第13章 免疫學技術(shù)與方法

第十三章

免疫學技術(shù)與方法1免疫學技術(shù)是指利用抗原抗體反應(yīng)的特異性原理，建立各種檢測與分析技術(shù)以及建立這些技術(shù)的制備方法。分為：免疫檢測技術(shù)（血清學技術(shù)）細胞免疫技術(shù)免疫制備技術(shù)免疫學技術(shù)2血清學技術(shù)的類型（免疫檢測技術(shù)）凝集反應(yīng)沉淀反應(yīng)補體結(jié)合反應(yīng)免疫標記技術(shù)3指與細胞免疫有關(guān)的各種檢測技術(shù)，包括對免疫細胞、細胞因子的檢測及功能分析。細胞免疫技術(shù)淋巴細胞分離與檢測淋巴細胞功能測定細胞因子測定體內(nèi)細胞免疫試驗E玫瑰花環(huán)試驗T細胞亞群檢測技術(shù)淋巴細胞轉(zhuǎn)化試驗細胞毒性T細胞試驗巨噬細胞移動抑制試驗白細胞介素測定干擾素測定皮膚試驗4免疫制備技術(shù)抗原制備抗體制備抗體和細胞因子純化淋巴細胞制備抗體標記與致敏指制備與免疫檢測有關(guān)的各種試劑，包括抗原制備、抗體制備及抗體標記等技術(shù)。5體內(nèi)殺菌、溶菌、調(diào)理、中和毒素免疫病理損傷—超敏反應(yīng)、免疫性疾病等體外：凝集、沉淀、溶細胞、中和毒素、補體結(jié)合等又稱：serologicalreaction血清學實驗第一節(jié)抗原抗體反應(yīng)原理及特點6一、抗原抗體反應(yīng)的原理基本原理：特異性（epitopeHVR）可見性（凝集、沉淀、溶血等）結(jié)合力(4種)7高度互補（epitope-HVR）緊密接觸結(jié)合力抗原

抗體帶電離子異性相吸靜電引力分子極化范德華引力形成氫鍵氫鍵引力形成疏水基團疏水作用力作用最小最具特異性作用最大抗原抗體結(jié)合可見反應(yīng)比例合適81.靜電引力指帶電離子基團（如：—NH3+和—COO-）之間的引力，距離越近引力越大。92.范德華力

分子間（或原子間)相互接近，分子極化產(chǎn)生引力，其作用取決于分子空間構(gòu)型，如：凹槽與凸起互補，抗原與抗體，酶與底物。能量小于靜電引力。10（3）氫鍵結(jié)合力

指供氫體氫原子與受氫體原子之間的引力—“氫鍵橋梁”，能量大于范德華引力。114.疏水作用力

指疏水基團間排斥水分子，相互聚集的力。作用力最強，占總結(jié)合力的50％。12

結(jié)合力的大小

親和力（affinity）表示親合力（avidity）13一個抗體結(jié)合點與一個抗原表位間的結(jié)合強度?！埃╯inglepoint－single

point）”親和力用平衡常數(shù)表示：K=K1/K2親和力（affinity）：即：結(jié)合常數(shù)/解離常數(shù)K值越大，親和力越高，與抗原的結(jié)合越牢固14親合力（avidity）指整個抗體分子與抗原之間結(jié)合的強度

“allpointsallpoints”與抗體的結(jié)合價直接相關(guān)。親合力高，與抗原結(jié)合牢固不易解離。15二、抗原抗體反應(yīng)的特點（一）特異性（specificity）概念：一種抗原只能與其相應(yīng)的抗體結(jié)合起反應(yīng)分子基礎(chǔ)：Ag-ADHVR-Ab空間結(jié)構(gòu)高度互補VH和VL各具三個HVR與AD互補意義免疫學檢測中常用已知Ag檢測未知Ab，反之亦然。相對性：當抗原之間有相同或相似結(jié)構(gòu)的AD時（共同抗原）交叉反應(yīng)（crossreaction）16（二）比例性

