定量組織化學(xué)和組織化學(xué)的應(yīng)用

定量組織化學(xué)

掌握內(nèi)容常用的定量細(xì)胞化學(xué)技術(shù)種類圖像分析系統(tǒng)、顯微分光光度技術(shù)、流式細(xì)胞儀技術(shù)和激光掃描共聚焦技術(shù)在定量組織化學(xué)中的應(yīng)用概述組織化學(xué)的建立，開始只能對組織細(xì)胞內(nèi)的化學(xué)成分進(jìn)行定性、定位觀察。大量的組織細(xì)胞圖像，限于人眼分辨率和定性描述的局限性，只能用文字定性的、半定量的或數(shù)據(jù)或曲線來部分地描述有關(guān)信息。概述多學(xué)科技術(shù)的綜合應(yīng)用，如計算機(jī)、紅外線、超聲波、放射性核素、光纖、電視、光學(xué)和電子顯微鏡、磁共振、激光等，使組織化學(xué)研究上升到定量分析分子和離子的水平。常用的定量組化手段1、目測術(shù)——半定量技術(shù)2、圖象分析儀：測量細(xì)胞的幾何參數(shù)、灰度參數(shù)、色度參數(shù)、紋理參數(shù)和細(xì)胞化學(xué)反應(yīng)的光密度參數(shù)等。形態(tài)立體學(xué)技術(shù)測量計算細(xì)胞的三維形態(tài)參數(shù)。（細(xì)胞形態(tài)計量學(xué)技術(shù)）常用的定量組化手段3、光度測量技術(shù)定量測定細(xì)胞內(nèi)物質(zhì)的含量（顯微分光光度技術(shù)、顯微熒光技術(shù)、流式細(xì)胞儀技術(shù)等）4、X射線微區(qū)分析測定細(xì)胞內(nèi)元素或細(xì)胞化學(xué)反應(yīng)產(chǎn)物的元素類型和含量。5、用特殊顯微鏡檢術(shù)進(jìn)行細(xì)胞形態(tài)、細(xì)胞內(nèi)成分定量測定（顯微偏光技術(shù)、顯微干涉技術(shù)、激光掃描共聚焦技術(shù)）一、目測定量術(shù)細(xì)胞計數(shù)酶組化、免疫組化及熒光組化的初步定量描述法——陽性率和陽性強(qiáng)度法共五級描述，從“－”到“＋＋＋＋”二、圖像分析系統(tǒng)采用計算機(jī)技術(shù)和數(shù)學(xué)形態(tài)學(xué)方法客觀精確地用數(shù)據(jù)表達(dá)細(xì)胞圖象中的各種信息按采用的計算機(jī)不同，可分為大型、中型、小型圖像分析儀，醫(yī)學(xué)圖象處理大都采用后者。按顯示的圖象不同又可分為黑白、偽彩色和真彩色圖像分析儀。（顯微鏡）、圖像輸入裝置、信息專用計算機(jī)、輸出設(shè)備基本原理把光學(xué)圖像成像于攝像管的靶面上，再把攝像管的靶面上的光學(xué)圖像變換成電荷濃淡表示的圖像光學(xué)信號——電子信號——模擬成像在顯微圖像中的細(xì)胞或細(xì)胞器，一般具有圖像的三個要素：①濃度信息

②位置信息

③色彩信息濃度信息作為圖像中重要的一種信息，度量它的尺度稱為灰度，它代表圖像各部分顏色的深強(qiáng)程度。灰度共有256級，0為黑色，255為白色人眼判斷圖象濃淡時，灰度分辨率大約在20灰度級以下位置信息是指在一幅圖象平面上建立坐標(biāo)系，用X和Y表示圖象中任一象素點的二維平面位置而函數(shù)形式f(x,y)表示位置為(x，y)那一像素點上的灰度。人眼對彩色的分辨能力大大高于對黑白圖象灰度級的觀察。因此，在圖像分析中．常常使用不同的彩色和色調(diào)的變化來代替圖像黑白灰度級別的變化、以達(dá)到突出圖像信息空間分布的目的。真彩色和假彩色

