現(xiàn)代儀器分析技術(shù)在中藥炮制機(jī)理研究中的應(yīng)用

現(xiàn)代儀器分析技術(shù)在中藥炮制機(jī)理研究中的應(yīng)用

1中藥制劑學(xué)發(fā)展概況中醫(yī)藥的制備是根據(jù)中醫(yī)藥理論和辨證論治的需要、藥物本身的性質(zhì)以及藥物適應(yīng)和制劑的不同要求而進(jìn)行的一種制藥技術(shù)。這一傳統(tǒng)的制藥技術(shù)是根據(jù)人體的臨床經(jīng)驗(yàn)積累的，是中華民族歷代醫(yī)家智慧的結(jié)晶。經(jīng)過(guò)加工和加工后，中藥被稱為中藥飲片。中藥飲片是中醫(yī)臨床處方的一種處方，也是中藥生產(chǎn)的一種西藥。因此，中藥飲片的規(guī)范化和規(guī)范化是中醫(yī)學(xué)現(xiàn)代化的重要因素之一。國(guó)家將中藥飲片的生產(chǎn)技術(shù)和中藥飲片的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)產(chǎn)業(yè)納入我國(guó)最重要的高新技術(shù)產(chǎn)業(yè)化領(lǐng)域之一。中藥經(jīng)過(guò)加工炮制以后,藥性和臨床功效都發(fā)生了明顯變化,這說(shuō)明中藥在炮制過(guò)程中發(fā)生了變化,如何表征中藥在炮制過(guò)程中發(fā)生的變化及其規(guī)律是中藥炮制機(jī)理研究的一個(gè)重要課題.在傳統(tǒng)的中藥炮制理論中,我們已經(jīng)有了一套簡(jiǎn)單而生動(dòng)的理論來(lái)解釋這種變化,如“鹽制入腎,醋制入肝,酒制升提…”.在缺乏現(xiàn)代分析技術(shù)與方法的時(shí)代,人們無(wú)法在微觀領(lǐng)域看到中藥在炮制前后發(fā)生的變化然而祖先在中醫(yī)理論的指導(dǎo)下,發(fā)展了中藥炮制理論,這是一個(gè)創(chuàng)新,它極大地推動(dòng)了中藥炮制學(xué)的發(fā)展.隨著現(xiàn)代實(shí)驗(yàn)科學(xué)的引入,我們?cè)谶M(jìn)行中藥炮制原理研究中開(kāi)始探索使用藥理學(xué)方法,通過(guò)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)比較炮制前后的藥效學(xué)差異.但由于中醫(yī)病癥模型難以復(fù)制等原因,很難得到可靠的結(jié)果.而今天當(dāng)現(xiàn)代儀器分析技術(shù)發(fā)展到可以在微觀層面上分析這種變化時(shí),我們就有必要全方位地探索中藥炮制的機(jī)理,這樣才能把中藥炮制學(xué)向更高層次推進(jìn).20世紀(jì)80年代以來(lái),分析化學(xué)發(fā)展迅速,各種新的分析技術(shù)、分析方法和分析儀器不斷涌現(xiàn),為復(fù)雜體系的分析提供了有力的手段,在中藥現(xiàn)代研究中已經(jīng)得到了推廣和應(yīng)用,也大大推動(dòng)了中藥炮制學(xué)的發(fā)展.在中藥炮制機(jī)理研究領(lǐng)域,各種最新的現(xiàn)代儀器分析技術(shù)都已經(jīng)有應(yīng)用,取得了較多成果可以說(shuō),中藥炮制機(jī)理的現(xiàn)代研究是伴隨著現(xiàn)代儀器分析技術(shù)的發(fā)展而發(fā)展的.