20種殺菌劑對蛀球孢菌褐斑病的抑制作用

20種殺菌劑對蛀球孢菌褐斑病的抑制作用

棕櫚樹是中國冷季草坪最常見、最嚴重的疾病之一。它也是莖葉屬植物科最嚴重的夏季疾病之一。褐斑病爆發(fā)時會引起果嶺草坪大面積死亡,是高爾夫球場草坪質(zhì)量管理中最大的難題之一。草坪褐斑病是一種土傳真菌病害,主要由立枯絲核菌Rhizoctoniasolani引起。迄今為止,立枯絲核菌已鑒定出12個菌絲融合群,Blazier和Conway的研究發(fā)現(xiàn)感染褐斑病的不同草種其立枯絲核菌融合群有明顯的差異,Kataria等的研究指出不同的立枯絲核菌融合群對殺菌劑的敏感性也不同。致病菌的這些差異給草坪褐斑病的有效防治帶來了一定的困難。早在1917年國外就開始對草坪褐斑病進行防治研究,在生態(tài)防治、化學(xué)防治及生物防治等方面均有過一些報道[5,6,7,8,9,10,11,12,13,14,15]。國內(nèi)有關(guān)草坪褐斑病的研究相對較少,尚缺乏能夠顯著控制褐斑病危害的有效藥劑,僅有的幾篇褐斑病藥劑篩選研究也都是針對高羊茅Festucaarundinacea、草地早熟禾Poapratensis等園林綠化草種,針對匍匐翦股穎草坪褐斑病的藥劑篩選還未見報道。從感染褐斑病的匍匐翦股穎果嶺草坪上分離出立枯絲核菌,采用生長速率法比較了20種不同類型殺菌劑對該致病菌菌絲生長的抑制效果,旨在篩選出抑菌效果顯著的殺菌劑,為我國匍匐翦股穎草坪褐斑病的有效防治提供理論依據(jù)。1材料和方法1.1試驗材料1.1.1試驗劑采用的20種殺菌劑情況見表1。1.1.2黃瓜片的制備2005年9月從上海交通大學(xué)實驗農(nóng)場沙坪果嶺已感染褐斑病的匍匐翦股穎植株上分離出立枯絲核菌。具體分離方法:從匍匐翦股穎上采集感病嚴重的病葉,沖洗凈表面沙土后,于病健交界處剪取5mm長的小段,用75%酒精表面消毒3次,無菌水沖洗3遍,洗凈。移植到無菌的黃瓜片上,置于培養(yǎng)皿中25℃下保濕培養(yǎng)。24h后將新長出的菌絲尖段轉(zhuǎn)接到CMA培養(yǎng)基(玉米粒60g煮沸1h后,定容到1000mL;瓊脂18~20g溶化,121℃下常規(guī)高壓滅菌20min)上純化。再將純化后的真菌轉(zhuǎn)接到PDA培養(yǎng)基上,25℃恒溫培養(yǎng),經(jīng)柯赫氏證病律證實后,備用。1.2試驗計劃和方法1.2.1含藥培養(yǎng)基平板的制備將表1中的20種供試藥劑按照各自的推薦的質(zhì)量濃度(見表2)配好后,加入熔融狀態(tài)的水瓊脂培養(yǎng)基制成含藥培養(yǎng)基平板(1mL藥劑∶20mL培養(yǎng)基)。切取PDA平板上的菌落邊緣菌餅(直徑為4.62mm),移接至含藥培養(yǎng)基(直徑為96.10mm)中央。每處理重復(fù)3次,設(shè)無藥培養(yǎng)基(直徑為96.10mm)為對照。25℃下恒溫培養(yǎng),觀察。1.2.2質(zhì)量濃度篩選將藥劑篩選中抑菌效果顯著的殺菌劑分別設(shè)4個質(zhì)量濃度梯度,比較不同質(zhì)量濃度下的抑菌效果以確定適宜的用藥質(zhì)量濃度。具體操作同上。1.3藥劑相對抑菌率測定接種后將各處理在25℃條件下恒溫培養(yǎng)7d,待對照培養(yǎng)皿中的菌絲長滿時,采用十字交叉法測定各處理的菌落直徑,計算菌落的凈生長量及藥劑的相對抑菌率。凈生長量=培養(yǎng)后菌落直徑-接種菌餅直徑相對抑菌率=對照菌落直徑?處理菌落直徑對照菌落凈生長量×100%=對照菌落直徑-處理菌落直徑對照菌落凈生長量×100%運用SAS6.12統(tǒng)計分析軟件對試驗數(shù)據(jù)進行方差分析,并采用鄧肯氏新復(fù)極差法檢測各處理間的差異顯著性。2結(jié)果與分析2.1抑菌率:100%以上,抑菌率共產(chǎn)生2.推薦質(zhì)量濃度下,參試的20種殺菌劑對立枯絲核菌的抑制效果間存在不同程度差異。