國內(nèi)藥用淫羊藿化學(xué)成分研究進(jìn)展

國內(nèi)藥用淫羊藿化學(xué)成分研究進(jìn)展

綿羊：又名“神靈脾”和“剛前”，是膜射手科的一種類似植物。它被記錄在《神農(nóng)本草經(jīng)》中，并列為經(jīng)典。它對腎臟陽、肌肉和骨骼也有很好的治療效果。它在中國有著悠久的醫(yī)療歷史。中國是淫羊藿的地理分布中心,有40個淫羊藿品種,目前形成藥材商品的主要種類有15種,這其中又以7種淫羊藿應(yīng)用最廣,為箭葉淫羊藿E.sagittatum(Sieb.etZucc.)Maxim.、淫羊藿E.brevicornumMaxim.、粗毛淫羊藿E.acuminatumFranch.、朝鮮淫羊藿E.koreanumNakai、柔毛淫羊藿E.pubescensMaxim.、黔嶺淫羊藿E.leptorrhizumStearn、巫山淫羊藿E.wushanenseT.S.Ying。在《中國藥典》2010年版中收錄了箭葉淫羊藿、朝鮮淫羊藿、柔毛淫羊藿、淫羊藿共4個品種。貴州省是我國淫羊藿品種最多、產(chǎn)藏量最大的地區(qū)之一,其分布的淫羊藿屬植物有17種2變種,其中,粗毛淫羊藿、黔嶺淫羊藿、巫山淫羊藿等分布廣且產(chǎn)藏量豐富,在《貴州中藥材、民族藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)》2003年版中收錄了粗毛淫羊藿、黔嶺淫羊藿、天平山淫羊藿E.myrianthumStearn等5個品種藥用。淫羊藿亦是苗族習(xí)用藥材之一,在《苗族醫(yī)藥學(xué)》、《中國苗族藥物彩色圖集》等苗藥著作中均有收載,苗藥名有“銳雞都”(貴州松桃)、“加俄西”(貴州黔東南)、“彎歐”(黔南)、“毛公堵”(貴州畢節(jié))。自1935年至今,國內(nèi)外學(xué)者已對淫羊藿展開了較為全面的化學(xué)成分研究,分離得到以黃酮為主,包括木脂素類、酚苷類、生物堿類、色酮類等上百種化學(xué)成分,臨床上常用來治療骨質(zhì)疏松、股骨頭壞死、性功能障礙等疾病。為了進(jìn)一步對淫羊藿藥用價值進(jìn)行研究、開發(fā)和利用,本文以7種藥用淫羊藿為主要對象,對淫羊藿的化學(xué)成分、分子鑒定技術(shù)和指紋圖譜技術(shù)在其質(zhì)量控制中的應(yīng)用進(jìn)展進(jìn)行綜述。1物理分化1.1異戊烯基取代化合物淫羊藿總黃酮有促進(jìn)免疫調(diào)節(jié)、抗骨質(zhì)疏松、抗心肌缺氧、改善心臟血液流變性、促進(jìn)雄性生殖系統(tǒng)和生殖內(nèi)分泌功能、抗炎、抗腫瘤、抗衰老等作用,是淫羊藿中的主要成分,根據(jù)是否具有異戊烯基取代可將其分為2類,最具特征性的異戊烯基取代成分為8-異戊烯基取代黃酮醇及其糖苷,淫羊藿苷為其代表性成分,具有降低動脈粥樣硬化患者血栓形成幾率及調(diào)血脂、促進(jìn)雌性激素體內(nèi)生物合成、保護(hù)受損神經(jīng)元及恢復(fù)記憶力等藥理活性。淫羊藿素能夠抑制腫瘤細(xì)胞分化;淫羊藿苷、淫羊藿素、朝藿定A~C都可顯示出一定的雌激素活性。此外,孫朋悅等從朝鮮淫羊藿中分離得到銀杏雙黃酮、異銀杏雙黃酮、白果素3個雙黃酮類化合物;王明權(quán)等從心葉淫羊藿中分離得到2種酮類化合物:1,3,5,8-四羥基酮和1-羥基-3,4,5-三甲氧基酮;Li等從巫山淫羊藿中分離得到甘草查耳酮A和甘草查耳酮B2種查耳酮類化合物。淫羊藿中所含黃酮成分及其結(jié)構(gòu)見圖1、2和表1。1.2脂素類化合物研究顯示,淫羊藿中的木脂素類成分對大鼠骨肉瘤細(xì)胞UMR106的增殖及堿性磷酸酶具有一定的促進(jìn)作用。