第一章 蛋白質(zhì)化學

蛋白質(zhì)化學第一章第一節(jié)蛋白質(zhì)的分子組成和分類第二節(jié)蛋白質(zhì)的分子結(jié)構第三節(jié)蛋白質(zhì)結(jié)構與功能的關系第四節(jié)蛋白質(zhì)的理化性質(zhì)及其分離純化是由氨基酸按一定的序列通過酰胺鍵（肽鍵）縮合而成的，具有復雜結(jié)構和特定功能的一類重要的生物大分子。蛋白質(zhì)（protein）蛋白質(zhì)存在于所有生物細胞中，是構成生物體最基本的結(jié)構物質(zhì)和功能物質(zhì)。蛋白質(zhì)是生命活動的物質(zhì)基礎，參與了幾乎所有的生命活動過程。1、蛋白質(zhì)是生物體重要組成成分

分布廣：所有器官和組織都含有蛋白質(zhì)，細胞的各個部分都含有蛋白質(zhì)。

含量高：蛋白質(zhì)是細胞內(nèi)最豐富的有機分子，占人體干重的45%，某些組織含量更高，例如：脾肺等高達80%。2、蛋白質(zhì)的重要生物學功能

作為生物催化劑代謝調(diào)節(jié)作用物質(zhì)的轉(zhuǎn)運和存儲免疫保護運動與支持作用參與細胞間的信息傳遞其他生物學功能：營養(yǎng)蛋白、結(jié)構、毒蛋白第一節(jié)蛋白質(zhì)的分子組成和分類一、氨基酸二、肽三、蛋白質(zhì)的分類大多數(shù)蛋白質(zhì)含氮量接近于16%蛋白質(zhì)含量=每克樣品中含氮的克數(shù)

6.25蛋白質(zhì)的元素組成存在于自然界的氨基酸有300余種，但組成人體蛋白質(zhì)的氨基酸僅有20種，大部分屬于L-

-氨基酸。其中，脯氨酸屬于L-

-亞氨基酸，而甘氨酸則屬于D--氨基酸。一、蛋白質(zhì)結(jié)構單位-氨基酸人體必需的8種氨基酸氨基酸名稱縮寫符號（三字）蘇氨酸Thr賴氨酸Lsy纈氨酸Val亮氨酸Leu異亮氨酸Ile苯丙氨酸Phe蛋氨酸（甲硫氨酸）Met色氨酸Trp

蘇纈亮異亮苯色屬芳香缺少賴與蛋人類就遭殃人體必需8種氨基酸的速記口訣L-

-氨基酸的結(jié)構通式COOHNH2C

HRHCOO-+NH3C

R不帶電形式兩性離子形式（一）氨基酸的結(jié)構通式COOHNH2C

HRCOO-+NH3C

HH甘氨酸COO-+NH2CH

CH2H2CH2C亞氨基酸-脯基酸-氨基酸的立體異構體非極性疏水性氨基酸極性中性氨基酸酸性氨基酸堿性氨基酸（二）氨基酸的分類：非極性疏水性氨基酸2.極性中性氨基酸

3.酸性氨基酸（含兩個以上氨基）——His，Arg，Lys；側(cè)鏈基團在中性溶液中解離后帶正電荷的氨基酸。4.堿性氨基酸（含兩個羧基）——Glu，Asp；側(cè)鏈基團在中性溶液中解離后帶負電荷的氨基酸。物理性質(zhì)兩性解離及等電點紫外吸收顯色反應（三）氨基酸的理化性質(zhì)：1．物理性質(zhì)