殺毒礬、腈菌唑、丙環(huán)唑的抑菌效果最好,抑菌率均達到100%。退菌特、三唑酮、百菌清、腐霉利、克露、金雷多米爾等藥劑也表現(xiàn)出較好的抑菌效果,抑菌率都在92%以上。甲基托布津、農(nóng)用鏈霉素、嘧菌酯、安克、普力克、毒克、井崗霉素、多菌靈、菌立停、敵克松的抑菌效果相對較差,抑菌率顯著低于殺毒礬、腈菌唑、丙環(huán)唑等殺菌劑(表2)。2.2克露、轉(zhuǎn)變及其他雙溶劑對枯絲核菌的抑菌效果除百菌清外,其他參試藥劑的抑菌效果均隨藥劑處理質(zhì)量濃度增加而提高。丙環(huán)唑在最低處理質(zhì)量濃度(6mg/L)時抑菌率仍高達100%,表現(xiàn)出極強的抑菌效果。殺毒礬質(zhì)量濃度在38mg/L、腈菌唑在7mg/L以上時的抑菌率也都達到100%,但低于這2個質(zhì)量濃度時,抑菌率均下降至96%左右。因此,丙環(huán)唑、殺毒礬、腈菌唑?qū)α⒖萁z核菌的最佳抑制臨界質(zhì)量濃度可分別暫定為6、38和7mg/L。克露和金雷多米爾這2種藥劑在最高質(zhì)量濃度處理下(克露86mg/L、金雷多米爾81mg/L),抑菌率也可達到了100%。但隨著藥劑質(zhì)量濃度的下降,抑菌效果也顯著下降?？寺?9mg/L、金雷多米爾27mg/L時的抑菌率分別只有76.3%和58.9%。在本測試質(zhì)量濃度范圍內(nèi),其他殺菌劑的抑菌率都未達到100%(表3)。3藥劑的篩選和最佳質(zhì)量濃度的確定國內(nèi)對草坪褐斑病的防治報道較多來源于綠化草坪管理中的一些經(jīng)驗總結(jié),也曾在高羊茅、草地早熟禾等綠化草種上做了一些褐斑病的藥劑篩選和防治試驗,但是尚缺乏完整、系統(tǒng)的研究報道。錢振官等通過室內(nèi)與田間藥效試驗,認為百菌清、多菌靈對高羊茅褐斑病有較好防效,嚴巍等通過田間藥劑防治,認為寶草津、力克菌、敵力脫、甲基托布津等是防治高羊茅草坪褐斑病的較好藥劑,但晁龍軍的研究認為百菌清對褐斑病的防效較差,季延平、周慶椿則認為多菌靈對草坪褐斑病的防治效果極差;蔣家珍、趙美琦等用14種殺菌劑對立枯絲核菌進行了毒力測定,結(jié)果認為甲基托布津和金雷多米爾對致病菌具有很強的毒力,但季延平的研究則認為甲基托布津?qū)α⒖萁z核菌的毒力極差,只有7.6%。這些相互矛盾的研究結(jié)果可能是由不同研究中立枯絲核菌融合群的差異引起的,文獻記錄不同草坪草種感染的立枯絲核菌融合群有明顯的差異,不同的立枯絲核菌融合群對殺菌劑的敏感性也不同。因此,必須針對特定草坪草種的致病菌進行廣泛的藥劑篩選,才能有效地控制我國草坪褐斑病的嚴重危害。本研究綜合比較了20種殺菌劑的室內(nèi)抑菌效果后發(fā)現(xiàn),在殺菌劑的推薦質(zhì)量濃度下,殺毒礬、腈菌唑、丙環(huán)唑、退菌特、三唑酮、百菌清、腐霉利、克露、金雷多米爾9種殺菌劑對立枯絲核菌菌絲的生長有較強的抑制作用,抑菌率均在92%以上,顯著高于其他參試藥劑。其中,殺毒礬、腈菌唑和丙環(huán)唑的抑菌效果最好。腈菌唑?qū)α⒖萁z核菌菌絲生長的抑制研究尚屬初次報道,通過進一步的田間藥效驗證后,可能會成為防治匍匐翦股穎褐斑病的有效藥劑。隨著殺菌劑質(zhì)量濃度的下降,幾乎所有藥劑對立枯絲核菌的毒力都有所下降。通過本試驗的有效質(zhì)量濃度篩選,可以初步確定丙環(huán)唑、殺毒礬、腈菌唑3種殺菌劑為防治匍匐翦股穎褐斑病的高效藥劑,室內(nèi)抑菌最佳臨界質(zhì)量濃度分別為6、38和7mg/L。研究中三唑類藥劑(丙環(huán)唑、腈菌唑、三唑酮)對立枯絲核菌均表現(xiàn)出很強的毒力。另外,殺毒礬(惡霜靈和代森錳鋅)、退菌特(福美雙、福美鋅、福美甲胂)、克露(霜脲氰和代森錳鋅)、金雷多米爾(精甲霜靈和代森錳鋅)等復(fù)配藥也表現(xiàn)出很好的抑菌效果。本研究結(jié)果為大田驗證提供了用藥依據(jù)。傳統(tǒng)的藥劑防治采用的是化學(xué)藥劑,其極高