白外用對大鼠和豚鼠瘡瘍模型的影響

白外用對大鼠和豚鼠瘡瘍模型的影響

白肉是薔薇科植物的干燥部位。它的味道又辛又苦，性質(zhì)也很冷。根據(jù)2010年版《中華人民共和國藥典》，它具有清熱解毒、消腫脹、固定傷口和生長肌肉的功能，主要用于傷口的寄生蟲、傷口、傷口和燃燒和冷卻?，F(xiàn)代研究表明,白蘞主要含多酚、蒽醌類等化學成分;白蘞主要活性為抗菌,并有抑制黑色素形成等作用;此外還有治療癌性發(fā)熱、支氣管擴張咯血、手足皸裂、骨折等作用。本文觀察白蘞外用對大鼠和豚鼠瘡瘍模型的影響。材料表面1.白水教育SPF級Wistar大鼠100只,體質(zhì)量180-200g,雌雄各半,由河南省實驗動物中心提供,合格證號:0003677;普通級豚鼠100只,體質(zhì)量200-230g,雌雄各半,由河南省康達實驗動物有限公司提供,合格證號:0121163。白蘞,購自安徽省亳州市藥材交易公司,經(jīng)鑒定為葡萄科植物白蘞Ampelopsisjaponica(Thunb.)Makino。除去雜質(zhì),洗凈,潤透,切厚片,曬干;白蘞水煎劑的制備方法:白蘞藥材600g加入10倍量的蒸餾水浸泡30min后煎煮,沸騰后改用文火煎煮60min,濾出煎液,再加入8倍量的蒸餾水沸后文火煎煮60min,合并2次濾液,70℃水浴濃縮至濃度為1.5g生藥/mL,作為白蘞水煎液大劑量組,用0.9%氯化鈉溶液稀釋成1.0g生藥/mL、0.5g生藥/mL,作為中、小劑量組。白蘞油糊制備方法:白蘞藥材打粉,過100目篩,麻油調(diào)糊,大劑量含藥量為0.2g/mL,小劑量為0.1g/mL;麻油淀粉調(diào)糊,含淀粉量為0.2g/mL。京萬紅燙傷膏,天津達仁堂京萬紅藥業(yè)有限公司,批號:211646。水合氯醛,天津市科密歐化學試劑開發(fā)中心,批號:20071018。一滴香,鄭州市春芝調(diào)味品有限公司,批號:20090426A。呋喃西林,蘇州第五制藥廠有限公司,批號:20090406。金黃色葡萄球菌(CMCC260035億/mL),河南中醫(yī)學院微生物實驗室提供;溶菌酶(LZM)測試盒,南京建成生物工程研究所,批號:20100114;氯化鈉注射液,鄭州永和制藥有限公司,批號:09073105;甲醛,煙臺市雙雙化工有限公司,批號:20090326。WFZUV2000型紫外可見分光光度計,尤尼卡(上海)儀器有限公司生產(chǎn);微量移液器,上海求精生化試劑儀器有限公司。方法1.大鼠單次給藥和大鼠的前藥關(guān)鍵因素ames大鼠100只,取10只作為空白組,其余大鼠造瘡瘍模型:均在右側(cè)背部脫毛,2d后腹腔注射10%水合氯醛(0.3g/kg)麻醉大鼠,用刀片在脫毛部位劃一十字切口(1cm×1cm),深達皮下,每個傷口內(nèi)注入5億個金黃色葡萄球菌,1次/d,連續(xù)3d,至傷口周圍出現(xiàn)紅、腫、觸痛,可見膿性分泌物為止。取瘡瘍模型成功的80只大鼠,隨機分為8組,雌雄各半,每組10只:白蘞水煎液大、中、小劑量組(1.5、1.0、0.5g生藥/mL,用消毒藥棉吸附相應藥液1.2mL后,敷在瘡瘍局部),白蘞油糊大、小劑量組(0.2、0.1g/mL,厚度2mm,相當于2.4、1.2g/只),京萬紅組(涂京萬紅燙傷藥膏,厚度2mm,相當于1g/只),麻油淀粉糊組(淀粉0.2g/mL,厚度2mm,相當于2.4g/只),模型組和空白組用消毒藥棉吸附0.9%氯化鈉溶液1.2mL,敷在瘡瘍局部;以上各組給藥后均以紗布、保鮮膜覆蓋膠布固定,每天保持藥物與瘡瘍部位接觸時間6h,6h后以0.9%氯化鈉溶液清洗用藥局部,連續(xù)給藥12d。