真胃左方變位對(duì)奶牛瘤胃內(nèi)胃胃泌素的影響

真胃左方變位對(duì)奶牛瘤胃內(nèi)胃胃泌素的影響

真胃變位是一種常見(jiàn)的牛疾病。據(jù)統(tǒng)計(jì),成年奶牛的年發(fā)病率為1.6%～2.3%,絕大多數(shù)病例未能確診或確診后未及時(shí)治療而被淘汰,給養(yǎng)牛生產(chǎn)造成很大的經(jīng)濟(jì)損失。其發(fā)病機(jī)制的研究多為臨床病例的分析與調(diào)查,缺少試驗(yàn)性資料。奶牛與山羊同為反芻動(dòng)物,在采食性、生理生化指標(biāo)、解剖特點(diǎn)等方面雖有差異,但具有一定的相似性,而且山羊體形小、價(jià)格低,便于試驗(yàn)管理和操作。本研究以手術(shù)致山羊真胃左方變位制作奶牛真胃變位動(dòng)物模型,定期采集試驗(yàn)羊瘤胃液、血液,測(cè)定瘤胃內(nèi)容物揮發(fā)性脂肪酸(VFAs)含量及其組成比例,檢測(cè)血清胃泌素含量的動(dòng)態(tài)變化,為深入探討該病的發(fā)病機(jī)理和早期診斷方法提供理論依據(jù)。1材料和方法1.1兩組患者左方腹底部變位組及對(duì)照組的檢測(cè)利用9只健康奶山羊進(jìn)行真胃移位手術(shù),試驗(yàn)羊隨機(jī)分為3組,分別為真胃左方髖關(guān)節(jié)處變位組(A組)、左方腹底部變位組(B組)和對(duì)照組(C組)。A組通過(guò)手術(shù)將真胃繞過(guò)瘤胃底部牽至瘤胃左側(cè)髖關(guān)節(jié)水平線處并進(jìn)行固定。B組通過(guò)手術(shù)將真胃牽至左側(cè)腹底壁并進(jìn)行固定。C組不改變真胃位置,只作腹壁切開(kāi)與真胃原位固定術(shù)。3組動(dòng)物分別行瘤胃插管,以進(jìn)行胃內(nèi)容物取樣。1.2瓶?jī)?nèi)溶液通過(guò)瘤胃插管定期采集瘤胃液,采后立即用4層紗布過(guò)濾。樣品裝于塑料瓶?jī)?nèi),-20℃冰箱保存,待測(cè)。同時(shí)試驗(yàn)羊頸靜脈采血10mL,37℃恒溫箱內(nèi)靜置5min,血液凝固后4000r·min-1離心10min,取上層血清,-20℃冰箱保存,待測(cè)。1.3樣品測(cè)定1偏磷酸+連續(xù)酸離心法取瘤胃液5mL,15000r·min-1離心15min。取上清液1mL,加入200mL·L-1(含60mmol·L-1土豆酸)偏磷酸0.2mL,12000r·min-1勻速離心15min。取上清液0.4μL,采用日本島津GC-9A氣相色譜儀測(cè)定。色譜條件:毛細(xì)管柱CP-WAX(長(zhǎng)30m、內(nèi)徑0.53mm、膜厚1μm);氣化室溫度200℃;FID監(jiān)測(cè)器溫度200℃;柱溫采用程序升溫法,初溫100℃,末溫150℃,升溫速率3℃·min-1,靈敏度為101,衰減為25,進(jìn)樣量0.4μL。2in放射免疫試劑測(cè)定前將待測(cè)血清移出冰箱,室溫放置15min,按照Gastrin放射免疫試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作。加樣后室溫放置15min,低溫離心(4℃,3500r·min-1,15min)。吸棄上清液,采用SN-695A型放免γ測(cè)量?jī)x測(cè)定各管沉淀的放射性計(jì)數(shù)。1.4數(shù)據(jù)計(jì)數(shù)方法用SPSS10.