-氨基酸無色晶體，熔點高，味隨氨基酸種類不同而不同，能溶于水稀酸稀堿，不溶于有機溶劑+H++OH-pH>pI陰離子+OH-pH=pI兼性離子+H+pH<pI陽離子2．兩性解離及等電點等電點（isoelectricpoint,pI）在某一pH環(huán)境中，氨基酸解離成陽性離子及陰性離子的趨勢相等，所帶靜電荷為零，在電場中不游動，此時氨基酸所處環(huán)境的pH值稱為該種氨基酸的等電點（pI）。帶電狀態(tài)判定pI-pH<0……………….帶負電pI-pH>0……………….帶正電pI-pH=0……………….不帶電等電點的確定除可用酸堿滴定法測定外，還可用pK值計算。①側(cè)鏈為非極性基團或雖為極性基團但不解離的AA：pI=1/2（pK1+pK2）②酸性AA（谷、天冬）半胱:pI=1/2（pK1+pKR）③堿性AA（賴、精、組）：pI=1/2（pK2+pKR）天然蛋白質(zhì)分子的20種氨基酸，以色氨酸和酪氨酸對紫外光有較強的吸收。其吸收峰在280nm左右，以色氨酸吸收最強?？衫么诵再|(zhì)用紫外分光光度法測蛋白質(zhì)的含量。3．紫外吸收性質(zhì)：氨基酸可與茚三酮縮合產(chǎn)生藍紫色化合物，其最大吸收峰在570nm，吸收峰值與氨基酸含量成正比，可定量分析。例外：脯氨酸黃色，天門冬酰胺棕色4．顯色反應：茚三酮反應：2，4-二硝基氟苯(DNFB)反應：氨基酸的α-氨基很容易DNFB作用，生成黃色的2，4-二硝基苯氨基酸（DNP-氨基酸），當DNP-多肽或DNP-蛋白質(zhì)，經(jīng)酸水解，只有DNP基仍連在N端氨基酸上，生成DNP-氨基酸，經(jīng)過醚提和紙層析，可鑒定N端氨基酸的種類和數(shù)目。異硫氰酸苯酯（PITC）反應：弱堿條件下，氨基酸的α-氨基很容易與PITC作用，生成PTC-氨基酸，在水酸中PTC-氨基酸即環(huán)化為PTH，PTH在酸中穩(wěn)定。蛋白質(zhì)的N端氨基酸的α-氨基可與PITC反應，生成PTC-蛋白質(zhì)，在酸性溶液中它就釋放出末端PTH-氨基酸和少一個氨基酸的多肽鏈，所得的PTH-氨基酸經(jīng)過乙酸乙酯提取和紙層析，可鑒定氨基酸的種類。*肽鍵(peptidebond)：是由一個氨基酸的

-羧基與另一個氨基酸的

-氨基脫水縮合而形成的化學鍵。二、肽(peptide)CHCHOH2NHO+CHCHOHHNHO-HOH甘氨酸甘氨酸甘氨酰酸甘氨酸肽鍵CHCHO2NHCHCHOHHNO兩氨基酸單位之間的酰胺鍵，稱為肽鍵。多肽鏈多肽鏈中的氨基酸單位稱為氨基酸殘基。多肽鏈具有方向性，頭端為氨基端（N端），尾端為羧基端（C端）。

多肽鏈NC多肽鏈的形成及其方向性蛋白質(zhì)與多肽的區(qū)別：氨基酸殘基數(shù)目穩(wěn)定的空間結(jié)構＞50——蛋白質(zhì)＜50——多肽不穩(wěn)定的空間結(jié)構——多肽穩(wěn)定的空間結(jié)構——蛋白質(zhì)生物活性肽生物體內(nèi)具有一定生物學活性的肽類物質(zhì)稱生物活性肽。重要的生物活性肽有谷胱甘肽、神經(jīng)肽、肽類激素等。

谷胱甘肽是一種稱為

-谷氨酰半胱氨酰甘氨酸的三肽化合物。1．谷胱甘肽（glutathione,GSH）：還原型與氧化型谷胱甘肽的相互轉(zhuǎn)變Glu-Cys-Gly|S|S|Glu-Cys-Gly-2H+2H谷胱甘肽分子中的巰基可氧化或還原，故有還原型（GSH）與氧化型（GSSG）兩種存在形式。2×Glu-Cys-Gly|

SH解毒作用參與氧化還原反應保護巰基酶的活性維持紅細胞膜結(jié)構的穩(wěn)定谷胱甘肽的生理功用種類較多，生理功能各異。多肽類激素主要見于下丘腦及垂體分泌的激素，如催產(chǎn)素（9肽）、加壓素（9肽）、促腎上腺皮質(zhì)激素（39肽）、促甲狀腺素釋放激素（3肽）。神經(jīng)肽主要與神經(jīng)信號轉(zhuǎn)導作用相關，包括腦啡肽（5肽）、