每次給藥后單籠單只飼養(yǎng),以避免大鼠相互舔食藥物或啃噬傷口。記錄從用藥起12d內(nèi),傷口每天的愈合情況。第12天給藥后1h,大鼠眼眶后靜脈叢取血,3000r/min離心10min,分離血清,按試劑盒測定血清中溶菌酶的含量。剪取瘡瘍部位皮膚,固定于10%甲醛溶液中,石蠟包埋切片,HE染色,顯微鏡下觀察比較各組大鼠瘡瘍皮膚的愈合程度。2.單次給藥和大鼠的前藥及其他指標豚鼠100只,取10只豚鼠作為空白組,其余豚鼠造瘡瘍模型:均右側(cè)背部脫毛,2d后腹腔注射10%水合氯醛(0.25g/kg)麻醉豚鼠,用刀片在脫毛部位劃一十字切口(1cm×1cm),深達皮下,每個傷口內(nèi)注入5億個金黃色葡萄球菌,1次/d,連續(xù)3d,至傷口周圍出現(xiàn)紅、腫、觸痛,可見膿性分泌物為止。取造瘡瘍模型成功的80只豚鼠,隨機均分為8組,雌雄各半,每組10只:白蘞水煎液大、中、小劑量組(1.5、1.0、0.5g生藥/mL,用消毒藥棉吸附相應藥液1.2mL后,敷在瘡瘍局部),白蘞油糊大、小劑量組(0.2、0.1g/mL,厚度2mm,相當于2.4g、1.2g/只),京萬紅組(涂京萬紅燙傷藥膏,厚度2mm,相當于1g/只),麻油淀粉糊組(淀粉0.2g/mL,厚度2mm,相當于2.4g/只),模型組和空白組用消毒藥棉吸附0.9%氯化鈉溶液1.2mL,敷在瘡瘍局部;以上各組給藥后均以紗布、保鮮膜覆蓋膠布固定,每天保持藥物與瘡瘍部位接觸時間6h,6h后以0.9%氯化鈉溶液清洗用藥局部,連續(xù)給藥12d。每次給藥后單籠單只飼養(yǎng),以避免豚鼠相互舔食藥物或啃噬傷口。記錄從用藥起12d內(nèi),傷口每天的愈合情況。第12天給藥后1h,豚鼠心臟取血,3000r/min離心10min,分離血清,按試劑盒測定血清中溶菌酶的含量。剪取瘡瘍部位皮膚,固定于10%甲醛溶液中,石蠟包埋切片,HE染色,顯微鏡下觀察比較各組豚鼠瘡瘍皮膚的愈合程度。3.統(tǒng)計學處理數(shù)據(jù)分析用SPSS13.0forwindows統(tǒng)計軟件包進行數(shù)據(jù)資料的統(tǒng)計學處理,計量資料用表示,等級資料采用Ridit檢驗。P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。結(jié)果1.各模型組大鼠髓髓炎病理變化的比較見表2。經(jīng)Ridit檢驗,與空白組比,模型組出現(xiàn)顯著的瘡瘍病理損傷(P<0.01),說明造模成功;與模型組比,麻油淀粉糊組對瘡瘍的病理變化改善不明顯;京萬紅組、白蘞水煎液大、中、小劑量組和白蘞油糊大、小劑量組均可顯著改善瘡瘍的病理變化(P<0.01)。說明白蘞水煎液與油糊均可促使瘡瘍?nèi)笨诮M織修復閉合,減少炎細胞浸潤,而麻油淀粉糊組與模型組病理變化基本一致,提示白蘞外用具有很好的斂瘡生肌作用。3.不同白水煎液小劑量對血清中溶菌酶含量的影響見表3。豚鼠造瘡瘍模型后,模型局部出現(xiàn)明顯瘡瘍癥狀;與空白組比,模型組及麻油淀粉糊組血清溶菌酶含量顯著降低(P<0.01),說明造模成功;與模型組比,白蘞水煎液大、中、小劑量組和白蘞油糊大、小劑量組及京萬紅組均可顯著提高血清中溶菌酶的含量(P<0.01)。說明白蘞水煎液與糊劑均可顯著改善瘡瘍的感染程度,促使瘡瘍面積愈合恢復,提示白蘞外用有斂瘡生肌的作用。4.各模型組大鼠髓炎病理變化的比較見表4。經(jīng)Ridit檢驗,與空白組比,模型組出現(xiàn)顯著的瘡瘍病理損傷,病理變化顯著加重(P<0.01),說明造模成功;與模型組比,麻油淀粉糊組對瘡瘍的病理變化改善不明顯;京萬紅組、白蘞水煎液中劑量組和白蘞油糊大、小劑量組均可顯著改善瘡瘍的病理變化(P<0.01),白蘞水煎液大劑量組可明顯改善瘡瘍的病理變化(P<0.05)。