近年來,不斷有木脂素類成分從淫羊藿屬植物中被發(fā)現(xiàn),Hiroyuri等從箭葉淫羊藿中分離得到4種木脂素icarisideE6、icarisideE7、icariolA1、icariolA2。Wang等首次從箭葉淫羊藿中分離鑒定得到6種黃酮木脂素類化合物hydnocarpin、5″-methoxyhydnocarpin、hydnocarpinD、5′-methoxyhydnocarpin-D、5′,5″-dimethoxyhydnocarpin-D及l(fā)ignan(+)-dihydro-dehydrodiconiferylalcohol-4-O-β-D-glucopyranoside。楊云等從心葉淫羊藿中分離得到(7R,8S,8′R)-4,4′,8′,9-四羥基-3,3′-二甲氧基-7,9′-單環(huán)氧木脂素和(7R,8S)-4,9-二羥基-3,3′-二甲氧基-7,8-二氫苯并呋喃-1′-丙醇基新木脂素-9′-O-α-L-鼠李糖苷。江芳等從朝鮮淫羊藿中分離出柏木苷C、柏木苷A、(+)-南燭木樹脂酚、(+)-異落葉松樹脂醇。心葉淫羊藿和朝鮮淫羊藿中均含有(+)-環(huán)橄欖樹脂素。Li等從朝鮮淫羊藿中分離得到(+)-cycloolivilformaldehydecondensate、(-)-olivilmonoacetate、(-)-(7R,8S)-dihydrodehydro-diconiferylalcohol。1.3淫羊wt--1和3.淫羊藿多糖安全可靠,現(xiàn)代研究表明其具有刺激細(xì)胞免疫應(yīng)答、激活胸腺免疫功能的作用,是重要的免疫刺激劑,并通過增強(qiáng)機(jī)體免疫功能延緩機(jī)體衰老。此外,淫羊藿多糖還具有一定的抗病毒、促進(jìn)個體激素分泌、促進(jìn)核酸和蛋白質(zhì)代謝及血小板凝聚作用。李德耀從淫羊藿多糖部位分離純化得到10個組分,相對分子質(zhì)量為122~656679,質(zhì)量分?jǐn)?shù)最高的組分達(dá)到97.97%,相對分子質(zhì)量70374,由α-半乳糖醛酸組成。饒金華等通過柱前衍生化高效液相色譜法分析1個淫羊藿多糖的組成為甘露糖、鼠李糖、半乳糖醛酸、葡萄糖、半乳糖、阿拉伯糖(摩爾比0.60∶0.74∶1.00∶0.29∶2.29∶1.43)。安曉娟等從淫羊藿中分離得到2個雜多糖成分,1個由鼠李糖、葡萄糖構(gòu)成,1個由果糖、葡萄糖,以及1個不確定糖。1.4淫羊wt-堿類測定目前在淫羊藿中共分離得到3種生物堿。1957年,日本學(xué)者首次從淫羊藿屬植物中分離得到木蘭花堿,后續(xù)研究表明國內(nèi)淫羊藿中也含有木蘭花堿,在淫羊藿主要藥用品種中,以朝鮮淫羊藿中木蘭花堿的量最高,粗毛淫羊藿和天平山淫羊藿次之,量一般高于0.07%。劉春明等從朝鮮淫羊藿中分離得到淫羊藿堿A;Zhang等從朝鮮淫羊藿中分離得到生物堿epimediphine,并證實該生物堿具有較強(qiáng)的乙酰膽堿酯酶抑制作用。1.5y-2-penusspheno-1-o--d-glucopyranosicab的性質(zhì)淫羊藿中含有icariphenol、毛柳苷、4-hydroxy-2-prenylpheno-1-O-β-D-glucopyranoside。程巖等從朝鮮淫羊藿中分離得到icarisideA5;從黔嶺淫羊藿中分離得到thalictoside。1.6柔毛淫羊肽類、炔類王丹紅等采用傳統(tǒng)的水蒸氣蒸餾法從巫山淫羊藿中提取到36種揮發(fā)油成分,主要為羧酸類、酮類、醇類、炔類。施啟紅等從柔毛淫羊藿和朝鮮淫羊藿中分別得到66和38個揮發(fā)油成分,其中,二者共有成分為28個,以長鏈脂肪酸、不飽和醇及烴類居多?；厝鹑A等用超臨界流體萃取法從箭葉淫羊藿中提取得到43個揮發(fā)油成分。陸釗等采用加速溶劑萃取法從朝鮮淫羊藿中提取鑒定出揮發(fā)油成分共91種。