中國(guó)水仙FOMT2基因及啟動(dòng)子的克隆與分析

中國(guó)水仙FOMT2中國(guó)水仙是重要的觀賞花卉之一。本研究利用PCR和RACE技術(shù)，F(xiàn)OMT2基因和啟動(dòng)子。通過(guò)生物信息學(xué)分析，發(fā)FOMT2具有較高的保守性，啟動(dòng)子區(qū)域存在多個(gè)保守的轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合FOMT2基因在雌蕊和Narcissustazettavar.chinensisisanimportantornamentalflower.Inthisstudy,theFOMT2geneandpromoterofChinesenarcissusweresuccessfullyclonedusingPCRandRACEtechniques.Bybioinformaticsanalysis,itwasfoundthatFOMT2hadahighdegreeofconservation,andthepromoterregioncontainedmultipleconservedtranscriptionfactorbindingsites.FurtherexpressionanalysisshowedthatFOMT2washighlyexpressedinthepistilandpetalofChinesenarcissusflowers,whileitwaslowlyexpressedinthestamenandsepals.ThisstudyprovidesatheoreticalbasisforgenecloningandpromoteranalysisofChinesenarcissus,andprovidesreferenceforfurtherexplorationofthemechanismsofflowercolorandaromaformationinChinesenarcissus.Keywords:Chinesenarcissus;FOMT2gene;promoter;expressionanalysis;bioinformatics中國(guó)水仙（Narcissustazettavar.chinensis）是一種地被植物，屬FOMT2O-甲基轉(zhuǎn)移酶基因，可以催化酚類化合物的甲基了FOMT2基因作為研究對(duì)象，克隆其序列并分析其在中國(guó)水仙花中的表達(dá)模式。同時(shí)，通過(guò)克隆中國(guó)水仙FOMT2啟動(dòng)子序列，對(duì)其進(jìn)行生物信343天以內(nèi)的花朵。雄蕊、花RNA提取、cDNA從中國(guó)水仙雌蕊、花瓣、花萼等組織中提取總RNA，使用PrimeScriptRTReagentKitcDNAPCRFOMT2基因和啟動(dòng)子序列，PCR產(chǎn)品接入pGEM-TEasy載體進(jìn)行轉(zhuǎn)化，經(jīng)菌落PCR和酶切鑒定后，進(jìn)行測(cè)序。FOMT2BLAST軟件對(duì)比分析，找出其與其他物種的同源序列。生信分析工具Jaspar和PlantCARE軟件用FOMT2qRT-PCR分析中檢測(cè)中國(guó)水仙不同組織中FOMT2基因的表達(dá)水平。數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)并進(jìn)行t檢驗(yàn)，用SPSS19.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行分析。PCRRACEFOMT2（GenBank登記號(hào):MW192134)和啟動(dòng)子序列（GenBank登記號(hào):MW838359）（圖1）。![1FOMT2基因和啟動(dòng)子序列的長(zhǎng)度1FOMT2FOMT2基因與龍葵屬、金魚(yú)草屬等其他植物的FOMT2基因具有較高的保守性（圖2）。![2FOMT2基因物種間比對(duì)結(jié)果2FOMT2FOMT2啟動(dòng)子序列中存在多個(gè)保守的轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合位點(diǎn)（圖3），包括MYB、bHLH和MADS-box等。![圖3中國(guó)水仙FOMT2啟動(dòng)子序列的結(jié)構(gòu)和轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合位點(diǎn)預(yù)測(cè)3FOMT2PCR表明，F(xiàn)OMT2基因在中國(guó)水仙的雌蕊和花瓣中高表達(dá)，在雄蕊和花萼中低表達(dá)（圖4）。![4FOMT2基因在中國(guó)水仙不同組織中的表達(dá)水平4FOMT2FOMT2O-甲基轉(zhuǎn)移酶基