實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)方案

Word版本，下載可自由編輯實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)方案一.試驗(yàn)?zāi)康?/p>

1、學(xué)習(xí)從土壤中分別、純化微生物的原理與方法。

2、學(xué)習(xí)、掌控微生物的鑒定方法。

3、對(duì)提取的土樣進(jìn)行微生物的`分別、純化培育，并進(jìn)行簡(jiǎn)潔的形態(tài)鑒定

二.試驗(yàn)原理

α-淀粉酶是一種液化型淀粉酶，它的產(chǎn)生菌芽孢桿菌，廣泛分布于自然界，尤其是在含有淀粉類物質(zhì)的土壤等樣品中。

從自然界篩選菌種的詳細(xì)做法，大致能夠分成以下四個(gè)步驟：采樣、增殖培育、純種分別和性能測(cè)定。

1、采樣：即采集含菌的樣品

采集含菌樣品前應(yīng)調(diào)查研發(fā)一下自己準(zhǔn)備篩選的微生物在哪些地方分布最多，然后才可著手做各項(xiàng)詳細(xì)工作。在土壤中幾乎各種微生物都能夠找到，因而土壤可說(shuō)是微生物的大本營(yíng)。在土壤中，數(shù)量最多的當(dāng)推細(xì)菌，其次是放線菌，第三霉菌，酵母菌最少。除土壤以外，其他各類物體上都有相應(yīng)的占優(yōu)勢(shì)生長(zhǎng)的微生物。例如枯枝、爛葉、腐土和朽木中纖維素分解菌較多，廚房土壤、面粉加工廠和菜園土壤中淀粉的分解菌較多，果實(shí)、蜜餞表面酵母菌較多;蔬菜牛奶中乳酸菌較多，油田、煉油廠附近的土壤中石油分解菌較多等。

2、增殖培育(又稱豐富培育)

增殖培育就是在所采集的土壤等含菌樣品中加入某些物質(zhì)，并制造一些有利于待分別微生物生長(zhǎng)的其他條件，使能分解利用這類物質(zhì)的微生物大量繁殖，從而便于我們從其中分別到這類微生物。因此，增殖培育事實(shí)上是選擇性培育基的一種實(shí)際應(yīng)用。

3、純種分別

在生產(chǎn)實(shí)踐中，一般都應(yīng)用純種微生物進(jìn)行生產(chǎn)。利用上述的增殖培育只能說(shuō)我們要分別的微生物從數(shù)量上的劣勢(shì)轉(zhuǎn)變?yōu)閮?yōu)勢(shì)，從而提升了篩選的效率，但是要獲得純種微生物就必需進(jìn)行純種分別。純種分別的方法很多，主要有：平板劃線分別法、稀釋分別法、單孢子或單細(xì)胞分別法、菌絲尖端切割法等。

三.試驗(yàn)材料

1、器材：

小鐵鏟和無(wú)菌紙或袋(可省)、培育皿8個(gè)、載玻片、蓋玻片、一般光學(xué)顯微鏡、量筒、滴管、吸水紙、無(wú)菌水試管5支(每支4.5mL水)、燒杯3個(gè)、三角瓶5個(gè)、電爐、玻璃棒、接種環(huán)、鑷子、恒溫培育箱、高溫滅菌鍋、移液槍(槍頭10個(gè))、天平、濾紙、pH試紙等。

2、試劑：

配制牛肉膏蛋白胨培育基的原料(牛肉膏0.9g、NaCl1.5g、瓊脂4.5g、蛋白胨3.0g)、Lugol氏碘液、可溶性淀粉0.6g、結(jié)晶紫染液、番紅染液、95%乙醇、無(wú)菌水等。

3、土樣：取自桂林師專甲山校區(qū)藥用植物園面的土壤，地下10cm左右。

四.試驗(yàn)方法步驟

1、采集土樣帶上小鐵鏟和無(wú)菌袋到土豆地采集較細(xì)碎土壤

2、樣品稀釋在無(wú)菌紙上稱取樣品1g，放入100mL無(wú)菌水的三角瓶中，手搖10分鐘使土和水充分混合。用1mL無(wú)菌吸管吸取0.5mL注入4.5mL無(wú)菌水試管中，梯度稀釋至10-6。

3、分別用稀釋樣品的同支吸管分別依次從10-6、10-5、10-4樣品稀釋液中，吸取lmL，注入無(wú)菌培育皿中，然后倒入滅菌并溶化冷至50℃左右的固體培育基，當(dāng)心搖動(dòng)冷凝后，倒置于37℃溫箱中培育48小時(shí)。培育基的配制—稱取蛋白胨1.0g;NaCl0.5g;牛肉膏0.3g;瓊脂1.5g;pH6.4左右;100ml水定容。

4、初步鑒定對(duì)多種菌進(jìn)行形態(tài)特征的觀看，簡(jiǎn)潔染色、革蘭氏染色以及芽孢染色觀看，記錄結(jié)果。

5、α-淀粉酶鑒定

1)試驗(yàn)原理：

細(xì)菌能否產(chǎn)生α-淀粉酶主要依據(jù)是鑒定有能否分解淀粉。α-淀粉酶該酶能夠把淀粉分解，因淀粉遇碘變藍(lán)色，如菌落四圍有無(wú)色圈，說(shuō)明該菌能分解淀粉

2)步驟：

將培育的的各種待測(cè)菌種接種在含有2%淀粉液的牛肉膏蛋白胨培育基中，培育基的配制—稱取蛋白胨1.0g;NaCl0.5g;牛肉膏0.3g;可溶性淀粉0.2g;瓊脂1.5g;pH6.4左右;100ml水定容(注：先將可溶性淀粉加少量蒸餾水調(diào)成糊狀，再加到溶化好的培育基中，調(diào)勻)，倒置于37℃溫箱中培育18-24小時(shí)后，取出平板，向皿中注入l滴Lugol氏碘液，因淀粉遇碘變藍(lán)色，如菌落四圍有無(wú)色圈，說(shuō)明該菌能分解淀粉。

6、純化從平板上選取淀粉水解圈直徑與