1.7纖維素的平均量淫羊藿中無機(jī)元素的量豐富,羅莉等從四川產(chǎn)8種淫羊藿中均可測得16種無機(jī)元素,以Ca、K、Mg等6種元素的平均量最高;炮制會引起淫羊藿中無機(jī)元素量的變化,如羊脂炙法炮制朝鮮淫羊藿后可增強(qiáng)微量元素的溶出量,其中與腎功能有密切關(guān)系的Ca、Mn、Fe、Mg、Zn等微量元素的量明顯增加。也有研究顯示,多種炮制手段均會使巫山淫羊藿中Fe的量有所降低,因此,炮制對淫羊藿中無機(jī)元素的量到底有何影響還有待進(jìn)一步的研究。1.8菲類化合物的合成淫羊藿中還含有色原酮、菲、蒽醌、鞣質(zhì)、倍半萜、甾醇等成分。從箭葉淫羊藿中分離得到6-去氧甲基茵陳色原酮、6-去氧甲基-7-甲基茵陳色原酮、6-去氧甲基-4′-甲基-8-異戊烯基茵陳色原酮、6-去氧甲基-7-異戊烯基茵陳色原酮、綠原酸、香豆酸、大黃素、1,5-二羥基-3-甲氧基-7-甲基蒽醌。從朝鮮淫羊藿中分離得到菲類成分epimedoicarisosideA(icarisideA1)、淫羊藿苷A7,倍半萜類化合物淫羊藿次苷F、淫羊藿次苷C1,麥芽酚;淫羊藿中還含有胡蘿卜苷、β-谷甾醇、肌醇、6,22-二羥基何柏烷等化學(xué)成分。2質(zhì)量控制2.1非年齡和代次性研究淫羊藿的顯微鑒定專屬性較強(qiáng),一般集中在對葉表面特征、花粉、腺毛、非腺毛等方面鑒別特點的研究,尤其是非腺毛更具有種的專屬性;舒抒等對巫山淫羊藿、粗毛淫羊藿、柔毛淫羊藿等藥材粉末的顯微特征進(jìn)行了研究,指出非腺毛長度、直徑、毛壁厚度及葉表皮細(xì)胞形態(tài)等特征可用于種間鑒別。2.2朝鮮淫羊ws-pcr擴(kuò)增篩選DNA條形碼概念由加拿大動物學(xué)家Hebert提出,是使用通用且相對較短的DNA片段對物種進(jìn)行快速鑒定的技術(shù),并被逐漸應(yīng)用到中藥鑒定中。郭寶林等采用來源于3個基因組的9個DNA片段序列,通過對比種間序列變異率、構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹、考察特異性基因位點的方法對市場上常見的8種淫羊藿進(jìn)行鑒別,僅能實現(xiàn)朝鮮淫羊藿與其他7種淫羊藿的區(qū)分。在此基礎(chǔ)上,王川易等利用ITS上的特異性位點設(shè)計并篩選出2對引物組合,使其對朝鮮淫羊藿進(jìn)行特異性擴(kuò)增,實現(xiàn)朝鮮淫羊藿的快速鑒別。Jiang等對psbA-trnH、ITS、rbcL、matK4個序列在10種淫羊藿37個樣品中的擴(kuò)增效率、種間差異性及barcodinggap等性質(zhì)進(jìn)行評價,認(rèn)為psbA-trnH序列或可作為潛在的鑒別序列。綜上所述,朝鮮淫羊藿與其他種淫羊藿親緣關(guān)系較遠(yuǎn),通過DNA條形碼可實現(xiàn)與其他幾種淫羊藿的鑒別,而其他淫羊藿間的親緣關(guān)系較近,迄今關(guān)于淫羊藿分子方面的研究中所給出的序列在淫羊藿屬植物中均顯示出較小的遺傳變異率,即種間序列變異與種內(nèi)序列變異間無明顯差異,不能用于鑒定,因此,找到能夠?qū)?種或幾種淫羊藿(除朝鮮淫羊藿外)從其他的淫羊藿屬植物中區(qū)分鑒別開的DNA條形碼序列是今后淫羊藿DNA條形碼技術(shù)的研究重點。2.3加入相應(yīng)部位和豐富魚《中國藥典》2010年版中以淫羊藿苷和總黃酮(巫山淫羊藿以朝藿定C為指標(biāo)成分,無總黃酮定量測定)為指標(biāo)性成分對淫羊藿的質(zhì)量進(jìn)行控制,然而,不同來源的淫羊藿所含化學(xué)成分類別及其量在種內(nèi)和種間均存在著顯著的差異,僅針對單一指標(biāo)成分或總黃酮不能有效地評價其化學(xué)品質(zhì)。