-內(nèi)啡肽（31肽）、強啡肽（17肽）等。2．多肽類激素及神經(jīng)肽*根據(jù)蛋白質(zhì)組成成分

簡單蛋白質(zhì):單純蛋白，僅由氨基酸組成結(jié)合蛋白質(zhì)=蛋白質(zhì)部分+非蛋白質(zhì)部分*根據(jù)蛋白質(zhì)形狀

纖維狀蛋白質(zhì)球狀蛋白質(zhì)膜蛋白質(zhì)三、蛋白質(zhì)的分類簡

單

蛋

白清蛋白和球蛋白albuminandglobulin廣泛存在于動物組織谷蛋白和醇溶谷蛋白glutelinandprolamin植物蛋白，不溶于水，易溶于稀酸/堿精蛋白和組蛋白堿性蛋白存在于細胞核硬蛋白

結(jié)

合

蛋

白色蛋白：簡單蛋白+色素物質(zhì)糖蛋白：簡單蛋白+糖類物質(zhì)脂蛋白：簡單蛋白+脂類結(jié)合核蛋白：簡單蛋白+核酸磷蛋白：簡單蛋白+磷酸第二節(jié)蛋白質(zhì)的分子結(jié)構一、蛋白質(zhì)的一級結(jié)構

二、蛋白質(zhì)的空間結(jié)構

（一）蛋白質(zhì)分子中的非共價鍵

（二）蛋白質(zhì)的二級結(jié)構

（三）蛋白質(zhì)的三級結(jié)構

（四）蛋白質(zhì)的四級結(jié)構蛋白質(zhì)構象和結(jié)構的組織層次蛋白質(zhì)的結(jié)構層次一級結(jié)構二級結(jié)構超二級結(jié)構結(jié)構域三級結(jié)構四級結(jié)構高級結(jié)構空間構象定義：蛋白質(zhì)的一級結(jié)構指多肽鏈中氨基酸的排列順序。主要化學鍵：肽鍵

二硫鍵的位置屬于一級結(jié)構研究范疇。一、蛋白質(zhì)的一級結(jié)構牛胰島素的一級結(jié)構一級結(jié)構測定的原則定義：測定蛋白質(zhì)中氨基酸的組成蛋白質(zhì)的N端和C端的測定用兩種或兩種以上不同水解方法將所要測定的蛋白質(zhì)肽鏈斷裂分離提純所產(chǎn)生的肽，并測定它們的序列從重疊結(jié)構的各個肽的序列中推斷出蛋白質(zhì)中全部的氨基酸排列順序。例：某蛋白質(zhì)肽鏈的一個片段十肽，用兩種方法進行水解肽順序A1AlaPheB1AlaPheGlyLysA2

GlyLysAsnTyrB2

AsnTyrArgA3

ArgTyrB3

TyrHisValA4

HisVal十肽順序AlaPheGlyLysAsnTyrArgTyrHisVal除一級結(jié)構外，蛋白質(zhì)的二、三、四級結(jié)構都屬于空間結(jié)構，即構象（conformation）。構象是指蛋白質(zhì)分子中所有原子在三維空間的排列分布和肽鏈的走向。蛋白質(zhì)的構象通常由非共價鍵（次級鍵）來維系。二、蛋白質(zhì)的空間結(jié)構(一)蛋白質(zhì)分子中的非共價鍵氫鍵（hydrogenbond）的形成常見于連接在一電負性很強的原子上的氫原子，與另一電負性很強的原子之間，如>C=O┅┅H-N<。1.氫鍵：蛋白質(zhì)分子中氫鍵的形成H在蛋白質(zhì)分子中，由于存在數(shù)目眾多的氫鍵，故氫鍵在穩(wěn)定蛋白質(zhì)的空間結(jié)構上起著重要的作用。但氫鍵的鍵能較低(~12kJ/mol)，易被破壞。

