～25℃）避光孵育10min（避免細胞和溶血素過長時間的接觸，否則會造成白細胞的破壞）；300×g離心5min，棄去上清（使用移液器小心吸取上清，使剩余液體為50～100ul，避免將管底的細胞沉淀懸起），加入2ml磷酸鹽緩沖液緩沖液，輕旋混勻，使管底細胞重新懸起，300×g離心5min，棄去上清（使用移液器小心吸取上清，使剩余液體為50～100ul，避免將管底的細胞沉淀懸起）；加入適量的磷酸鹽緩沖液（樣本在2h內進行檢測）或多聚甲醛溶液（樣本放置超出2h后檢測）；10.3上機檢測10.3.1BriCyteE6自動進樣機型的自動檢測單擊“”按鈕新增樣本；輸入樣本編號；單擊“檢查項目”框下拉列表，從中選擇“HLA-B27-Auto”模板；雙擊待測樣本Isotype試管的“位置”框，彈出樣本盤示意圖，單擊盤號兩側的左/右箭頭按鈕，切換到欲選擇的盤號，單擊孔位選擇Isotype試管在樣本盤上的位置；雙擊待測樣本B27試管的“位置”框，彈出樣本盤示意圖，單擊孔位選擇B27試管在樣本盤上的位置（樣本下的全部試管的盤號自動保持一致，更換任何試管的盤號，該樣本下其它試管會自動更改為與其一致的盤號）；在“樣本”界面“樣本信息”區(qū)中可錄入樣本及病人信息；將準備好的樣本放入與工作單一致的樣本盤及試管位，對的安裝樣本盤。選中工作單列表中待測樣本的起始試管Isotype試管（非常重要，自動測試只識別工作單中起始試管下列的樣本）；單擊“儀器控制”中的“”啟動自動進樣按鈕，儀器自動從設定的起始位置處開始依次執(zhí)行樣本測定。全部試管測定完畢后，自動進樣停止，儀器狀態(tài)批示燈恢復為綠色長亮，此時可安全打開倉門，取出試管或卸下樣本盤。兩管樣本都測試完畢后，軟件自動分析測試成果，并可在報告預覽中出具檢測報告。同時也可根據需要，調節(jié)圖形中的設門位置，統(tǒng)計成果隨之更新。檢測報告10.3.2BriCyteE6開放進樣機型的檢測單擊“”按鈕新增樣本；輸入樣本編號；單擊“檢查項目”框下拉列表，從中選擇“HLA-B27-Auto”模板；在“樣本”界面“樣本信息”區(qū)中可錄入樣本及病人信息；將1號試管混勻后置于試管托架上，單擊“儀器控制”中的“”啟動測試；當1號試管測試完畢后，將其取下，將2號試管混勻后置于試管托架上，單擊“儀器控制”中的“”啟動測試；兩管樣本都測試完畢后，軟件自動分析測試成果，并可在報告預覽中出具檢測報告。同時也可根據需要調節(jié)圖形中的設門位置，統(tǒng)計成果隨之更新；檢測報告；鞘液及廢液解決11.1更換鞘液鞘液將用完時，儀器產生“請更換鞘液”提示；取一桶鞘液，打開桶的包裝蓋，將鞘液瓶蓋組件插入后擰緊，并放置于試劑托架上的鞘液位置；單擊提示信息中的“擬定”，之后能夠繼續(xù)進行測試。11.2清空廢液廢液將滿時，儀器產生“請清空廢液”提示；取下廢液瓶蓋組件，將廢液桶清空后，裝回廢液瓶蓋組件，并放回試劑托架上的廢液位置；單擊提示信息中的“擬定”，之后能夠繼續(xù)進行測試。維護與保養(yǎng)12.1定時維護每6個月保養(yǎng)：更換鞘液過濾器；更換氣泡過濾器；由Mindray服務進行的計劃防止性維護。12.2按需維護12.2.1儀器長久放置后開機維護當儀器較長時間（1周以上）不使用，再次開機后，應進入軟件“服務”——“維護”界面，分別執(zhí)行“液