(proportionality)指抗原抗體的量比關(guān)系，即只有當抗原抗體的濃度比例適當時，才出現(xiàn)可見反應(yīng)。1929年Heidelberger以固定Ab量逐漸增加Ag量的試驗發(fā)現(xiàn)帶現(xiàn)象。1977年Green把此現(xiàn)象稱為鉤狀效應(yīng)（hookeffect），包括前后帶現(xiàn)象。指免疫檢測中由于抗原、抗體濃度比例不合適而致檢測結(jié)果呈假陰性的現(xiàn)象。17抗原抗體反應(yīng)比例性示意圖181、帶現(xiàn)象:在抗原抗體反應(yīng)等價帶前后,由于抗體或抗原過量,上清液中可測出游離的抗體或抗原,形成的沉淀物少,不出現(xiàn)可見反應(yīng),這種現(xiàn)象稱為帶現(xiàn)象2、等價帶:抗原抗體反應(yīng)曲線的高峰部分是抗原抗體分子比例合適的范圍,稱為抗原抗體反應(yīng)的等價帶。在此范圍內(nèi),抗原抗體充分結(jié)合,沉淀物形成快而多。3、前帶現(xiàn)象:抗原抗體反應(yīng)當抗體量過剩時,不出現(xiàn)可見反應(yīng)。4、后帶現(xiàn)象:抗原抗體反應(yīng)當抗原量過剩時,不出現(xiàn)可見反應(yīng)。19網(wǎng)格學說（圖）抗體的兩個Fab段分別結(jié)合兩個Ag分子，相互交叉結(jié)合連接成巨大的網(wǎng)格狀立體聚合物，（可見）。二者比例合適：網(wǎng)格學說20Ab/Ag過剩過剩方的結(jié)合價得不到飽和，大多數(shù)游離存在，只形成小分子復合物（不可見）。21確定

的濃度非常重要，即在實驗中需對Ag/Ab進行適當?shù)?/p>

，調(diào)整二者的比例，產(chǎn)生可見反應(yīng)。一般原則：固定

含量（Ag/Ab）的濃度，稀釋

含量的(Ab/Ag)。一般可溶性Ag稀釋

，顆粒性Ag，稀釋

。Ag/Ab稀釋低高AgAb22（三）可逆性（reversibility）解離1.Ag+AbAg—Ab一定條件（動態(tài)平衡）動態(tài)平衡公式:

[Ag]+[Ab][Ag-Ab]

K1:結(jié)合常數(shù)；K2：解離常數(shù)K1K223（四）階段性特異性結(jié)合兩個階段可見反應(yīng)階段數(shù)秒～數(shù)分鐘，肉眼不可見數(shù)分～數(shù)小時肉眼可見24（一）電解質(zhì)作用：中和膠體表面電荷，破壞水化層，使Ag-Ab聚集。常用：0.85%生理鹽水，PBS、Ca2+、Mg2+等。鹽析（salting）即電解質(zhì)濃度過高引起的非特異性蛋白質(zhì)沉淀。三、影響抗原抗體反應(yīng)的因素25（二）酸堿度Ag、Ab多為蛋白質(zhì)，具兩性電離特性，有其故有的pI,pH過高或過低均可影響Ag、Ab反應(yīng)。一般：pH6～8為宜。注意：自凝現(xiàn)象——即pH達到或接近顆粒性抗原的pI時，引起的抗原非特異性自身凝集現(xiàn)象。酸凝——pH過低時造成的蛋白質(zhì)自凝現(xiàn)象。26（三）溫度—影響反應(yīng)速度一般：15～40℃為宜，最適溫度：37℃,