非極性物質(zhì)在含水的極性環(huán)境中存在時，會產(chǎn)生一種相互聚集的力，這種力稱為疏水鍵或疏水作用力2.疏水鍵：蛋白質(zhì)分子中的許多氨基酸殘基側(cè)鏈也是非極性的，這些非極性的基團在水中也可相互聚集，形成疏水鍵，如Leu，Ile，Val，Phe，Ala等的側(cè)鏈基團。離子鍵，又稱為鹽鍵（saltbond）是由帶正電荷基團與帶負電荷基團之間相互吸引而形成的化學鍵。在近中性環(huán)境中，蛋白質(zhì)分子中的酸性氨基酸殘基側(cè)鏈電離后帶負電荷，而堿性氨基酸殘基側(cè)鏈電離后帶正電荷，二者之間可形成離子鍵。

3.離子鍵：蛋白質(zhì)分子中離子鍵的形成原子之間存在的相互作用力。4．范德華氏引力維系蛋白質(zhì)分子構象的非共價鍵蛋白質(zhì)分子中某一段肽鏈的局部空間結(jié)構，即該段肽鏈主鏈骨架原子的相對空間位置，并不涉及氨基酸殘基側(cè)鏈的構象。定義：穩(wěn)定因素：

氫鍵

（二）蛋白質(zhì)的二級結(jié)構1.肽平面(peptideunit)

參與組成肽鍵的6個原子位于同一平面，又叫酰胺平面或肽鍵平面。它是蛋白質(zhì)構象的基本結(jié)構單位。HHHH

-螺旋(

-helix)

-折疊(

-pleatedsheet)

-轉(zhuǎn)角(

-turn)

無規(guī)卷曲(randomcoil)

2.蛋白質(zhì)二級結(jié)構的主要形式

-螺旋-天然蛋白質(zhì)結(jié)構要點:

①多肽鏈主鏈圍繞中心軸形成右手螺旋，側(cè)鏈伸向螺旋外側(cè)，鍵內(nèi)形成氫鍵。②每圈螺旋含3.6個氨基酸，螺距為0.54nm。③每個肽鍵的亞氨氫和第四個肽鍵的羰基氧形成的氫鍵保持螺旋穩(wěn)定。氫鍵與螺旋長軸基本平行。非典型的

-螺旋

表示形式：ns螺旋上升一圈的氨基酸殘基數(shù)氫鍵間的原子數(shù)典型表示形式：3.613非典型：3.010、4.410⑴極大的側(cè)鏈基團（存在空間位阻）；⑵連續(xù)存在的側(cè)鏈帶有相同電荷的氨基酸殘基（同種電荷的互斥效應）；⑶有Pro等亞氨基酸存在（不能形成氫鍵）。影響

-螺旋穩(wěn)定的因素

-折疊①多肽鏈充分伸展，相鄰肽單元之間折疊成鋸齒狀結(jié)構，側(cè)鏈位于鋸齒結(jié)構的上下方。②兩段以上的β-折疊結(jié)構平行排列，兩鏈間可順向平行，也可反向平行。③兩鏈間的肽鍵之間形成氫鍵，以穩(wěn)固β-折疊結(jié)構。氫鍵與螺旋長軸垂直。

