判斷血清質(zhì)量的4種技巧

判斷血清質(zhì)量的4種技巧第一種：接種率測試進行接種率測試可以優(yōu)化出一個最合適的血清使用濃度。可以把新到批次的血清按不同的濃度比例配制成血清細胞培養(yǎng)基，例如5%、10%、15%和20%濃度的血清細胞培養(yǎng)基。然后以10-100個細胞/mL的濃度進行接種，并分別使用上述不同血清濃度的血清細胞培養(yǎng)基進行培養(yǎng)2周，觀察細胞的不同濃度下的細胞存活率以及細胞集落的面積變化，從而得出一個最合適的血清濃度。例如，10%和15%的結(jié)果都可以接受的話，則應使用10%進行培養(yǎng)，一方面可以節(jié)省血清使用，其次也可以降低血清存在時對細胞生長產(chǎn)生的其他不可控影響因素。第二種：生長曲線從生長曲線可以判斷不同批次間的血清對細胞生長的影響。以正常培養(yǎng)的濃度進行細胞接種，并觀察記錄細胞達到不同的密度所需要用到的時間。例如，如果細胞使用這一批次的血清時，其生長停滯期的時間較長，說明細胞需要對這個批次的血清進行較長時間的適應后才能正常生長；如果細胞進入指數(shù)增長期后，倍增速度快，也就是長得很快，說明這批次的血清對細胞的生長促進效果很明顯；如果細胞進入平臺期后，其密度比以往的血清批次要更高，說明該批次的血清的經(jīng)濟效率更高，反之亦然?？梢灾苯佑肕TT繪制細胞的生長曲線，也可以用可連續(xù)觀察的細胞計數(shù)儀或觀測系統(tǒng)。第三種：細胞特征觀察細胞特征觀察用于判斷該血清是否會存在一些影響因子，對細胞的基因表達產(chǎn)生影響。這個實驗對藥物篩選、需要細胞定向分化或分泌物進行的項目非常有必要。觀察細胞特征，除了要對細胞的形態(tài)特征進行判斷，還需要從分子和蛋白水平去檢測對比。例如在正常培養(yǎng)階段，提取細胞RNA進行待研究的基因的表達分析，看看血清是否會對該基因的表達產(chǎn)生上調(diào)或抑制，如果有，那說明該血清的存在可能會影響你的課題實驗的結(jié)果準確性。第四種：血清污染物的檢測通常商業(yè)化的血清出廠前都會進行嚴格的微生物清除，但仍有極少數(shù)可能有部分的血清會存在支原體的污染，或在實驗室進行血清分裝時帶入了微生物的污染。因此，我建議，有條件的同學在使用血清前，應該先取一點血清或已配制完成的血清細胞培養(yǎng)基進行空白培養(yǎng)，觀察其是否存在細菌、真菌等微生物的污染，確認沒有問題后再進行正式的細胞培養(yǎng)。而支原體污染的風險，則只能通過PCR、熒光染色等進一步的實驗方法進行檢測了。這里還需要特別強調(diào)的一點是，有的同學會通過看血清的顏色是否紅、橙紅來判斷血清質(zhì)量，這是玄學，沒有科學依據(jù)。血清的顏色如果較紅，代表其在采集過程中，動物出現(xiàn)了一定程度的溶血，這和采集工藝有關(guān)，和血清本身質(zhì)量無關(guān)。另外，血清解凍后，有時會看到有一些絮狀物，這種絮狀物也不一定是微生物污染，有可能是血清內(nèi)的蛋白質(zhì)凝集而成的。它的存在可能對細胞產(chǎn)生刺