紅光R、藍(lán)光B、綠光GY＝xR+yB+zG(x,y,z分別表示每種光的主觀亮度)圖像分析系統(tǒng)測定的主要內(nèi)容1、形態(tài)學(xué)參數(shù)測定：對細(xì)胞、細(xì)胞核、細(xì)胞器大小、輪廓的定量描述——周長、直徑、面積、軸比、圓球度、核質(zhì)比等。如：腫瘤細(xì)胞核與正常細(xì)胞核的大小，前者比后者顯著增高圖像分析系統(tǒng)測定的主要內(nèi)容2、灰度參數(shù)：細(xì)胞質(zhì)、細(xì)胞核、平均灰度、最大灰度、最小灰度、灰度范圍、灰度變化系數(shù)等3、光密度測量帶有光密度計組件，測定被測物的光密度是一種絕對值，與圖像顏色的深淺有關(guān)。圖像分析系統(tǒng)測定的主要內(nèi)容4、色度參數(shù)：5、細(xì)胞染色體核型的自動分析三、細(xì)胞光度測量主要定量測定通過細(xì)胞化學(xué)反應(yīng)后的最終反應(yīng)產(chǎn)物的量，并以標(biāo)準(zhǔn)物作對照，得出定量結(jié)果。細(xì)胞光度測量從原理上可以諸多光學(xué)現(xiàn)象的任何一種作為基礎(chǔ)，如吸收、發(fā)光(熒光、磷光)、阻滯(干涉、偏振)、反射(鏡面、散射)等。最常用的方法是吸收光度測量、熒光光度測量、干涉測量和反射測量等吸光光度測量和顯微分光光度計細(xì)胞吸收光度測量，取決于有色的或不透光的化學(xué)基團(tuán)從特定波長光線接受能量的能力。吸收物質(zhì)或嗜色體，可以是細(xì)胞內(nèi)產(chǎn)生的（如核酸），也可以是細(xì)胞化學(xué)反應(yīng)的產(chǎn)物，或染料染色的結(jié)果。顯微分光光度計又稱細(xì)胞分光光度計以物質(zhì)分子對光波的選擇性吸收為基礎(chǔ)，在顯微鏡下對生物樣品中的化學(xué)物質(zhì)進(jìn)行定量測定主要結(jié)構(gòu)1、光源：白熾燈（400-700nm）鹵鎢燈（320-300nm）、氙燈（180-1000nm）、汞燈（一般用于激發(fā)熒光）等2、分光系統(tǒng)：色散元件、濾光片、棱鏡、光柵單色儀等，目的是使進(jìn)入顯微鏡的光波亮度充足，波長單一且可調(diào)。主要結(jié)構(gòu)3、顯微系統(tǒng)：4、自動聚焦系統(tǒng)5、掃描系統(tǒng)：針對X、Y軸6、光電接受系統(tǒng)7、電子控制系統(tǒng)及計算機(jī)：控制樣品測量條件和數(shù)據(jù)分析。樣品要求1、避免使用含高光密度物質(zhì)的固定液2、細(xì)胞盡量分散，單個測量3、選擇合適的染色方法，不能雙染。應(yīng)用1、DNA含量測定2、蛋白質(zhì)含量測定3、酶含量測定4、光密度顯微測定流式細(xì)胞儀（FCM）它集電子技術(shù)、計算機(jī)技術(shù)、激光技術(shù)、流體理論于一體，是一種非常先進(jìn)的檢測儀器。又叫流式細(xì)胞光度計流式細(xì)胞儀的特點單個細(xì)胞分析同時多參數(shù)分析速度快：千、萬細(xì)胞/秒統(tǒng)計學(xué)意義：提供細(xì)胞群體的均值和分布情況分選感興趣的細(xì)胞流式細(xì)胞儀的工作原理光學(xué)系統(tǒng)

激光光源 光收集系統(tǒng)液流系統(tǒng)

流動室液流驅(qū)動系統(tǒng)電子系統(tǒng)

光電轉(zhuǎn)換 數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)細(xì)胞分選系統(tǒng)InjectorTipFluorescencesignalsFocusedlaserbeamSheath