-折疊的平行式與反平行式排列平行式反平行式

-折疊

-轉(zhuǎn)角①肽鏈內(nèi)形成180o回折。②含4個氨基酸殘基，第一個氨基酸殘基的羥基與第四氨基酸殘基的氫個形成氫鍵。③第二個氨基酸殘基常為Pro。

-轉(zhuǎn)角：無規(guī)卷曲是指多肽鏈主鏈部分形成的沒有一定規(guī)律的松散結(jié)構。對于特定的蛋白質(zhì)分子而言，其無規(guī)卷曲部分的構象則是特異的。無規(guī)卷曲核糖核酸酶分子中的二級結(jié)構α-螺旋β-折疊β-轉(zhuǎn)角無規(guī)卷曲蛋白質(zhì)的超二級結(jié)構和結(jié)構域超二級結(jié)構：指若干相鄰二級結(jié)構中的構象單元彼此相互作用，形成的有規(guī)則的，在空間上能辨認的二級結(jié)構組合體。超二級結(jié)構幾種超二級結(jié)構βαββ×βαα連接鏈結(jié)構域：多肽鏈在超二級結(jié)構基礎上進一步的彎折折疊成一些在功能上相對獨立的，結(jié)構較為緊湊的近似球狀的結(jié)構。結(jié)構域（domain）（三）蛋白質(zhì)的三級結(jié)構多肽鏈首先在某些區(qū)域形成二級結(jié)構，然后相鄰的二級結(jié)構集成超二級結(jié)構，進而折疊繞曲成結(jié)構域，有兩個或兩個以上的結(jié)構域組裝成三級結(jié)構。蛋白質(zhì)的三級結(jié)構(tertiarystructure)：是指多肽鏈上的所有原子（包括主鏈和殘基側(cè)鏈）在三維空間的分布。胰島素分子的三級結(jié)構溶菌酶分子的三級結(jié)構磷酸丙糖異構酶和丙酮酸激酶的三級結(jié)構纖連蛋白(fibronectin)分子的結(jié)構域（四）蛋白質(zhì)的四級結(jié)構蛋白質(zhì)的四級結(jié)構（quaternarystructure）就是指蛋白質(zhì)分子中亞基的立體排布，亞基間的相互作用與接觸部位的布局。就是指參與構成蛋白質(zhì)四級結(jié)構的、每條具有三級結(jié)構的多肽鏈。亞基（subunit）亞基的立體排布方式血紅蛋白(hemoglobin)的四級結(jié)構蛋白質(zhì)分子的結(jié)構層次第三節(jié)蛋白質(zhì)結(jié)構與功能的關系一、蛋白質(zhì)一級結(jié)構與功能的關系

二、蛋白質(zhì)空間結(jié)構與功能的關系

蛋白質(zhì)一級結(jié)構是空間結(jié)構和生物功能的基礎。一級結(jié)構決定空間結(jié)構，一級結(jié)構并非決定空間結(jié)構的唯一因素?？臻g結(jié)構是生物活性的直觀體現(xiàn)。一、蛋白質(zhì)一級結(jié)構與功能的關系

1、決定空間結(jié)構2、同源蛋白質(zhì)的物種差異與生物進化3、一級結(jié)構上的細微變化可直接影響其功能牛核糖核酸酶的一級結(jié)構二硫鍵1、蛋白質(zhì)一級結(jié)構—決定空間結(jié)構天然狀態(tài)，有催化活性尿素、β-巰基乙醇去除尿素、β-巰基乙醇非折疊狀態(tài)，無活性核糖核酸酶結(jié)論：核糖核酸酶肽鏈上的一維信息控制肽鏈自身折疊所形成的特定構象，并由此確定了Cys殘基兩兩相互接近的正確位置，也就是說一級結(jié)構決定其高級結(jié)構。2、同源蛋白質(zhì)的物種差異與生物進化同源蛋白質(zhì)：在不同物種中具有同種或相似功能的蛋白質(zhì)。序列同源（性）：同源蛋白質(zhì)的氨基酸序列具有明顯的相似性。不變殘基：同源蛋白質(zhì)的氨基酸序列，有些位置的氨基酸殘基對所有物種來說都是相同的，這些氨基酸殘基被稱為不變殘基?？勺儦埢浩渌恢玫陌被釟埢诓煌锓N間差異很大，這些氨基酸殘基被稱為可變殘基。細胞色素C脊椎動物的細胞色素C黃色：不變殘基（28）結(jié)論：同源蛋白質(zhì)序列的氨基酸差異數(shù)目與物種間的系統(tǒng)發(fā)生差異是成比例的，親緣關系越近，其氨基酸序列之間的差別越小。3、一級結(jié)構上的細微變化可直接影響其功能胰島素分子病

B鏈Phe24Leu活性降低膀胱癌P21蛋白Gly12Val分子病：由于遺傳基因的突變導致了蛋白質(zhì)分子一級結(jié)構的氨基酸排列順序與正常有所不同的遺傳病。例：鐮刀形紅細胞貧血病

