厭氧微生物的分離及培養(yǎng)

厭氧微生物的別離及培養(yǎng)一、目的要求1、掌握堿性焦性沒食子酸法的原理；2、掌握斜面接種法和大試管套小試管法進(jìn)行厭氧微生物培養(yǎng)的方法。

二、根本原理厭氧微生物在自然界分布廣泛，種類繁多，作用也日益引起重視。培養(yǎng)厭氧微生物的技術(shù)關(guān)鍵是要使該類微生物處于除去了氧或氧化復(fù)原勢低的環(huán)境中。用于嚴(yán)格厭氧菌的別離和培養(yǎng)①Ｈungate技術(shù)；②厭氧手套箱；一般厭氧菌的培養(yǎng)①堿性焦性沒食子酸法②厭氧罐培養(yǎng)法③皰肉培養(yǎng)基法堿性焦性沒食子酸法焦性沒食子酸與堿溶液〔NaOH、Na2CO3和NaHCO3〕作用后形成易被氧化的堿性沒食子酸鹽，能通過氧化作用而形成黑、褐色的焦性沒食子橙從而除掉密封容器中的氧。這種方法的優(yōu)點(diǎn)是無需特殊及昂貴的設(shè)備，操作簡單，適于任何可密封的容器，可迅速建立厭氧環(huán)境。而其缺點(diǎn)是在氧化過程中會(huì)產(chǎn)生少量的一氧化碳，對(duì)某些厭氧菌的生長有抑制作用。同時(shí)，NaOH的存在會(huì)吸收掉密封容器中的二氧化碳，對(duì)某些厭氧菌的生長不利。用NaHCO3代替NaOH，可局部克服二氧化碳的被吸收問題，但卻又會(huì)導(dǎo)致吸氧速率的減慢。厭氧罐培養(yǎng)法利用一定方法在密閉的厭氧罐中生成一定量的氫氣，而經(jīng)過處理的鈀或鉑可作為催化劑催化氫與氧化合成水，從而除掉罐中的氧而造成厭氧環(huán)境。例如：利用鎂與氯化鋅遇水后發(fā)生反響生成氫氣，及碳酸氫鈉加檸檬酸水后產(chǎn)生CO2，而厭氧罐中使用的厭氧度指示劑一般都是根據(jù)美藍(lán)在氧化態(tài)時(shí)呈藍(lán)色，而在復(fù)原態(tài)時(shí)呈無色的原理設(shè)計(jì)的。皰肉培養(yǎng)基法堿性焦性沒食子酸法和厭氧罐培養(yǎng)法都主要用于厭氧菌的斜面及平板等固體培養(yǎng)，而皰肉培養(yǎng)基法那么在對(duì)厭氧菌進(jìn)行液體培養(yǎng)時(shí)最常采用。其根本原理是，將精瘦牛肉或豬肉經(jīng)處理后配成皰肉培養(yǎng)基，其中既含有易被氧化的不飽和脂肪酸能吸收氧，又含有谷胱甘肽等復(fù)原性物質(zhì)可形成負(fù)氧化復(fù)原電勢差，再加上將培養(yǎng)基煮沸驅(qū)氧及用液體石蠟凡士林封閉液面，可用于培養(yǎng)厭氧菌。這種方法是保藏厭氧菌，特別是厭氧的芽胞菌的一種簡單可行的方法。假設(shè)操作適宜，嚴(yán)格的厭氧菌都可獲得生長。三、實(shí)驗(yàn)器材

1、樣品〔自帶〕2、培養(yǎng)基：肉膏蛋白胨瓊脂培養(yǎng)基斜面〔根據(jù)實(shí)驗(yàn)室提供的對(duì)照菌的培養(yǎng)要求，可能還有其他培養(yǎng)基〕。3、溶液和試劑：10％NaOH，焦性沒食子酸等。4、儀器和其他用品：棉花，無菌的帶橡皮塞的大試管，滴管