過高（>56℃）:Ag-Ab解離，Ag、Ab變性，補體失活。冷凝集試驗：由肺炎支原體感染引起的原發(fā)性非典型性肺炎患者的血清中常含有較高的寒冷紅細胞凝集素，簡稱冷凝集素，它能與患者自身紅細胞或“O”型人紅細胞于4℃條件下發(fā)生凝集，在37℃時又呈可逆性完全散開。發(fā)病后第二周血清中冷凝集素效價達1：32以上，一次檢查凝集價>1：64或動態(tài)檢查升高4倍以上時，有診斷意義。27免疫學檢測技術(shù)的評價標準Specificity（特異）：檢測信號針對性和排他性Sensitivity（靈敏）：可測出的最低含量Simplicity（簡便）：操作是否方便Safety（安全）：是否有污染，對操作者的傷害Saving（節(jié)約）：性能/價格比28免疫檢驗技術(shù)發(fā)展進程的主要階段自然的肉眼觀察的抗原抗體反應(yīng)（沉淀反應(yīng)、凝集反應(yīng)）加速的肉眼觀察的抗原抗體反應(yīng)（電泳技術(shù)、分離技術(shù)）標記性免疫技術(shù)提高抗原抗體反應(yīng)的特異性、敏感性半自動、自動化檢驗儀器與免疫反應(yīng)原理結(jié)合，加快了反應(yīng)過程標記技術(shù)、單克隆技術(shù)、高智能自動化技術(shù)的最佳組合29抗原抗體反應(yīng)的基本類型表反應(yīng)類型實驗技術(shù)檢測方法敏感度沉淀反應(yīng)液相沉淀試驗觀察沉淀、檢測濁度+，++++瓊脂凝膠擴散觀察掃描沉淀線或環(huán)+凝膠電泳技術(shù)或峰或弧++補體參與反應(yīng)補體溶血試驗以裸眼或光電比色儀++補體結(jié)合試驗觀察測定溶血現(xiàn)象+++免疫標記技術(shù)熒光免疫技術(shù)檢測熒光現(xiàn)象++++放射免疫技術(shù)檢測放射性++++酶標免疫技術(shù)檢測酶底物顯色++++發(fā)光免疫技術(shù)測定發(fā)光強度++++生物素-親合素技術(shù)結(jié)合其它標記技術(shù)++++金標免疫技術(shù)檢測金顆粒沉淀++++凝集反應(yīng)

直接凝集試驗用裸眼、放大鏡或顯+間接凝集試驗微鏡觀察紅細胞或膠++凝集抑制試驗乳等顆粒和各種凝集+++協(xié)同凝集試驗現(xiàn)象+++抗球蛋白試驗+++中和反應(yīng)病毒中和試驗病毒感染性喪失+毒素中和試驗外毒素毒性丟失++30一、凝集反應(yīng)（Agglutination）

顆粒性抗原（如細菌、細胞）與相應(yīng)抗體，在適當電解質(zhì)存在的條件下，經(jīng)過一定時間后出現(xiàn)肉眼可見凝集塊稱為凝集反應(yīng)。

第二節(jié)常見免疫檢測方法31322、凝集反應(yīng)的用途（1）定性檢測

即根據(jù)凝集現(xiàn)象的出現(xiàn)與否判定結(jié)果陽性或陰性（2）定量檢測

即將標本作一系列倍比稀釋后進行反應(yīng)，以出現(xiàn)50%凝集的最高稀釋度作為滴度。凝集反應(yīng)方法簡便，敏感性高，臨床應(yīng)用廣泛。333、凝集反應(yīng)的分類玻片凝集反應(yīng)試管凝集反應(yīng)34（一）直接凝集試驗（Directagglutination）351、玻片凝集試驗362、試管凝集試驗37（二）間接凝集試驗indirectagglutination38已知抗原檢測抗體已知抗體檢測抗原正向反向391、正向間接凝集反應(yīng)402、反向間接凝集反應(yīng)413、間接凝集抑制反應(yīng)424、協(xié)同凝集反應(yīng)（coaggoltination）43可溶性抗原（血清蛋白、病毒抗原、細胞裂解液或組織液等）與相應(yīng)抗體結(jié)合，在一定條件下形成肉眼可見的沉淀物稱沉淀反應(yīng)。二、免疫沉淀反應(yīng)44液相沉淀反應(yīng)凝膠擴散沉淀凝膠免疫電泳絮狀沉淀環(huán)狀沉淀免疫濁度沉淀單向瓊脂擴散試驗雙向瓊脂擴散試驗血清免疫電泳火箭電泳對流免疫電泳免疫印跡等451、絮狀沉淀試驗操作步驟：（1）將可溶性抗原作一系列倍比稀釋。（2）各管加入一定濃度的適量抗血清。（3）振搖使抗原、抗體充分混勻，置37℃孵育。（4）產(chǎn)生沉淀量隨抗原量而不同，以出現(xiàn)沉淀物最多的管為最適比例管。絮狀沉淀試驗方法簡單，設(shè)備要求低，敏感度較低，目前多用以測定抗原抗體反應(yīng)的最適比。（一）液相沉淀反應(yīng)462、環(huán)狀沉淀試驗操作步驟：（1）用毛細滴管吸取抗血清加于沉淀管（5×50mm）底部，避免產(chǎn)生氣泡。（2）將抗原溶液沿管壁緩緩疊加于抗血清液面上，形成清晰的交界面。（3）置沉淀管于室溫下使其反應(yīng)，1~5min內(nèi)在兩界面間呈現(xiàn)乳白色沉淀環(huán)為陽性。30min仍無沉淀環(huán)出現(xiàn)則為陰性。應(yīng)用：主要用于抗原的定性試驗。用已知抗體來檢測未知抗原。