中藥指紋圖譜能全面、綜合地反映中藥的化學(xué)成分及其量的分布狀況,特征性明顯,專屬性強(qiáng),信息量豐富,在對幾種成分進(jìn)行定量分析的同時,還能夠通過其圖譜的特征峰群對藥材進(jìn)行來源鑒定,是一種實現(xiàn)對中藥多組分、多指標(biāo)分析的理想方法。目前,淫羊藿的指紋圖譜多采用反相高效液相色譜法(RP-HPLC),黃酮苷類成分為淫羊藿中的主要成分,其紫外最大吸收在269~274nm,因此多采用270nm作為檢測波長;流動相采用乙腈-水系統(tǒng)梯度洗脫,得到色譜峰數(shù)目多、分離度好,在水中加入一定比例(0.1%~0.5%)的甲酸或冰醋酸可抑制解離,改善峰拖尾。黃朝瑜等首先建立了淫羊藿黃酮類成分的指紋圖譜,得到7個共有峰,精密度、穩(wěn)定性及重復(fù)性良好;王麗霞等建立了秦嶺山區(qū)產(chǎn)3種淫羊藿的指紋圖譜,標(biāo)出9種共有成分。易中宏等和張萍等分別比較了巫山、朝鮮、箭葉淫羊藿不同生長部位的指紋圖譜,證實不同生長部位化學(xué)成分差異顯著,葉片所含化學(xué)成分種類及其量均高于其他部位,為淫羊藿以葉入藥給出了依據(jù),并提示應(yīng)注意對市場上淫羊藿藥材質(zhì)量加以控制,如莖在藥材中比例過高則會降低藥材品質(zhì)。指紋圖譜可以顯示淫羊藿在炮制前后化學(xué)成分的變化,譚鵬等對比炮制前后巫山淫羊藿指紋圖譜,發(fā)現(xiàn)巫山淫羊藿在炮制后朝藿定C的峰面積減小,而淫羊藿苷的峰面積則有所增加。朱粉霞等比較了朝鮮淫羊藿和柔毛淫羊藿炮制前后指紋圖譜,發(fā)現(xiàn)二者在炮制前后指紋圖譜有5處發(fā)生了變化;由此再結(jié)合藥理研究,可以為闡釋炮制機(jī)制提供依據(jù)。不同品種間淫羊藿指紋圖譜具有顯著差異,可用于淫羊藿藥材種類的鑒別,郭寶林等將淫羊藿指紋圖譜分為4個特征區(qū),其中第2特征區(qū)主要由朝藿定A、朝藿定B、朝藿定C、淫羊藿苷4個色譜峰構(gòu)成,簡稱為“ABCI”組峰。宋劍等建立了3個品種(巫山淫羊藿、朝鮮淫羊藿、柔毛淫羊藿)淫羊藿指紋圖譜,顯示“ABCI”組峰中各峰分離度良好,各峰的組成和峰面積在種內(nèi)較穩(wěn)定,種間差異明顯,能為淫羊藿藥材的鑒別和質(zhì)量控制提供有效依據(jù)。裴麗寬分析8種藥用淫羊藿指紋圖譜,顯示朝鮮淫羊藿具有可區(qū)別于其他種淫羊藿的獨立特征峰,可作為鑒別依據(jù),淫羊藿、粗毛淫羊藿也顯示出具有可區(qū)分性的指紋特征,而巫山淫羊藿和箭葉淫羊藿種內(nèi)圖譜一致度低;“ABCI”組峰既是淫羊藿指紋圖譜特征峰,同時又代表了淫羊藿的主要藥效成分。Xie等據(jù)此提出了“藥效組分分類法”,認(rèn)為具有相似“ABCI”組峰結(jié)構(gòu)的藥材即具有相似的藥理活性,在應(yīng)用中可歸為一類,以簡化淫羊藿質(zhì)量控制的復(fù)雜度并可作為擴(kuò)大藥源的依據(jù)。隨著色譜技術(shù)的發(fā)展,一些新的色譜技術(shù)也被逐步應(yīng)用到淫羊藿指紋圖譜中。朱粉霞等以UPLC法分別建立朝鮮淫羊藿和柔毛淫羊藿指紋圖譜,朝鮮淫羊藿標(biāo)出35個共有峰,柔毛淫羊藿標(biāo)出13個共有峰,二者相似度均大于92%,且該法分析時間短、分離度高、重現(xiàn)性良好。HPLC-MS聯(lián)用技術(shù)可對指紋圖譜中的色譜峰進(jìn)行結(jié)構(gòu)辨認(rèn),進(jìn)一步增強(qiáng)指紋圖譜的特征性。竇建鵬等建立了長白山區(qū)朝鮮淫羊藿高效液相色譜指紋圖譜,檢出13個共有峰,并通過HPLC-MS聯(lián)用技術(shù)對13個峰進(jìn)行了結(jié)構(gòu)確認(rèn),其中11個為黃酮類成分,2個為生物堿類成分。3提高淫羊wt-資源利用度淫羊藿中含