本文結(jié)合本實(shí)驗(yàn)室的研究工作,對(duì)近年來(lái)各種現(xiàn)代儀器分析技術(shù)在中藥炮制機(jī)理研究中的應(yīng)用進(jìn)行了綜述.2光譜技術(shù)2.1利用紫外光譜法研究.主要問(wèn)紫外光譜主要用于化合物的結(jié)構(gòu)鑒定和含量測(cè)定,根據(jù)中藥所含組分的不飽和程度,可以利用紫外光譜進(jìn)行鑒別.UV具有儀器普及、操作簡(jiǎn)單、樣品用量少等特點(diǎn),可以在宏觀上研究中藥炮制前后組分的變化,為進(jìn)一步的炮制機(jī)理研究提供依據(jù).但此方法提供的信息量少,且易受溶劑和雜質(zhì)的影響,準(zhǔn)確度和重現(xiàn)性不高.如徐自升等利用紫外光譜法研究了懷山藥炮制前后的變化,發(fā)現(xiàn)生山藥在269nm和220nm處有吸收,而山藥與麥麩加熱炮制后在258nm和222nm處有吸收,表明懷山藥炮制前后成分發(fā)生了變化.烏莉婭·沙依提等研究了維吾爾藥孜然炮制前后紫外光譜的變化,結(jié)果表明孜然醋制前后的紫外吸收光譜圖發(fā)生明顯變化,生藥孜然中224nm、260~360nm的紫外吸收峰明顯減弱,這可能是醋制過(guò)程中某些蒽醌類及含苯類成分得以減少或清除引起的.紫外光譜的變化必然伴隨著成分的改變,以上研究也說(shuō)明紫外光譜可以用于在整體上研究中藥炮制前后的變化.2.2紅外光譜分析技術(shù)在中藥中的應(yīng)用拓展紅外光譜是利用化合物在低能量照射下分子發(fā)生振動(dòng)的原理來(lái)提供結(jié)構(gòu)信息,可提供分子中有關(guān)官能團(tuán)的內(nèi)在信息,可以進(jìn)行定量及無(wú)損分析.IR能夠提供樣品的綜合信息,靈敏度高、操作簡(jiǎn)便、譜帶專屬性強(qiáng),借助IR可對(duì)中藥炮制前后的成分變化進(jìn)行分析和預(yù)測(cè),從而為闡明中藥炮制機(jī)理奠定基礎(chǔ).近年來(lái),二維紅外相關(guān)光譜技術(shù)(2D-FTIR)得到較快發(fā)展,提高了紅外光譜圖的分辨率,可以在揭示分子內(nèi)/分子間的相互作用及判斷分子各官能團(tuán)反應(yīng)的先后順序研究中發(fā)揮作用,也可以有效地揭示中藥炮制前后的變化規(guī)律.如XuCH等利用傅立葉變換紅外光譜法結(jié)合二維紅外光譜技術(shù)研究中藥蔓荊子炮制前后的變化,結(jié)果顯示二階導(dǎo)數(shù)紅外光譜信息有一定的指紋性,而二維紅外光譜有更強(qiáng)的特征性,能夠有效地區(qū)分蔓荊子生品和炮制品.其炮制機(jī)理是炮制后脂類成分大量減少,而黃酮類成分減少不多,從而造成黃酮類成分的相對(duì)含量先升高,后降低的趨勢(shì).中藥地黃經(jīng)黃酒加熱蒸制后稱為熟地黃,其功效發(fā)生了很大的變化,其所含成分也必然發(fā)生了轉(zhuǎn)變.利用二維紅外光譜技術(shù)對(duì)地黃蒸制過(guò)程進(jìn)行動(dòng)態(tài)連續(xù)跟蹤分析,發(fā)現(xiàn)地黃蒸制過(guò)程中二維紅外光譜發(fā)生了顯著的變化(圖1).由于地黃中含有大量的水蘇糖,根據(jù)炮制過(guò)程中二維紅外光譜變化規(guī)律,且地黃炮制后變甜,說(shuō)明炮制過(guò)程中可能有果糖生成,由此推測(cè)地黃炮制的機(jī)理包含水蘇糖水解的過(guò)程(圖2),從而引起藥效的變化.