（診斷炭疽的Ascoli實驗、細菌分型、血跡鑒定）。

473、凝膠擴散沉淀凝膠擴散沉淀是指抗原與抗體在凝膠介質(zhì)中自由擴散形成濃度梯度，抗原與抗體在比例合適的擴散部位相遇形成沉淀線的反應(yīng)。常用的凝膠有瓊脂、瓊脂糖、葡聚糖或聚丙稀酰胺凝膠等。最常用的方法為：①單向瓊脂擴散試驗②雙向瓊脂擴散試驗48（1）單向瓊脂擴散試驗原理：1％～2%的瓊脂凝膠形成網(wǎng)狀構(gòu)架，空隙中是98％-99%的電解質(zhì)溶液。凝膠網(wǎng)孔較大，允許分子量在20萬以下甚至更大些的大分子物質(zhì)通過，絕大多數(shù)可溶性抗原和抗體的分子量在20萬以下，因此可以在瓊脂凝膠中自由擴散，所受阻力甚小。二者在瓊脂凝膠中相遇，在最適比例處發(fā)生沉淀，此沉淀物因顆粒較大而不擴散，故形成沉淀帶。

49單向免疫擴散試驗示意圖50（2）雙向免疫擴散試驗雙向免疫擴散試驗是在瓊脂板上按一定距離打數(shù)個小孔，在相鄰的兩孔內(nèi)分別放入抗原和抗體材料。當抗原和抗體向四周凝膠中擴散，在兩孔間可出現(xiàn)沉淀線，本法常用于抗原或抗體的定性或定量檢測，或用于兩種抗原材料的抗原相關(guān)性分析。51523、免疫電泳技術(shù)

免疫電泳技術(shù)是電泳分析與沉淀反應(yīng)的結(jié)合產(chǎn)物。兩大優(yōu)點：一是加快了沉淀反應(yīng)的速度二是將某些蛋白組分利用其帶電荷的不同而將其分開，再分別與抗體反應(yīng)，以此作更細微的分析。免疫電泳包括:血清免疫電泳、對流免疫電泳、火箭電泳、免疫印跡等

53（1）血清免疫電泳將抗原混合物（病人血清）在凝膠中用電泳分離后，沿電泳方向挖一平行的小槽，加入抗血清，進行雙向擴散。沉淀線的特點顯示病人血清與正常人血清存在的差異，即血清蛋白組分的缺少或增加。5455（2）火箭免疫電泳火箭免疫電泳技術(shù)又稱作單向電泳擴散免疫沉淀試驗，它是由單向擴散發(fā)展起來的一項定量技術(shù)，實質(zhì)上是加速度的單向擴散。56是一種將高分辨率凝膠電泳和免疫化學分析技術(shù)相結(jié)合的雜交技術(shù)。

經(jīng)過PAGE分離的蛋白質(zhì)樣品，轉(zhuǎn)移到固相載體（如NC膜）上，固相載體以非共價鍵形式吸附蛋白質(zhì)，且能保持電泳分離的多肽類型及其生物學活性不變。以固相載體上的蛋白質(zhì)或多肽作為抗原，與對應(yīng)的抗體起免疫反應(yīng)，再與酶或同位素標記的第二抗體起反應(yīng)，經(jīng)過底物顯色或放射自顯影以檢測電泳分離的蛋白成分。廣泛應(yīng)用于檢測蛋白表達。

（3）免疫印跡

westernblot57kDaM123456907560402558免疫標記技術(shù)是采用酶、熒光素、放射性核素等標記物標記抗原或抗體所進行的抗原抗體反應(yīng)。免疫標記技術(shù)既可對樣品作定性、定量檢測，也可進行定位分析，且大大提高了方法的靈敏度，是目前應(yīng)用最廣泛的免疫學檢測技術(shù)。四、免疫標記技術(shù)59常見標記免疫技術(shù)放射免疫技術(shù)酶免疫技術(shù)熒光免疫技術(shù)化學發(fā)光免疫技術(shù)免疫膠體金技術(shù)免疫印跡技術(shù)蛋白質(zhì)芯片技術(shù)

