《保健食品中14種真菌毒素含量的高通量快速測定 超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法》（征求意見稿）編制說明

1.任務(wù)來源2022年10月，無限極（中國）有限公司向廣東省食品流通協(xié)會提出了制定廣東省食品流通協(xié)會團體標(biāo)準(zhǔn)《保健食品中14種真菌毒素含量的高通量快速測定超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法》的項目申請，協(xié)會組織評審專家小組，召開團體標(biāo)準(zhǔn)立項評審會議，評審小組成員對該項目進行論證并獲得通過。2022年12月7日在《全國團體標(biāo)準(zhǔn)信息平臺》完成了立項標(biāo)準(zhǔn)公示。廣東省食品流通協(xié)會標(biāo)準(zhǔn)化專業(yè)委員會下達了《保健食品中14種真菌毒素含量的高通量快速測定超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法》制訂任務(wù)，開始該標(biāo)準(zhǔn)的研究制定工作，在組織上擬定了相關(guān)的措施，確定了本標(biāo)準(zhǔn)的制訂思路。2.協(xié)作單位本標(biāo)準(zhǔn)起草單位為無限極（中國）有限公司、廣東省科學(xué)院生物與醫(yī)學(xué)工程研究所、必維科技服務(wù)（西安）有限公司等單位，由廣東省食品流通協(xié)會歸口。3.編制背景、必要性及意義“民以食為天、食以安為先”，食品安全是重大戰(zhàn)略民生問題。以中草藥為基礎(chǔ)的健康食品，包括口服液、片劑、膠囊、固體飲料、壓片糖果等，因風(fēng)味獨特、具有營養(yǎng)性或保健功能性等獨特優(yōu)勢而備受消費者青睞。然而，中藥材受真菌毒素污染嚴(yán)重，且中藥材中受到污染的真菌毒素種類較多，不僅限于黃曲霉毒素類，而且真菌毒素具有耐高溫特性，行業(yè)常見的現(xiàn)有生產(chǎn)工藝難以去除。目前，國家標(biāo)準(zhǔn)方法以及文獻報道的真菌毒素的檢測方法主要采用薄層色譜法（TLC）、等，樣品前處理主要采用固相萃取柱、多功能凈化柱、免疫親和柱以及QuEChERS方法等凈化技術(shù)。由于真菌毒素在實際樣品中通常含量較低，并且不同真菌毒素的結(jié)構(gòu)差異大、理化性質(zhì)差異大，導(dǎo)致多數(shù)分析方法只能檢測單個、單類或少數(shù)幾種真菌毒素，不能滿足批量樣品中多種真菌毒素同時高通量檢測的需求。而QuEChERS結(jié)合UPLC-MS/MS技術(shù)由于具有快速、簡便、廉價、準(zhǔn)確度高和靈敏度高等優(yōu)勢，能同時實現(xiàn)多種真菌毒素高效的定性定量分析，目前已成為各種食品以及中藥材中多種真菌毒素同時檢測的主要方法。這些已報道的QuEChERS結(jié)合UPLC-MS/MS多數(shù)是采用基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)曲線法或基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)曲線結(jié)合同位素內(nèi)標(biāo)法進行定量分析，并且不同的食品樣品所含的基質(zhì)成分差異大，因此這些方法的適用范圍僅限于研究中的食品種類，不能覆蓋其它食品類型。目前國內(nèi)外研究較少，且檢測項目單一，檢測方法靈敏度較低。故我們亟待開發(fā)出一個原理合理、范圍合適、操作較為簡單、干擾少、成本低、儀器上機時長較短的方法來填補保健食品不同劑型下14種真菌毒素的測定。超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法同時具備液相色譜高效的在線分離能力和質(zhì)譜的高選擇性、高靈敏度的檢測能力，可以同時得到化合物的保留時間、分子量以及特征結(jié)構(gòu)碎片等豐富的信息，其多反應(yīng)監(jiān)測(MRM)技術(shù)兼具有選擇離子掃描的靈敏度和二級質(zhì)譜的特征性，在痕量分析方面具有很大的優(yōu)勢。