這也提示我們,中藥炮制機(jī)理十分復(fù)雜,采用傳統(tǒng)的分析方法可能無(wú)法得出可靠的結(jié)果,有必要采用更有針對(duì)性的分析技術(shù)進(jìn)行全面的研究,可能得出正確的結(jié)論.2.3熒光光譜定量分析常用的原子光譜分析法包括原子吸收光譜(AAS)、原子發(fā)射光譜(AES)和原子熒光光譜(AFS).原子吸收光譜是指由待測(cè)元素?zé)舭l(fā)出的特征譜線通過(guò)供試品蒸氣時(shí),被蒸氣中待測(cè)元素的基態(tài)原子所吸收,吸收遵循一般分光光度法的吸收定律,通過(guò)測(cè)定輻射光強(qiáng)度減弱的程度可求出待測(cè)元素的含量,是中藥中微量元素定量分析的常用方法.原子發(fā)射光譜法是利用物質(zhì)在熱激發(fā)或電激發(fā)下,每種元素的原子或離子發(fā)射特征光譜來(lái)判斷物質(zhì)的組成,而進(jìn)行元素的定性與定量分析的方法,其中最為常用的是電感耦合等離子體原子發(fā)射光譜法(ICP-AES).原子熒光光譜是介于原子發(fā)射光譜和原子吸收光譜之間的光譜分析技術(shù).它的基本原理是基態(tài)原子吸收合適的特定頻率的輻射而被激發(fā)至高能態(tài),而后激發(fā)過(guò)程中以光輻射的形式發(fā)射出特征波長(zhǎng)的熒光.這三種方法的原理不同,但都具有較高的靈敏度和較寬的線性范圍,非常適合微量元素的定量分析.由于微量元素與中藥藥效有一定的相關(guān)性,因此,探索炮制前后微量元素的含量成為研究中藥炮制機(jī)理的重要方向之一.如李軍等采用AAS法測(cè)定柴胡不同炮制品中5種微量元素的含量,結(jié)果在3種炮制品中,柴胡醋炙品中5種微量元素的含量最低,酒炙品中Fe、Mg、Zn含量最高.可見(jiàn)炮制對(duì)柴胡中微量元素的含量有一定的影響.宋秀環(huán)等采用AFS法對(duì)不同粒度雄黃及其炮制品中可溶、毒性砷含量進(jìn)行檢測(cè),實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn),礦物藥雄黃粒度以100~200目為宜,酸水淬飛炮制最佳,在還原性氫氣和惰性氬氣氛圍中保存,時(shí)間短、溫度低、濕度小,產(chǎn)生的易溶劇毒物三氧化二砷(As2O3)較少,通過(guò)炮制處理降低毒性成分的含量是礦物藥雄黃中炮制的主要目的.我們實(shí)驗(yàn)室也在從事中藥炮制前后微量元素含量變化研究.我們采用ICP-AES法對(duì)山茱萸生品和山茱萸炮制品中的微量元素進(jìn)行分析,結(jié)果在山茱萸生品溶出液中檢出十八種無(wú)機(jī)元素.溶出液富含K、Ca、Mg等元素,炮制后除Cu明顯下降,Ba、Ni基本不變外,其他各種元素均有不同程度的增加,稀土元素La、Ce等元素含量增大明顯,這些變化可能是山茱萸用黃酒蒸制后補(bǔ)肝腎作用增強(qiáng)的物質(zhì)基礎(chǔ).礦物藥如自然銅,雄黃等是中藥的重要組成部分,它們基本上由無(wú)機(jī)物組成,因此針對(duì)微量元素開(kāi)展礦物藥炮制機(jī)理的研究就顯得更為重要.我們也曾采用ICP-AES法對(duì)自然銅,赭石高溫煅制前后的微量元素進(jìn)行研究,發(fā)現(xiàn)高溫煅制后微量元素的煎出量變化很大(表1),這些變化是礦物藥?kù)阎坪笏幮ё兓闹饕獧C(jī)理.3色度法3.1馬錢子的制劑機(jī)理研究薄層色譜是將適宜的固定相涂布于玻璃板、塑料或鋁基片上,形成一均勻薄層,待點(diǎn)樣、展開(kāi)后,與適宜的對(duì)照物按同法在同板上所得的色譜圖作對(duì)比,并可用薄層掃描儀進(jìn)行掃描.TLC操作簡(jiǎn)單,色譜結(jié)果直觀,具有分離、鑒定雙重功能,是中藥分析的常用手段,在中藥炮制機(jī)理研究中也得到了廣泛的應(yīng)用.