60該法是用放射性核素作為標記物標記抗原或抗體所進行的抗原抗體反應(yīng)，盡管放射免疫技術(shù)需特殊儀器設(shè)備且有一定的放射性危害，但由于其具有高度的靈敏度（pg）和自動化檢測等特點，因此在實驗研究和臨床檢測中仍被廣泛應(yīng)用。主要用于激素、小分子藥物、腫瘤標志物等小分子化合物的定量分析。1.放射免疫技術(shù)61放射免疫分析－基本原理競爭性結(jié)合反應(yīng)的經(jīng)典標記抗原（Ag*）和非標記抗原（Ag）與限量抗體(Ab)競爭性結(jié)合Ag*和Ag具有等同的與Ab結(jié)合能力62

Ag*AbAg標記抗原特異性抗體待測抗原(Ag*-Ab)+(Ag-Ab)抗原抗體復合物分離Ag*-Ab和游離Ag*從標準曲線上讀知含量

測定Ag*-Ab和游離Ag*放射性

放射免疫測定法(RIA)示意圖63將熒光素（異硫氰酸熒光素或羅丹明等）標記抗體，制成熒光抗體診斷試劑。用熒光顯微鏡觀察熒光的產(chǎn)生或熒光強度，以此判斷抗原的存在、定位和分布情況。免疫熒光技術(shù)有直接法和間接法等。2.免疫熒光技術(shù)64免疫熒光技術(shù)——直接法AgY熒光素標記的特異性抗體組織切片或細胞65免疫熒光技術(shù)——間接法AgYY熒光素標記的抗抗體組織切片或細胞待測抗體66免疫熒光染色顯示細胞骨架

免疫熒光染色是利用抗原－抗體特異性結(jié)合的原理，用經(jīng)熒光染料標記的抗體對細胞或組織內(nèi)的蛋白質(zhì)進行定性或定量研究的方法。該技術(shù)與熒光顯微鏡觀察相結(jié)合，可對特定的蛋白質(zhì)進行細胞或組織內(nèi)的精確定位。常用于抗原、抗體標記的熒光染料有以下幾種：顯示綠色熒光：Fluoresceinisothocyancie(FITC),Alexa-488顯示紅色熒光：RhodamineB（羅丹明）,TexasRed,Alexa-546,568,594顯示藍色熒光：Alexa－350

用Alexa488標記的抗人α-tubulin抗體染色顯示微管(綠色);細胞核:紅色,DAPI染色人皮膚角化細胞免疫熒光染色673、免疫酶技術(shù)⑴靈敏度高，可與放射免疫相比，檢測能力可達ng水平。⑵應(yīng)用范圍廣，既能檢測抗體又能檢測抗原，既能定性又能定量、定位。⑶不需要特殊設(shè)備，放射免疫需要特殊的實驗室條件，免疫熒光法需要熒光顯微鏡。⑷酶標記物有效時間較長，一般低溫保存可達一年以上。68⑴活性高，分解底物的能力強。⑵特異性強，即作用于底物的專一性強。⑶與抗原抗體結(jié)合后仍保持酶的活性。⑷與底物作用可以顯色。⑸純度高、易純化。⑹可溶性(水溶性)好，在溶液中穩(wěn)定。⑺測定方法簡單。⑻來源廣、價格低。標記酶的選擇條件：

69以HRP最為常用，具有活力高、穩(wěn)定、分子量小、易提純等優(yōu)點。致癌分子量40kD821867071酶聯(lián)免疫吸附試驗Enzymelinkedimmunosorbentassay簡稱：ELISA1971年Engvall和Perlmann發(fā)表是一類在固相載體上進行免疫酶染色的免疫酶標記技術(shù)721）基本原理與類型一種固相免疫測定技術(shù)，先將抗體或抗原包被到某種固相載體表面，并保持其免疫活性。測定時，將待檢樣本和酶標抗原或抗體按不同步驟與固相載體表面吸附的抗體或抗原發(fā)生反應(yīng)，后加入酶標抗體與免疫復合物結(jié)合，用洗滌的方法分離抗原抗體復合物和游離的未結(jié)合成分，最后加入酶反應(yīng)底物，根據(jù)底物被酶催化產(chǎn)生的顏色及其吸光度(A)值的大小進行定性或定量分析的方法。

