草素抗焦慮作用的實驗研究

草素抗焦慮作用的實驗研究

蜘蛛香是指屬于真菌科的虛擬根和根莖，也被稱為馬蹄香、虎七和印度蜘蛛。2010年版《中國藥典》（一部）。具有理氣止痛,消食止瀉,祛風除濕,鎮(zhèn)靜安神的功效,用于食積不化,腹瀉痢疾,風濕痹痛,腰膝酸軟,失眠等。纈草素類成分是其重要的活性成分。本研究從蜘蛛香中提取分離得到纈草素,并對其進行了抗焦慮作用研究。1材料表面1.1高效液相色譜鑒定蜘蛛香藥材購自云南師宗縣,經(jīng)北京中醫(yī)藥大學石晉麗教授鑒定為敗醬科植物蜘蛛香ValerianajatamansiJones的干燥根及根莖。纈草素自制,并經(jīng)高效液相色譜鑒定。臨用時將纈草素與生理鹽水和聚氧乙烯脫水山梨醇單油酸酯(吐溫80)配成所需濃度的混溶液。同時,空白組用生理鹽水和吐溫80作為對照。氯化鈉注射液,山東金洋藥業(yè)有限公司,批號080501。地西泮(DZP),北京益民藥業(yè)有限公司,批號0806007。用生理鹽水配成所需濃度的溶液,給藥容量10mL·kg-1,新鮮配制。乙腈為色譜純,美國Tedia公司。蒸餾水為色譜純,廣州屈臣氏食品飲料有限公司。石油醚、乙酸乙酯、無水乙醇、95%乙醇為分析純,北京化工廠。1.2身scxk軍SPF級SD雄性大鼠60只,體重150~170g,購自軍事醫(yī)學科學院實驗動物中心,合格證號SCXK(軍)2007-004。大鼠飼養(yǎng)于中國科學院心理研究所SPF動物房。光照節(jié)律12L∶12D(7∶00~19∶00),室溫(22±2)℃,濕度50%左右,動物可以自行攝取標準飼料和清潔飲用水。動物實驗遵守國際實驗動物倫理學要求。1.3agityntctnoolwellagityntec.n堅持算法-agityntctnoolAgilent1100型高效液相色譜儀(AgilentTechnologies);大鼠高架十字迷宮(ENV-256I-8MedAssociatesInc)。2方法2.1高效液相色譜檢測蜘蛛香藥材冷凍粉碎,過40目篩,浸泡30min后,用相當于藥材8倍重量的95%乙醇超聲提取3次。超聲提取液減壓濃縮,濃縮液以粗硅膠拌樣,石油醚、乙酸乙酯進行抽提,收集抽濾液,減壓濃縮,濃縮液以細硅膠拌樣,進行硅膠柱層析,石油醚∶乙酸乙酯按一定比例洗脫,反復柱層析得纈草素。經(jīng)高效液相色譜檢測結(jié)果表明,纈草素純度為96%。色譜條件如下:AgilentC18柱(4.6mm×250mm,5μm);流動相:乙腈-水(68∶32);檢測波長為256nm;流速為0.95mL·min-1;柱溫為30℃。2.2關(guān)于藥物效率的研究2.2.1單次給藥和劑量大鼠每籠4只,將大鼠隨機分為纈草素高、中、低劑量組、DZP組和空白組共5組。其中纈草素高、中、低組分別按20,10,5mg·kg-1d-1給予ig,DZP組給予1mg·kg-1d-1ig,空白組ig等容積的生理鹽水。1次/d,連續(xù)10dig給藥,于第10d中藥組和鹽水對照組末次ig1h后,地西泮組ig0.5h后,于8:00~14:00進行行為測試。2.2.2小鼠的活動情況記錄迷宮測試前將每只大鼠放入45cm×30cm×15cm塑料盒中,任其自由探究5min后迅速置于EPM的中央平臺處,使其頭部正對其中1個開放臂,采用紅外線技術(shù)記錄5min內(nèi)小鼠的活動情況。2.2.3大鼠整體開閉機制進入封閉臂的次數(shù)①進入開放臂次數(shù)(openarmentry,OE):進或出入到任一開放臂的次數(shù),以大鼠身體進入70%分區(qū)為準;②進入開放臂時間(openarmtime,OT):進入開放臂的時間單位(s);③進入封閉臂次數(shù)(closearmentry,CE):進或出入到任一封閉臂的次數(shù),以大鼠身體進入70%分區(qū)為準;④進入封閉臂時間(closearmtime,CT):進入封閉臂的時間單位(s);⑤開臂時間百分率:OT(%)=OT/(OT+CT)×100%(6)開臂次數(shù)百分率:OE(%)=OE/(OE+CE)×100%。2.2.4統(tǒng)計分析用SAS8.2軟件進行數(shù)據(jù)分析,計量資料用x珋±s表示,各給藥組和空白對照組間的比較用t檢驗。P<0.05有統(tǒng)計學意義。3結(jié)果3.1鼠在高架液壓內(nèi)的停留時間給予纈草素10,20mg·kg-1劑量組能顯著增加大鼠在高架十字迷宮開臂內(nèi)的停留時間。給予纈草素10mg·kg-1劑量組大鼠在高架十字迷宮開臂內(nèi)的進入次數(shù)比空白組明顯增加,差異有顯著性意義(P<0.01)。見表1。3.2大鼠運動能力與空白組相比,DZP組、纈草素中劑量組可以明顯增加OT%和OE%值(P<0.05或P<0.01);與空白組相比,纈草素高劑量組可以明顯的增加OT%值(P<0.01)。OE+CE即總的入臂次數(shù)(totalarmentry),標志著大鼠的運動能力(locomotoractivity)。與正常組比較,纈草素中劑量組大鼠運動能力有所增加(P<0.05);正常對照、DZP、纈草素低、高劑量組之間比較無顯著差異。結(jié)果表明:纈草素在劑量為10mg·kg-1時,在此焦慮模型上有明顯的抗焦慮作用,但是給藥組抗焦慮作用并不隨著劑量的升高而加強。見表2。4草素類化合成酶穩(wěn)定的作用在纈草素類生藥中,蜘蛛香中纈草素類成分的含量要遠遠大于其他常用的纈草類生藥。狄宏曄等研究蜘蛛香中總纈草素的提取純化工藝,以纈草素含量為指標,采用正交試驗法篩選出最佳提取工藝。纈草素類成分為環(huán)烯醚萜結(jié)構(gòu),穩(wěn)定性較差,陳玉娟等研究纈草素在不同溶媒中的穩(wěn)定性,結(jié)果得出纈草素單體可冷凍存放于氯仿溶液中,使其保持相對穩(wěn)定。纈草素還可能受濕度、溫度及光照的影響,故實驗中樣品處理及含量測定均須在低溫、黑暗、密閉的環(huán)境中進行,為纈草素單體提取、制劑、貯存提供理論依據(jù)和技術(shù)支持。動物研究發(fā)現(xiàn),在Geler-Seifter沖突實驗和高架十字迷宮試驗中,纈草素類成分具有抗焦慮的作用。初步研究報道,36個患有廣泛性焦慮的醫(yī)院門診病人,均符合《精神疾病診斷與統(tǒng)計手冊》(第3版的修訂版)(DSMIII-R)中的焦慮癥診斷標準,纈草素類組服藥4周后,能明顯的減低漢密爾頓焦慮量表(HAMA)評分,減緩焦慮癥的精神癥狀。本實驗證明纈草素確實有明顯的抗焦慮作用,與上述報道相一致,具有良好的開發(fā)前景。本實驗得出纈草素在劑量為10m