我們實(shí)驗(yàn)室在國(guó)內(nèi)較早采用此方法進(jìn)行中藥馬錢子的炮制機(jī)理的研究.研究發(fā)現(xiàn),馬錢子經(jīng)過(guò)砂燙炮制后,士的寧和馬錢子堿在水煎液中含量均有不同程度的下降,而士的寧氮氧化物和馬錢子堿氮氧化物在水煎液中含量均有所增加,可能是部分士的寧和馬錢子堿在高溫條件下轉(zhuǎn)化為士的寧氮氧化物和馬錢子堿氮氧化物(圖3).進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)士的寧單體在加熱過(guò)程中的確會(huì)發(fā)生一系列的轉(zhuǎn)化,生成士的寧氮氧化物等成分,通過(guò)對(duì)這些成分的藥效進(jìn)行進(jìn)一步的相關(guān)性研究,解釋了馬錢子炮制減毒的機(jī)理.此外,我們還采用TLC法研究了馬錢子炮制前后其他成分的含量,如馬錢子苷等,從而基本闡明了馬錢子的炮制機(jī)理.但TLC也有局限性,如靈敏度低、準(zhǔn)確度不高、影響因素較多,對(duì)含量很低的成分不易觀察到,嚴(yán)重制約了它的應(yīng)用.近年來(lái),薄層色譜技術(shù)有了新的發(fā)展,出現(xiàn)了高效薄層色譜、微乳薄層色譜等,TLC正朝著測(cè)定過(guò)程標(biāo)準(zhǔn)化、自動(dòng)化的方向發(fā)展,這些進(jìn)步將使TLC在中藥炮制機(jī)理研究中的應(yīng)用更加廣泛.3.2化學(xué)成分分析高效液相色譜是以液體溶劑作為流動(dòng)相的色譜技術(shù),有分離效能高、選擇性高、檢測(cè)靈敏度高和分析速度快的特點(diǎn).HPLC是目前中藥成分分析中極有應(yīng)用價(jià)值的技術(shù),隨著樣品純化技術(shù)的提高,HPLC能夠更準(zhǔn)確地定量分析中藥成分,是中藥炮制機(jī)理研究的重要手段之一.我們利用HPLC技術(shù)對(duì)山茱萸炮制前后的指紋圖譜進(jìn)行了定性定量分析,結(jié)果顯示山茱萸經(jīng)黃酒加熱蒸制后各主要成分都發(fā)生了比較明顯的變化,其中5羥甲基糠醛(5-HMF)的含量明顯增加(見(jiàn)圖4),這些成分含量的變化與其藥效密切相關(guān),也是山茱萸的炮制機(jī)理的一部分.王維皓等利用HPLC方法對(duì)生姜、干姜、炮姜、姜炭進(jìn)行了化學(xué)成分的分析比較,結(jié)果從中指認(rèn)出6-姜辣素、6-姜酚和姜酮3個(gè)色譜峰.從生姜到干姜、炮姜、姜炭的炮制過(guò)程中,6-姜辣素逐漸降低,6-姜酚逐漸增高,姜酮在加工至炮姜時(shí)出現(xiàn),且含量最高,而干姜和生姜中沒(méi)有.可見(jiàn)生姜隨著加工炮制火候和條件的逐步劇烈,所制成的干姜、炮姜、姜炭制品中的酚類成分在含量和成分間的比例上發(fā)生了變化,這些變化與其功效的改變息息相關(guān).LiuZ等利用HPLC法分析何首烏加熱蒸制后新產(chǎn)生成分2,3-二氫-3,5-二羥基-6-甲基-4氫-吡喃-4-酮(DDMP)和5-HMF的含量隨炮制時(shí)間的變化,結(jié)果發(fā)現(xiàn)在高溫蒸制的60h時(shí)間內(nèi),隨蒸制時(shí)間的延長(zhǎng)DDMP的含量逐漸升高,至蒸制24h達(dá)到最高,隨后開(kāi)始逐漸降低;5-HMF的含量隨炮制時(shí)間的延長(zhǎng)逐漸升高,這些結(jié)果表明何首烏在蒸制過(guò)程中發(fā)生了美拉德反應(yīng),這是何首烏炮制前后藥效變化的主要機(jī)理.