菌落總數(shù)的測定方法操作規(guī)程

食品中菌落總數(shù)的測定方法操作規(guī)程一、適用范圍本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了食品中菌落總數(shù)（Aerobicplatecount）的測定方法。本標(biāo)準(zhǔn)適用于食品中菌落總數(shù)的測定，實驗采樣方案按照GB4789.1-2016。二、編寫依據(jù)GB4789.2-2016《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)食品微生物學(xué)檢驗菌落總數(shù)的測定》三、術(shù)語和定義菌落總數(shù)：食品檢樣經(jīng)過處理，在一定條件下（如培養(yǎng)基、培養(yǎng)溫度和培養(yǎng)時間等）培養(yǎng)后，所得每g（mL）檢樣中形成的微生物菌落總數(shù)。四、內(nèi)容1.設(shè)備和材料除微生物實驗室常規(guī)滅菌及培養(yǎng)設(shè)備外，其他設(shè)備和材料如下：1.1恒溫培養(yǎng)箱：36℃±1℃，30℃±1℃1.2冰箱：2℃～5℃1.3恒溫水浴箱：46℃±1℃1.4天平：感量為0.1g1.5均質(zhì)器1.6振蕩器1.7無菌吸管：1mL（具0.01mL刻度）、10mL（具0.1mL刻度）或微量移液器及吸頭1.8無菌錐形瓶：容量250mL、500mL1.9無菌培養(yǎng)皿：直徑90mm1.10pH計或pH比色管或精密pH試紙1.11放大鏡或/和菌落計數(shù)器2.培養(yǎng)基和試劑:

2.1平板計數(shù)瓊脂培養(yǎng)基：同GB4789.15項下制法。2.2磷酸鹽緩沖液：同GB4789.15項下制法。2.3無菌生理鹽水：同GB4789.15項下制法。2.430%碳酸鈉溶液。2.51mol/LHCl。3.樣品的稀釋3.1固體和半固體樣品：稱取25g樣品置盛有225mL磷酸鹽緩沖液或生理鹽水的無菌均質(zhì)杯內(nèi)，8000r/min～10000r/min均質(zhì)1min～2min，或放入盛有225mL稀釋液的無菌均質(zhì)袋中，用拍擊式均質(zhì)器拍打1min～2min，制成1:10的樣品勻液。3.2液體樣品：以無菌吸管吸取25mL樣品置盛有225mL磷酸鹽緩沖液或生理鹽水的無菌錐形瓶（瓶內(nèi)預(yù)置適當(dāng)數(shù)量的無菌玻璃珠）中，充分混勻，制成1:10的樣品勻液。3.3用1mL無菌吸管或微量移液器吸取1:10樣品勻液1mL，沿管壁緩慢注于盛有9mL稀釋液的無菌試管中（注意吸管或吸頭尖端不要觸及稀釋液面），振搖試管或換用1支無菌吸管反復(fù)吹打使其混合均勻，制成1:100的樣品勻液。3.4按4.3操作程序，制備10倍系列稀釋樣品勻液。每遞增稀釋一次，換用1次1mL無菌吸管或吸頭。3.5根據(jù)對樣品污染狀況的估計，選擇2個～3個適宜稀釋度的樣品勻液（液體樣品可包括原液），在進(jìn)行10倍遞增稀釋時，吸取1mL樣品勻液于無菌平皿內(nèi)，每個稀釋度做兩個平皿。同時，分別吸取1mL空白稀釋液加入兩個無菌平皿內(nèi)作空白對照。3.6及時將15mL～20mL冷卻至46℃的平板計數(shù)瓊脂培養(yǎng)基（可放置于46℃±1℃恒溫水浴箱中保溫）傾注平皿，并轉(zhuǎn)動平皿使其混合均勻。4.培養(yǎng)4.1待瓊脂凝固后，將平板翻轉(zhuǎn)，36℃±1℃培養(yǎng)48h±2h。水產(chǎn)品30℃±1℃培養(yǎng)72h±3h。4.2如果樣品中可能含有在瓊脂培養(yǎng)基表面彌漫生長的菌落時，可在凝固后的瓊脂表面覆蓋一薄層瓊脂培養(yǎng)基（約4mL），凝固后翻轉(zhuǎn)平板，按5.1條件進(jìn)行培養(yǎng)。5.菌落計數(shù)5.1選取菌落數(shù)在30CFU～300CFU之間、無蔓延菌落生長的平板計數(shù)菌落總數(shù)。低于30CFU的平板記錄具體菌落數(shù)，大于300CFU的可記錄為多不可計。每個稀釋度的菌落數(shù)應(yīng)采用兩個平板的平均數(shù)。5.2其中一個平板有較大片狀菌落生長時，則不宜采用，而應(yīng)以無片狀菌落生長的平板作為該稀釋度的菌落數(shù)；若片狀菌落不到平板的一半，而其余一半中菌落分布又很均勻，即可計算半個平板后乘以2，代表一個平板菌落數(shù)。5.3當(dāng)平板上出現(xiàn)菌落間無明顯界線的鏈狀生長時，則將每條單鏈作為一個菌落計數(shù)。6.結(jié)果與報告6.1若只有一個稀釋度平板上的菌落數(shù)在適宜計數(shù)范圍內(nèi)，計算兩個平板菌落數(shù)的平均值，再將平均值乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù)，作為每g（mL）樣品中菌落總數(shù)結(jié)果。6.2若有兩個連續(xù)稀釋度的平板菌落數(shù)在適宜計數(shù)范圍內(nèi)時，按公式（1）計算：N=∑C/(n1+0.1n2)d……………..（1）式中：N——樣品中菌落數(shù)；∑C——平板（含適宜范圍菌落數(shù)的平板）菌落數(shù)之和；n1——第一稀釋度（低稀釋倍數(shù)）平板個數(shù)；n2——第二稀釋度（高稀釋倍數(shù)）平板個數(shù)；6.3若所有稀釋度的平板上菌落數(shù)均大于300CFU，則對稀釋度最高的平板進(jìn)行計數(shù)，其他平板可記錄為多不可計，結(jié)果按平均菌落數(shù)乘以最高稀釋倍數(shù)計算。6.4若所有稀釋度的平板菌落數(shù)均小于30CFU，則應(yīng)按稀釋度最低的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)計算。6.5若所有稀釋度（包括液體樣品原液）平板均無菌落生長，則以小于1乘以最低稀釋倍數(shù)計算。6.6若所有稀釋度的平板菌落數(shù)均不在30CFU～300CFU之間，其中一部分小于30CFU或大于300CFU時，則以最接近30CFU或300CFU的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)計算。6.7菌落總數(shù)的報告（1）菌落數(shù)小于100CFU時，按“四舍五入”原則修約，以整數(shù)報告。（2）落數(shù)大于或等于100CFU時，第3位數(shù)字采用“四舍五入”原則修約后，取前2位數(shù)字，后面用0代替位數(shù)；也可用10的指數(shù)形式來表示，按“四舍五入”原則修約后，采用兩位有效數(shù)字。（3）若所有平板上為蔓延菌落而無法計數(shù)，則報告菌落蔓延。（4）若空白對照上有菌落生長，則此次檢測結(jié)果無效。（5）稱重取樣以CFU/g為單位報告，體積取樣以CFU/mL為單位報告。7.記錄信息應(yīng)嚴(yán)格按照“食品微生物菌落總數(shù)測定原始記錄”的要求進(jìn)行填寫，包括檢品編號、檢品名稱、批號、檢驗依據(jù)、判定依據(jù)、樣品性狀、抽樣來源、抽樣時間和試驗時間等，以及培養(yǎng)基的批