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)的統(tǒng)計(jì)處理。2結(jié)果與分析2.1兩組患者瘤胃vfas含量的比較由圖1可見(jiàn),山羊真胃變位后,對(duì)照組瘤胃VFAs含量表現(xiàn)平穩(wěn),變位手術(shù)后最初3d瘤胃VFAs含量與對(duì)照組相比呈下降趨勢(shì),在手術(shù)穩(wěn)定期(術(shù)后4～8d)仍低于對(duì)照組。其中,對(duì)A組的影響最大,B組次之,兩組差異極顯著(P<0.01)。真胃變位后8～12d,對(duì)照組瘤胃VFAs含量表現(xiàn)平穩(wěn),真胃變位組瘤胃VFAs含量均呈上升趨勢(shì),最后高于對(duì)照組;A組VFAs含量低于B組,差異極顯著(P<0.01)。真胃變位13d后,瘤胃VFAs含量均呈下降趨勢(shì)?？v觀真胃變位后瘤胃VFAs含量的動(dòng)態(tài)變化,特別是A組,VFAs含量呈現(xiàn)復(fù)雜的變化,波動(dòng)較大,但均低于對(duì)照組。2.2酸/丙酸比率由圖2可見(jiàn),真胃變位手術(shù)6d后,瘤胃液乙酸/丙酸比率升高,而且A組大于B組,差異極顯著(P<0.01)。真胃變位12d后,乙酸含量呈降低趨勢(shì),但乙酸/丙酸比率未出現(xiàn)下降。2.3血清胃泌素含量由圖3可見(jiàn),山羊真胃左方變位后,血清胃泌素含量隨病程的延長(zhǎng)而逐漸增加,于手術(shù)后第7天增加得更為顯著(P<0.01)。血清胃泌素含量增幅與真胃變位的程度有關(guān),即A組高于B組,后者又高于對(duì)照組。對(duì)照組也出現(xiàn)了血清胃泌素含量的增高。3真胃變位對(duì)瘤胃炎的影響VFAs在反芻動(dòng)物體內(nèi)的基本作用是提供能源,其含量是反映瘤胃內(nèi)消化代謝活動(dòng)的重要指標(biāo)。反芻動(dòng)物體內(nèi)代謝所需葡萄糖主要來(lái)源于肝組織的糖異生,而丙酸是糖異生的主要前體物質(zhì)。真胃變位初期,山羊瘤胃VFAs含量呈下降趨勢(shì),是發(fā)酵物質(zhì)減少引起的,與手術(shù)應(yīng)激反應(yīng)致羊采食量下降有關(guān)。真胃變位后8～12d,瘤胃VFAs含量呈上升趨勢(shì),這可能是試驗(yàn)羊采食量開(kāi)始恢復(fù)的結(jié)果,而A組瘤胃VFAs含量小于B組,與A組采食量較少有關(guān)。Gregory和朱祖康分別證實(shí)瘤胃灌注VFAs可明顯抑制瘤胃運(yùn)動(dòng)。因此,當(dāng)瘤胃VFAs升高和真胃排空不暢時(shí),真胃變位將使瘤胃運(yùn)動(dòng)遲緩。真胃變位13d后,瘤胃VFAs含量呈下降趨勢(shì),說(shuō)明隨著真胃變位病程的延長(zhǎng),瘤胃內(nèi)食物逐漸減少,微生物發(fā)酵異常,病情逐漸加重。瘤胃VFAs組成比例是評(píng)價(jià)瘤胃發(fā)酵方式和發(fā)酵能力的直接指標(biāo)。盧德勛認(rèn)為,乙酸/丙酸比率降低,會(huì)影響纖維物質(zhì)在瘤胃中的發(fā)酵與降解。真胃變位手術(shù)6d后,變位組出現(xiàn)乙酸產(chǎn)量增加,丙酸相對(duì)減少,乙酸/丙酸比率升高,A組高于B組。這表明真胃變位使瘤胃內(nèi)生成VFAs的微生物類群的數(shù)量或者代謝能力降低,隨真胃變位程度的加強(qiáng)而病情加重。