由此可見(jiàn),中藥炮制后功效變化的基礎(chǔ)是成分的變化,這種變化既可以是質(zhì)變,也可能是成分的含量和比例的變化,其中的過(guò)程十分復(fù)雜,需要進(jìn)行全面的分析和比較.3.3在制劑分析中的應(yīng)用高效毛細(xì)管電泳是以高壓電場(chǎng)為驅(qū)動(dòng)力,毛細(xì)管為分離通道,依據(jù)樣品中各組分之間淌度和分配行為上的差異而實(shí)現(xiàn)分離的一類液相分離技術(shù),具有分離效率高、所需樣品少、溶劑消耗少等特點(diǎn).HPCE已經(jīng)日益廣泛的應(yīng)用于生物堿、黃酮、酚類、有機(jī)酸、香豆素及其他成分的分離、鑒別和含量測(cè)定,在炮制前后中藥成分分析中也已有應(yīng)用研究.如高言明等建立了毛細(xì)管區(qū)帶電泳法研究黃連、黃柏炮制前后小檗堿的含量變化,發(fā)現(xiàn)黃連和黃柏藥材經(jīng)炮制后,其中鹽酸小檗堿的含量都有一定程度下降,原因可能是在炮制過(guò)程中小檗堿因溫度增加而被分解.4波譜法4.1種特殊的毒性成分質(zhì)譜分析是通過(guò)對(duì)樣品離子的質(zhì)量和強(qiáng)度的測(cè)定,來(lái)進(jìn)行化學(xué)成分和結(jié)構(gòu)分析的一種方法.質(zhì)譜能夠給出有機(jī)化合物的分子量、分子式、分子離子和碎片離子,以及揭示生成碎片離子的裂解方式和有機(jī)分子結(jié)構(gòu)類型關(guān)系的規(guī)律性.目前,還出現(xiàn)了串聯(lián)質(zhì)譜,最常見(jiàn)的是三級(jí)四極桿串聯(lián)質(zhì)譜,此技術(shù)大大擴(kuò)展了質(zhì)譜的應(yīng)用范圍,在分析組成復(fù)雜的中藥成分中尤有優(yōu)勢(shì),在中藥炮制機(jī)理研究中也有著廣闊的應(yīng)用空間.烏頭是一味有毒中藥,其主要毒性成分為雙酯型生物堿,如烏頭堿、中烏頭堿和次烏頭堿,但經(jīng)過(guò)炮制后毒性降低.烏頭的炮制要經(jīng)過(guò)長(zhǎng)時(shí)間的水加熱處理,將炮制前后的烏頭樣品分別直接進(jìn)樣,進(jìn)行質(zhì)譜分析.結(jié)果發(fā)現(xiàn)在烏頭的乙醇提取液中,烏頭堿(AC,m/z646)、中烏頭堿(MA,m/z632)和次烏頭堿(HA,m/z616)三種主要毒性成分含量很高;而在水加熱處理后得到的水煎液中,三種毒性成分含量明顯降低,而苯甲酰烏頭原堿(BA,m/z604)、苯甲酰中烏頭原堿(BM,m/z590)和苯甲酰次烏頭原堿(BH,m/z574)的含量明顯升高(見(jiàn)圖5),炮制過(guò)程中發(fā)生的脂交換反應(yīng)是烏頭炮制的機(jī)理.在此基礎(chǔ)上,越皓等利用電噴霧質(zhì)譜方法(ESI-MS)分析了附子加輔料(甘草)炮制前后水煎液中二萜類生物堿在種類和含量方面的變化,發(fā)現(xiàn)附子與甘草共煎液中的次烏頭堿、中烏頭堿和烏頭堿的相對(duì)含量分別是單煎液中的5.67%、4.05%和4.88%因?yàn)樵谂谥七^(guò)程中甘草中的成分容易與附子中雙酯型生物堿及其熱解產(chǎn)物發(fā)生脂交換反應(yīng),生成毒性更小的脂類生物堿,同時(shí)有少量的雙酯型生物堿與甘草中的甘草酸等成分形成了難溶性的沉淀,上述反應(yīng)的結(jié)果是降低了附子中雙酯型生物堿的含量,從而達(dá)到炮制減毒的目的.