本標(biāo)準(zhǔn)建立了同時測定保健食品中14種真菌毒素的UPLC-MS/MS檢測方法，方法操作簡單，結(jié)果穩(wěn)定可靠，可為監(jiān)管部門提供技術(shù)支撐。本標(biāo)準(zhǔn)的制訂與實施，迎合了保健食品產(chǎn)品多樣化發(fā)展的趨勢，高通量精準(zhǔn)分析技術(shù)的建立，不僅可以有效提高分析效率，同時也有助于系統(tǒng)、全面地識別中草藥基健康產(chǎn)品中多種真菌毒素，最大可能降低檢測盲點，為行業(yè)提供技術(shù)支持。4.主要工作過程（1）前期基礎(chǔ)廣東省食品流通協(xié)會于2022年12月組織成立了標(biāo)準(zhǔn)起草小組，確定了工作進度時間表，并進行了分工。（2）標(biāo)準(zhǔn)編制組第一次工作會議2023年2月-3月，起草小組進行了技術(shù)論證和技術(shù)規(guī)范內(nèi)容探討，確定了制定計劃、制定的基本原則、標(biāo)準(zhǔn)框架、標(biāo)準(zhǔn)基本內(nèi)容。（3）標(biāo)準(zhǔn)編制組第二次工作會議2023年4月-6月，起草小組對《保健食品中14種真菌毒素含量的高通量快速測定超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法》的方法進行全面調(diào)研，收集國際和國內(nèi)生物產(chǎn)業(yè)領(lǐng)域的標(biāo)準(zhǔn)及相關(guān)技術(shù)資料，結(jié)合對生產(chǎn)企業(yè)及中藥材進行調(diào)研匯總。起草小組根據(jù)現(xiàn)實需求完成了標(biāo)準(zhǔn)初稿，并對相關(guān)企業(yè)及技術(shù)單位征求意見，對標(biāo)準(zhǔn)初稿意見進行有必要的修改。（4）編制組內(nèi)征求意見2023年7月-10月，比較與研究我國原國家標(biāo)準(zhǔn)及國際標(biāo)準(zhǔn)相關(guān)內(nèi)容，并結(jié)合方法的研究工作，制定出標(biāo)準(zhǔn)的討論稿，起草小組完成本方法的研究工作，根據(jù)相關(guān)參與單位修改意見，完成驗證報告。收集相關(guān)驗證樣品，將驗證樣品分別寄往驗證單位，進行標(biāo)準(zhǔn)方法的室間驗證工作，同時形成《標(biāo)準(zhǔn)》草案及《編制說明》的征求意見稿。1、編制原則（1）通用性充分考慮我國保健食品不同中草藥基產(chǎn)品類型（片劑、膠囊、口服液、固體飲料、即食谷物棒等）中14種真菌毒素的測定方法現(xiàn)狀和現(xiàn)實情況，明確其測定原理、測定方法步驟，適用于保健食品中14種真菌毒素的測定。（2）規(guī)范性本標(biāo)準(zhǔn)遵循GB/T1.1-2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第一部分：標(biāo)準(zhǔn)的結(jié)構(gòu)和編寫規(guī)則》和GB/T20001.4-2015《標(biāo)準(zhǔn)編寫規(guī)則第4部分：試驗方法標(biāo)準(zhǔn)》的要求進行編寫制訂，標(biāo)準(zhǔn)編寫內(nèi)容參考了與真菌毒素檢測標(biāo)準(zhǔn)相關(guān)的文獻，參照了GB/T6379.1-2004《測量方法與結(jié)果的準(zhǔn)確度(正確度與精密度)》第1部分總則與定義和GB/T6379.2-2004《測量方法與結(jié)果的準(zhǔn)確度》第2部分確定標(biāo)準(zhǔn)測量方法重復(fù)性與再現(xiàn)性的基本方法。