PaulingHbA和HbS的等電點血紅蛋白HbA的等電點HbS的等電點差值氧合Hb6.877.090.22脫氧Hb6.686.910.23HbSβ肽鏈N-Val·His·Leu·Thr·Pro·Glu·Glu·····C(146)HbAβ肽鏈N-Val·His·Leu·Thr·Pro·Val

·Glu·····C(146)1954Ingran指紋圖譜分析α鏈完全相同α鏈完全相同二、蛋白質(zhì)空間結(jié)構與功能的關系

1、肌紅蛋白與血紅蛋白的結(jié)構2、氧結(jié)合引起血紅蛋白構象的變化3、蛋白質(zhì)構象變化對功能的影響1、肌紅蛋白與血紅蛋白的結(jié)構

血紅蛋白是四聚體，每個亞基含一個血紅素輔基。血紅素中的二價鐵原子能與氧可逆結(jié)合，并保持鐵的價數(shù)不變。

Hb與Mb均能可逆地與O2結(jié)合，Hb與O2結(jié)合后稱為氧合Hb。氧合Hb占總Hb的百分數(shù)（稱百分飽和度）隨O2濃度變化而改變。2、血紅蛋白的構象變化與結(jié)合氧肌紅蛋白(Mb)和血紅蛋白(Hb)的氧解離曲線*協(xié)同效應(cooperativity)一個寡聚體蛋白質(zhì)的一個亞基與其配體結(jié)合后，能影響此寡聚體中另一個亞基與配體結(jié)合能力的現(xiàn)象，稱為協(xié)同效應。促進作用稱為正協(xié)同效應(positivecooperativity)抑制作用稱為負協(xié)同效應(negativecooperativity)變構效應(allostericeffect)凡蛋白質(zhì)（或亞基）因與某小分子物質(zhì)相互作用而發(fā)生構象變化，導致蛋白質(zhì)（或亞基）功能的變化，稱為蛋白質(zhì)的變構效應。3、蛋白質(zhì)構象改變與疾病蛋白質(zhì)構象病：若蛋白質(zhì)的折疊發(fā)生錯誤，盡管其一級結(jié)構不變，但蛋白質(zhì)的構象發(fā)生改變，仍可影響其功能，嚴重時可導致疾病發(fā)生。蛋白質(zhì)構象病的機理：有些蛋白質(zhì)錯誤折疊后相互聚集，常形成抗蛋白水解酶的淀粉樣纖維沉淀，產(chǎn)生毒性而致病，表現(xiàn)為蛋白質(zhì)淀粉樣纖維沉淀的病理改變。這類疾病包括：人紋狀體脊髓變性病、老年癡呆癥、亨停頓舞蹈病、瘋牛病等。瘋牛病瘋牛病是由朊病毒蛋白(prionprotein,PrP)引起的一組人和動物神經(jīng)退行性病變。正常的PrP富含α-螺旋，稱為PrPc。PrPc在某種未知蛋白質(zhì)的作用下可轉(zhuǎn)變成全為β-折疊的PrPsc，從而致病。PrPcα-螺旋PrPscβ-折疊正常瘋牛病第四節(jié)蛋白質(zhì)的理化性質(zhì)

及其分離純化一、蛋白質(zhì)的相對分子質(zhì)量

二、蛋白質(zhì)的兩性解離與等電點

三、蛋白質(zhì)的膠體性質(zhì)

四、蛋白質(zhì)的沉淀

五、蛋白質(zhì)的變性

六、蛋白質(zhì)的顏色反應

七、蛋白質(zhì)分離純化

八、多肽鏈中氨基酸序列分析一、蛋白質(zhì)的相對分子質(zhì)量蛋白質(zhì)的分子量一般在一萬至一百萬道爾頓之間1道爾頓＝1×C12絕對質(zhì)量/12≈1.66×10-27千克（一）根據(jù)化學組成測定最小分子量測定蛋白質(zhì)中某一微量元素的含量例：假設蛋白質(zhì)中僅含一個鐵原子最低相對分子質(zhì)量=100×55.8/鐵的百分含量（二）滲透壓法測定相對分子質(zhì)量

在理想溶液中，滲透壓是濃度的線性函數(shù)，而與溶質(zhì)的形狀無關。所以可用滲透壓計算蛋白質(zhì)的分子量。當?shù)鞍踪|(zhì)濃度不大時，可用下式計算：M=RT/lim(Π/C)