這些研究表明,質(zhì)譜技術(shù)可以用于中藥成分的快速定性分析,在中藥炮制機(jī)理研究特別是炮制前后成分變化的快速鑒定方面有著廣闊的應(yīng)用前景.4.2在中藥分析過(guò)程中,對(duì)化學(xué)成分進(jìn)行了更多的分NMR技術(shù)是利用具有自旋性質(zhì)的原子核在外磁場(chǎng)作用下,吸收射頻輻射而產(chǎn)生能級(jí)躍遷的一門(mén)波譜學(xué)技術(shù),是鑒定化合物結(jié)構(gòu)的最重要方法之一.近年來(lái),NMR已經(jīng)被探索應(yīng)用于中藥的鑒別,也有研究用NMR進(jìn)行中藥成分的定量分析,但是由于儀器昂貴,這些方法的普及還比較困難.目前,在中藥炮制機(jī)理研究中,NMR的應(yīng)用仍局限于對(duì)炮制前后成分的結(jié)構(gòu)鑒定方面.如LiaoPY等采用化學(xué)分離法研究了人參加熱蒸制后的化學(xué)成分,采用1D-NMR和2D-NMR對(duì)這些化學(xué)成分進(jìn)行結(jié)構(gòu)鑒定發(fā)現(xiàn)分離得到的27個(gè)達(dá)瑪烷型三萜類化合物中,包括4個(gè)新的糖苷類成分,是蒸制過(guò)程中產(chǎn)生的,說(shuō)明人參蒸制過(guò)程中會(huì)產(chǎn)生新成分,這些成分與藥效的相關(guān)性研究對(duì)闡明人參的炮制機(jī)理有重要意義.隨著NMR技術(shù)的發(fā)展與進(jìn)步,可以大大加快化合物結(jié)構(gòu)鑒定的速度和準(zhǔn)確度,同時(shí)NMR技術(shù)也在不斷拓展在中藥研究中的應(yīng)用范圍,在中藥炮制機(jī)理研究中也將發(fā)揮更大的作用.5生物分析技術(shù)5.1凝膠電泳技術(shù)電泳技術(shù)在中藥領(lǐng)域的應(yīng)用主要是蛋白質(zhì)凝膠電泳,蛋白質(zhì)凝膠電泳技術(shù)經(jīng)過(guò)迅猛發(fā)展,已成為高分辨率和高靈敏度的現(xiàn)代分析技術(shù),廣泛用于中藥鑒別和質(zhì)量控制.凝膠電泳根據(jù)脂蛋白顆粒大小將其分離,脂蛋白通過(guò)濃度呈梯度增高的聚丙烯酰胺在電場(chǎng)中移動(dòng),當(dāng)達(dá)到分離極限時(shí),顆粒的移動(dòng)停止,此時(shí)的脂蛋白分布圖即凝膠電泳圖譜具有特異性,從而達(dá)到鑒別藥材的目的.中藥炮制前后發(fā)生變化的物質(zhì)多種多樣,大分子蛋白質(zhì)等物質(zhì)也可能會(huì)有變化,這就有必要采用電泳技術(shù)等新的分析手段,全面挖掘中藥炮制前后的變化.如張林碧等用聚丙烯酰胺凝膠電泳技術(shù)測(cè)定以不同的炮制方法制得的人參、僵蠶、雞內(nèi)金和虻蟲(chóng)的炮制品與原藥材的蛋白質(zhì)區(qū)帶圖譜,結(jié)果發(fā)現(xiàn)4種樣品炮制前后均有明顯的變化,其中蒸煮法和砂炒法對(duì)藥材蛋白質(zhì)的影響較烘焙法和麩炒法大,損失多,原因可能是溫度高、時(shí)間長(zhǎng)的炮制方法使蛋白質(zhì)損失得更多.5.2中藥制劑研究DNA分子標(biāo)記技術(shù)是在分子水平上通過(guò)檢測(cè)遺傳物質(zhì)的多態(tài)性來(lái)鑒定中藥,DNA分子標(biāo)記技術(shù)以特異性強(qiáng)、可靠性好、靈敏度高等特點(diǎn),在中藥材質(zhì)量評(píng)價(jià)中的應(yīng)用逐步擴(kuò)大,方法也日趨完善,在中藥炮制機(jī)理研究方面也已有了一些應(yīng)用.