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ELISA可用于測定抗原，也可用于測定抗體。在這種測定方法中有三個必要的試劑：（1）固相的抗原或抗體，即"免疫吸附劑"（immunosorbent）；（2）酶標記的抗原或抗體，稱為"結(jié)合物"（conjugate）；（3）酶反應(yīng)的底物?？稍O(shè)計出各種不同類型的檢測方法。74①雙抗體夾心法測抗原檢測抗原最常用的方法此法適用于檢驗各種蛋白質(zhì)等大分子抗原，例如HBsAg、HBeAg、AFP等。只要獲得針對受檢抗原的特異性抗體，就可用于包被固相載體和制備酶結(jié)合物而建立此法。用抗體包被固相載體加入抗原Sample(二價以上)，溫育加入酶標抗體，溫育加入底物，顯色75②雙抗原夾心法測抗體

用特異性抗原進行包被和制備酶結(jié)合物。此法中受檢標本不需稀釋，可直接用于測定。乙肝標志物中抗HBsAg的檢測常采用本法。本法關(guān)鍵在于酶標抗原的制備，應(yīng)根據(jù)抗原結(jié)構(gòu)的不同，尋找合適的標記方法。Ag酶標抗原待檢抗體固相載體76③間接法測抗體

檢測抗體最常用的方法間接法的優(yōu)點是只要變換包被抗原就可利用同一酶標二抗建立檢測相應(yīng)抗體的方法。酶標抗體血清樣品底物終止液77競爭法可用于抗原和半抗原的定量測定，也可用于測定抗體。④競爭法78用已知特異性抗體包被固相載體測定孔加待測抗原和一定量的酶標抗原使二者與固相抗體競爭結(jié)合對照孔只加一定量酶標抗原與固相抗體直接結(jié)合分別洗滌除去未結(jié)合的成分加底物顯色分別測定兩管的吸光度值，根據(jù)對照管與測定管吸光度值之比，計算標本中待測抗原含量79⑤捕獲包被法測IgM抗體IgM的檢測常用于傳染病的診斷，尤其用于病毒性感染的早期診斷。血清樣品或參比品

酶標抗體特異性抗原底物

終止液抗人IgM抗體連接在固相載體形成固相抗人IgM加底物顯色：如有顏色顯示，則表示血清標本中的特異性IgM抗體存在（陽性反應(yīng)）80⑥ABS-ELISA法（親和素-生物素系統(tǒng)-酶聯(lián)免疫吸附試驗）①：固相支持物；②：樣品；③：特異性IgG；④：生物素化抗小鼠IgG抗體（Biotin）；⑤：HRP酶標鏈親和素（Avidin）；⑥：DAB顯色液；⑦：顯色；ABS：親和素(avidin)生物素(biotin)系統(tǒng)(system）812）ELISA的一般操作方法8283848586共同特點：象搭積木一樣在固相載體上一層一層疊加8788899091第三節(jié)細胞免疫技術(shù)一、細胞分離原理1、基于細胞的物理特性1）細胞比重差異2）細胞的粘附性3）細胞對滲透壓改變的敏感性2、基于細胞表面的特異性標志物1）免疫磁珠分離法2）流式細胞術(shù)923、血液細胞的組成及比重外周血紅細胞粒細胞單個核細胞血小板淋巴細胞單核細胞1.0931.030~1.0351.075~1.090(PBMC)1.09293

原理：外周血各種血細胞的比重不同，利用淋巴細胞分層液作密度梯度離心，使一定比重的細胞群按相應(yīng)密度梯度分布，從而將各種血細胞加以分離。常用的分層液有Ficoll和Percoll兩種。一）單個核細胞分離密度梯度離心法二、細胞分離方法94Ficoll：1.077±0.001

Percoll常用密度20%1.03130%1.04340%1.05650%1.06760%1.07770%1.090細胞比重血小板1.030~1.035單個核細胞1.075~1.090粒細胞1.092紅細胞1.093細胞比重分層液比重95離心后PBMC紅細胞粒細胞Ficoll/60%Percoll稀釋外周血稀釋的血漿、血小板Ficoll/60%Percoll961、粘附去除法原理：單核細胞和粒細胞在37℃和Ca離子存在條件下能主動粘附在玻璃、塑料、尼龍毛、棉花纖維或葡聚糖凝膠。采集