利用物質(zhì)密度的不同，經(jīng)超速離心后，分布于不同的液層而分離。蛋白質(zhì)的分子量與其沉降系數(shù)S成正比。沉降系數(shù)：單位離心場里的沉降速度，用S表示。一個S單位=1×10-13

S8×10-13

S的沉降系數(shù)用8S表示。（三）離心法測定相對分子質(zhì)量（四）SDS－聚丙烯酰胺凝膠電泳測定相對分子質(zhì)量原理：蛋白質(zhì)電泳時的遷移率與其所帶凈電荷、分子大小和形狀有關，加入SDS后，每克蛋白可結(jié)合1.4克SDS，將原有電荷掩蓋，而且使分子變成棒狀。由于凝膠的分子篩效應，相對遷移率μR與分子量有如下關系：lgM=K1－K2μR十二烷基磺酸鈉SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳十二烷基磺酸鈉原態(tài)蛋白質(zhì)變性？磺酸基極性親水烷基親油（蛋白質(zhì)疏水區(qū)）遷移率與電荷和形狀無關，僅取決于相對分子質(zhì)量巰基乙醇破壞二硫鍵（五）凝膠過濾法測定相對分子質(zhì)量原理：層析柱中填充凝膠顆粒，凝膠的網(wǎng)格大小可通過交聯(lián)劑含量控制。小分子物質(zhì)可進入網(wǎng)格中，流出慢；大分子被排阻在顆粒外，流經(jīng)距離短，流出快。計算公式：lgM＝K1－K2Ve

其中：Ve-是洗脫體積，即從加樣到出峰時流出的體積，K1和K2是常數(shù)，隨實驗條件而定。蛋白質(zhì)混合樣凝膠法只適于球狀蛋白分子測量二、蛋白質(zhì)的兩性解離與等電點由于蛋白質(zhì)分子中氨基酸殘基的側(cè)鏈上存在游離的氨基和游離的羧基，因此蛋白質(zhì)與氨基酸一樣具有兩性解離的性質(zhì)，因而也具有特定的等電點（pI）。當溶液pH＝pI時，蛋白質(zhì)正負電荷相等；當溶液pH＞pI時，蛋白質(zhì)帶凈負電荷；當溶液pH＜pI時，蛋白質(zhì)帶凈正電荷。電泳技術帶電膠體顆粒在電場中可以向電荷相反方向，由于蛋白質(zhì)在溶液中可以解離成帶電的粒子，因此在電場中可以移動，這種大分子化合物在電場中移動的現(xiàn)象稱為電泳（electrophoresis）

。蛋白質(zhì)顆粒電泳時遷移率影響因素：所帶電荷分子量分子形狀幾種重要的蛋白質(zhì)電泳*SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳*等電聚焦電泳*免疫電泳凝膠電泳紙電泳自由界面電泳區(qū)帶電泳平板電泳圓盤電泳紙電泳操作SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳三、蛋白質(zhì)的膠體性質(zhì)蛋白質(zhì)分子的顆粒直徑已達1~100nm，處于膠體顆粒的范圍。因此，蛋白質(zhì)具有親水溶膠的性質(zhì)。蛋白質(zhì)溶液具有膠體的特征：丁達爾效應、布朗運動以及不能通過半透膜等性質(zhì)蛋白質(zhì)膠體溶液的穩(wěn)定因素：1.同種蛋白帶同種電荷，相互排斥2.水膜彈性蛋白質(zhì)顆粒的表面電荷和水化膜+++++++帶正電荷的蛋白質(zhì)－－－－－－－－帶負電荷的蛋白質(zhì)在等電點的蛋白質(zhì)++++++++帶正電荷的蛋白質(zhì)－－－－－－－－帶負電荷的蛋白質(zhì)不穩(wěn)定的蛋白質(zhì)顆粒酸堿酸堿脫水作用脫水作用脫水作用；透析*透析(dialysis)：利用蛋白質(zhì)不能透過半透膜的性質(zhì)，可用羊皮紙、火膠棉、玻璃紙等來分離