如許臘英等探討了蒼術(shù)炮制前后DNA指紋圖譜研究方法,采用隨機(jī)擴(kuò)增多態(tài)性(RAPD)技術(shù)對(duì)不同產(chǎn)地的茅蒼術(shù)炮制前后進(jìn)行DNA指紋圖譜研究.結(jié)果發(fā)現(xiàn),不同產(chǎn)地的茅蒼術(shù)生品DNA指紋圖譜一致,幾種麥麩炒蒼術(shù)的DNA指紋圖譜與生品有較大差異,主要包括條帶較少、缺乏較長(zhǎng)堿基對(duì)的擴(kuò)增條帶,說(shuō)明蒼術(shù)與麥麩加熱炮制后造成DNA不同程度降解,另外幾種炮制品之間也存在不同程度差異,說(shuō)明炮制對(duì)藥材DNA分子有較大影響.6色譜聯(lián)用技術(shù)色譜技術(shù)分離能力強(qiáng)、檢測(cè)靈敏度高,是中藥分析的首選技術(shù),但是,對(duì)于未知化合物定性方面難以給出可靠信息,而光譜和波譜技術(shù)具有很強(qiáng)的鑒定未知化合物結(jié)構(gòu)的能力,因此,將色譜與光譜或波譜聯(lián)合應(yīng)用,已逐漸成為中藥現(xiàn)代研究的強(qiáng)有力手段.近年來(lái),色譜聯(lián)用技術(shù)在中藥炮制研究中的應(yīng)用不斷發(fā)展和普及,目前應(yīng)用最廣泛的有GC-MS聯(lián)用、LC-MS聯(lián)用.一些更先進(jìn)的聯(lián)用技術(shù),如HPCE-MS聯(lián)用、LC-MS/MS聯(lián)用、HPLC-NMR-MS聯(lián)用等也應(yīng)探索應(yīng)用于中藥炮制機(jī)理研究中.6.1gc-ms分析及其應(yīng)用氣質(zhì)聯(lián)用技術(shù)是將氣相色譜與質(zhì)譜聯(lián)用,從而實(shí)現(xiàn)復(fù)雜成分的在線分離和鑒定,使快速鑒定中藥中的成分成為可能,主要用于分析中藥中的揮發(fā)性成分.中藥經(jīng)過(guò)炮制以后,其中的揮發(fā)性成分會(huì)有較大變化,有含量的變化,也有結(jié)構(gòu)的變化,這些變化可能與中藥炮制機(jī)理密切相關(guān),GC-MS的應(yīng)用為闡明這些變化提供了有力手段.如張帆等利用GC-MS研究了小茴香不同炮制品中的揮發(fā)性成分,結(jié)果表明小茴香經(jīng)不同輔料炮制后揮發(fā)油含量顯著降低.炮制前后反式-茴香腦含量均最高,生品中24種化合物經(jīng)不同方法炮制后含量均發(fā)生了變化.炮制過(guò)程中還發(fā)生了成分轉(zhuǎn)化,共新產(chǎn)生了18種化合物,這些變化是小茴香炮制后功效改變的基礎(chǔ),也是小茴香炮制機(jī)理之一.袁子民等對(duì)肉豆蔻煨制前后的揮發(fā)油進(jìn)行GC-MS分析,發(fā)現(xiàn)肉豆蔻與麥麩加熱煨制后揮發(fā)油成分發(fā)生了質(zhì)和量的變化,新產(chǎn)生了13個(gè)成分(見(jiàn)表2),4個(gè)成分消失,止瀉成分甲基丁香酚、甲基異丁香酚含量增加,毒性成分肉豆蔻醚、黃樟醚含量降低,說(shuō)明肉豆蔻采用水浸泡麩煨進(jìn)行炮制具有科學(xué)意義.6.2不同方法對(duì)中藥山基層黨組織的質(zhì)譜監(jiān)督液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)是將液相色譜與質(zhì)譜聯(lián)用,液相色譜具有高效分離能力,而質(zhì)譜具有高效鑒定能力,二者聯(lián)用可以實(shí)現(xiàn)中藥復(fù)雜成分的在線分離和鑒定.