真胃變位12d后,變位組乙酸含量呈下降趨勢(shì),而乙酸/丙酸比率未表現(xiàn)出下降,但對(duì)照組乙酸/丙酸比率下降,變位組則相對(duì)升高,仍表現(xiàn)出瘤胃異常發(fā)酵的現(xiàn)象。李勝利等研究表明VFAs對(duì)胰島素的分泌有影響,即丙酸量增加,胰島素分泌也隨之增加,從而減少脂肪代謝紊亂的發(fā)生率。熊本海等研究認(rèn)為,當(dāng)瘤胃液中乙酸濃度偏高時(shí),即乙酸/丙酸比率升高時(shí),會(huì)降低動(dòng)物沉積氮的能力。真胃變位組瘤胃VFAs含量降低,表明機(jī)體將加強(qiáng)脂肪組織代謝活動(dòng),減少氮的沉積,導(dǎo)致動(dòng)物生產(chǎn)能力的下降。胃泌素是胃竇部近十二指腸近端黏膜的G細(xì)胞分泌的一種多肽激素,相對(duì)分子質(zhì)量為2100,含有17個(gè)氨基酸,由前胃泌素原降解而成,它可直接刺激壁細(xì)胞產(chǎn)生胃酸和刺激嗜鉻樣細(xì)胞產(chǎn)生組胺,然后通過(guò)組胺刺激壁細(xì)胞產(chǎn)生胃酸,并有促進(jìn)胃竇收縮及營(yíng)養(yǎng)胃腸黏膜等生理功能。胃泌素缺失的小鼠,壁細(xì)胞數(shù)量減少,缺乏質(zhì)子泵的未成熟細(xì)胞增多,胃酸分泌功能喪失,當(dāng)用胃泌素處理時(shí),胃酸分泌增加。胃泌素分泌受多種因素的影響,如幽門(mén)竇和上段小腸的pH值、食物引起的化學(xué)性刺激和物理性刺激、迷走神經(jīng)及胃腸黏膜神經(jīng)介導(dǎo)的神經(jīng)性刺激等。胃泌素還可通過(guò)其受體介導(dǎo)細(xì)胞內(nèi)一系列信號(hào)傳導(dǎo),促進(jìn)細(xì)胞分裂和DNA合成,對(duì)胃腸疾患的發(fā)展有促進(jìn)作用。低氧環(huán)境下胃腸道的迷走神經(jīng)常處于興奮狀態(tài),迷走神經(jīng)的興奮除了直接作用于胃竇的G細(xì)胞釋放胃泌素外,還強(qiáng)烈抑制胃腸道的運(yùn)動(dòng)功能,造成胃排空障礙及胃內(nèi)壓力增高,致使胃竇幽門(mén)部胃壁受到機(jī)械性擴(kuò)張。這種張力通過(guò)局部神經(jīng)反射,興奮G細(xì)胞基底膜外的迷走神經(jīng)末梢釋放乙酰膽堿增多,導(dǎo)致胃泌素分泌,使血中胃泌素濃度升高。低氧和缺血常使胃黏膜屏障功能下降,通透性增加,促進(jìn)了H+的反向彌散。由于血流緩慢和H+堆積在胃黏膜,造成胃黏膜損傷。Mcleay等指出,反芻動(dòng)物前胃pH值升高可以提高流入真胃及十二指腸食糜的酸度,從而影響胃泌素的釋放。王星所等研究認(rèn)為,瘤胃內(nèi)容物中的VFAs流入真胃后,可以提高真胃內(nèi)容物pH值,并刺激真胃竇部,引起血清胃泌素釋放增加。本試驗(yàn)山羊血清胃泌素升高,與瘤胃VFAs升高或乙酸/丙酸比率升高及變位致胃張力升高有關(guān)。當(dāng)發(fā)生真胃變位時(shí),由于真胃積液、積氣,胃壁處于緊張狀態(tài),使真胃處于低氧、缺血環(huán)境,出現(xiàn)迷走神經(jīng)緊張性增加,促進(jìn)胃泌素的釋放。另外,由于真胃變位后胃黏膜發(fā)生了一定的炎癥反應(yīng),此時(shí)炎性細(xì)胞因子(如IL-1、IL-8、TNF、IFN等)釋放,它們可以進(jìn)一步激活、