（3）注意與國際接軌在制定本標(biāo)準(zhǔn)時，參考了現(xiàn)有的真菌毒素的分析方法等技術(shù)標(biāo)準(zhǔn)、指導(dǎo)原則，吸收了國內(nèi)外幾年來先進的分析手段、處理過程、反應(yīng)條件等，對方法中的前處理條件，參數(shù)調(diào)整、數(shù)據(jù)準(zhǔn)確性等進行優(yōu)化，體現(xiàn)了標(biāo)準(zhǔn)的技術(shù)性、科學(xué)性和先進性。（4）協(xié)調(diào)一致性與現(xiàn)行有效的相關(guān)真菌毒素含量測定的國家法律、法規(guī)、標(biāo)準(zhǔn)規(guī)范保持一致，對方法提要、分析步驟、結(jié)果計算和精密度等要求作出相應(yīng)的規(guī)定。2、標(biāo)準(zhǔn)主要內(nèi)容本標(biāo)準(zhǔn)內(nèi)容主要11個部分：范圍、規(guī)范性引用文件、術(shù)語和定義、原理、試劑和材料、儀器和設(shè)備、試樣的制備、測定步驟、結(jié)果計算和表述、靈敏度、準(zhǔn)確度和精密度、資料性附錄。本標(biāo)準(zhǔn)實驗研究分析和驗證結(jié)果見實驗技術(shù)報告。本標(biāo)準(zhǔn)不涉及相關(guān)專利。五、預(yù)期達到的社會效益、對產(chǎn)業(yè)發(fā)展的作中藥材受真菌毒素污染嚴(yán)重，且中藥材中受到污染的真菌毒素種類較多，不僅限于黃曲霉毒素類，而且真菌毒素具有耐高溫特性，行業(yè)常見的現(xiàn)有生產(chǎn)工藝難以去除。但目前常見的檢測方法前處理方法繁瑣，且一般毒素方法都采用針對性的免疫親和柱、專一性強，只針對某一種真菌毒素進行，存在分析效率低和分析成本高的問題,而且單一真菌毒素分析可能存在檢測盲點。另外，中草藥基來源的健康食品成分復(fù)雜、基質(zhì)不同，現(xiàn)有真菌毒素檢測方法也具有一定的不適宜性；因此開展中草藥等復(fù)雜基質(zhì)下各類劑型中多種真菌毒素高通量精準(zhǔn)分析技術(shù)研究勢在必行。本標(biāo)準(zhǔn)與目前食品、保健食品行業(yè)科技、生產(chǎn)、工藝及管理水平的適應(yīng)性強，標(biāo)準(zhǔn)化程度高，便于該類保健食品企業(yè)所引用，保健食品原輔料及其他植物性食品可參照執(zhí)行。同時，該方法的確定可以有效的監(jiān)控保健食品市場中14種真菌毒素的含量水平，也可作為中小企業(yè)生產(chǎn)中質(zhì)量控制，有效提高為保健食品市場上14種真菌毒素分析效率，同時也有助于系統(tǒng)、全面地識別中草藥基健康產(chǎn)品中多種真菌毒素，最大可能降低檢測盲點，為行業(yè)提供技術(shù)支持。六、采用國際標(biāo)準(zhǔn)和國外先進標(biāo)準(zhǔn)的程度，以及與國際、國外同類標(biāo)準(zhǔn)水平的對比情況，或與測試的國外樣品、樣機的有關(guān)數(shù)據(jù)對比情況目前，國際與國內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)方法以及文獻報道的真菌毒素的檢測方法主要采用薄層色譜法（TLC）、酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）、高校液相色譜法（HPLC）和超高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法（UPLC-MS/MS）等，樣品前處理主要采用固相萃取柱、多功能凈化柱、免疫親和柱以及QuEChERS方法等凈化技術(shù)。由于真菌毒素在實際樣品中通常含量較低，并且不同真菌毒素的結(jié)構(gòu)差異大、理化性質(zhì)差異大，導(dǎo)致多數(shù)分析方法只能檢測單個、單類或少數(shù)幾種真菌毒素，不能滿足批量樣品中多種真菌毒素同時高通量檢測的需求。七、在標(biāo)準(zhǔn)體系中的位置，與現(xiàn)行相