由于中藥中大量成分都適用于液相分析,因此液質(zhì)聯(lián)用的產(chǎn)生對(duì)中藥復(fù)雜成分的定性定量分析起巨大的推動(dòng)作用,在中藥炮制研究中,LC-MS技術(shù)也將成為闡明炮制前后的成分變化,進(jìn)而闡明中藥炮制機(jī)理的重要方法.如周莉莉等利用高效液相色譜-電噴霧多級(jí)串聯(lián)質(zhì)譜(HPLC-ESI-MSn)聯(lián)用技術(shù),對(duì)中藥山茱萸的炮制機(jī)理進(jìn)行了研究,通過(guò)電噴霧一級(jí)質(zhì)譜獲得了7個(gè)環(huán)烯醚萜苷類化合物的分子量信息利用質(zhì)譜的源內(nèi)碰撞誘導(dǎo)解離技術(shù),獲得了該類化合物在負(fù)離子模式下的碎裂特征,在此基礎(chǔ)上,對(duì)其進(jìn)行了結(jié)構(gòu)鑒定和含量分析,發(fā)現(xiàn)山茱萸炮制后,7種環(huán)烯醚萜苷類化合物的含量都有所增加.此外,何忠梅等利用LC-MS技術(shù)研究了芍藥炮制前后的變化研究發(fā)現(xiàn)芍藥經(jīng)黃酒加熱炮制以后酚酸類成分含量明顯下降,這些變化是芍藥炮制后功效改變的基礎(chǔ).7當(dāng)前問(wèn)題和對(duì)策7.1現(xiàn)代儀器分析技術(shù)的應(yīng)用光譜技術(shù)、色譜技術(shù)及多種波譜技術(shù)在中藥炮制機(jī)理研究中已經(jīng)有了較為廣泛的應(yīng)用,特別是HPLC和GC-MS在中藥炮制前后的成分分析方面.但是中藥炮制前后的成分變化是極其復(fù)雜的,炮制過(guò)程中發(fā)生的很多變化,采用現(xiàn)有的分析手段可能仍然無(wú)法全面解釋清楚.因此,不能一味套用前人的研究思路與方法手段,有必要應(yīng)用最新的儀器分析方法,有針對(duì)性地探索中藥炮制的機(jī)理.目前,我們?cè)谛碌膬x器分析技術(shù)的引入和應(yīng)用方面仍顯不足,比如凝膠電泳技術(shù)和質(zhì)譜技術(shù)能夠有針對(duì)性地分析炮制前后的一些變化,但在實(shí)際研究中仍然應(yīng)用較少.很多新近產(chǎn)生的現(xiàn)代儀器分析技術(shù)如高效液相色譜-核磁共振(HPLC-NMR)聯(lián)用技術(shù)、毛細(xì)管電泳-電噴霧-飛行時(shí)間質(zhì)譜(CE-ESI-TOF-MS)聯(lián)用技術(shù)、高效液相色譜-電噴霧-離子阱飛行時(shí)間質(zhì)譜(LC-ESI-IT-TOFMS)、全二維液相色譜技術(shù)(LC×LC)等在中藥炮制原理研究中尚無(wú)應(yīng)用,需要進(jìn)一步嘗試應(yīng)用.7.2中藥的結(jié)構(gòu)變化需要現(xiàn)代儀器分析技術(shù)的應(yīng)用.對(duì)于中藥中藥炮制過(guò)程中可能發(fā)生了復(fù)雜的變化,而闡明這種變化需要依靠多種現(xiàn)代儀器分析技術(shù).因此在中藥炮制機(jī)理研究中,以一種分析手段得到的結(jié)果作出結(jié)論不夠可靠,也是不夠科