說明白蘞水煎液與油糊可促使瘡瘍?nèi)笨诮M織修復閉合,減少炎細胞浸潤,而麻油組與模型組病理變化基本一致,提示白蘞外用具有很好的斂瘡生肌作用。皮膚組織病理學檢測瘡瘍是中醫(yī)外科臨床的常見病多發(fā)病,具有發(fā)病迅速,部分病情較重等特點,在面部可引起疔瘡走黃(西醫(yī)成為敗血癥或膿毒敗血癥),在手、足易引起傷筋損骨的嚴重后果。創(chuàng)傷出現(xiàn)感染以后,就形成了瘡瘍。一般“傷”在皮膚,出現(xiàn)感染后,傷口比較淺,感染也就比較薄,故稱為“瘍”。“創(chuàng)”在肌肉深處,感染以后膿血郁積較深,同時伴有紅腫熱痛,故稱為“瘡”。目前常通過動物人工創(chuàng)傷并用金黃色葡萄球菌感染的方法來造瘡瘍模型,瘡傷感染2d后,均見食量減少,俯臥少動,有觸痛,傷口有膿性分泌物,傷口周圍出現(xiàn)紅、腫、熱、痛現(xiàn)象,血清中溶菌酶含量顯著降低,動物皮膚各層結(jié)構(gòu)毛囊、皮脂腺消失,創(chuàng)瘍具有較大缺口,周圍有大量的炎細胞侵潤,使血管壁通透性增加,產(chǎn)生紅腫等現(xiàn)象。為較好判斷白蘞外用對瘡瘍的療效,本實驗對血清中溶菌酶的含量、瘡瘍部位皮膚組織病理變化進行評價。溶菌酶的測定更能反映白蘞在瘡瘍模型治療過程中的作用,溶菌酶是存在于人體正常體液及組織中的非特異性免疫因素,具有抗菌、抗病毒、消腫的功效,能客觀反映白蘞對瘡瘍的治療情況。組織病理學變化可以反映受損組織各層皮膚的炎細胞浸潤程度和愈合情況,能直接反映藥物的療效。實驗結(jié)果顯示白蘞水煎液大、中、小劑量組和白蘞油糊大、小劑量組均可顯著提高血清中溶菌酶的含量和顯著改善瘡瘍的病理變化。在對大鼠和豚鼠瘡瘍模型血清溶菌酶含量的影響方面,京萬紅組、白蘞水煎液中劑量組和白蘞油糊大劑量組均略優(yōu)于白蘞水煎液大、小劑量組和白蘞油糊小劑量組,但無統(tǒng)計學意義。在對大鼠和豚鼠瘡瘍模型組織病理學的影響方面,京萬紅組和白蘞油糊大劑量組相差不大,均略優(yōu)于各給藥組;白蘞水煎液中劑量組略優(yōu)于白蘞水煎液大、小劑量組及白蘞油糊小劑量組;麻油淀粉糊組與模型組溶菌酶含量及病理變化均基本一致,提示白蘞外用具有很好的斂瘡生肌作用。本實驗中麻油淀粉糊組各項指標與模型組相差不大,提示對瘡瘍的改善主要不是麻油本身的作用;但麻油氣味芳香,其香氣有利于維護毛細血管的通透性,改善血液循環(huán),有助于藥物的吸收?，F(xiàn)代臨床常用麻油調(diào)糊治療燒燙傷,增強療效?，F(xiàn)代研究認為,白蘞可促進T淋巴細胞增殖能力、巨噬細胞吞噬功能,而在抗感染免疫中,巨噬細胞發(fā)揮著吞噬、殺菌、清除炎癥產(chǎn)物和修復組織等重要作用,T淋巴細胞不僅可直接殺傷靶細胞,也可通過釋放淋巴因子間接發(fā)揮抗感染免疫效應。這表明白蘞可增強動物的免疫功能,因此其外敷應用于治療瘡瘍可能具有直接抗菌和調(diào)節(jié)機體免疫功能雙重機制。有研究認為,創(chuàng)面愈合的本質(zhì)與核心是肉芽組織中表皮細胞生長因子(EGF)的調(diào)控及其結(jié)果,創(chuàng)面愈合的過程是多種生長因子共同作用的結(jié)果,這在一定程度上反映了外用中藥在分子水平上的促瘡面愈合機制。白蘞的斂瘡生肌功能可能會促進動物皮膚在創(chuàng)面愈合早、中期創(chuàng)面EGF總量增多,從而加快創(chuàng)面的愈合。這很可能是外用白蘞促進創(chuàng)面愈合的重要途徑之一。本實驗為白蘞外用斂瘡生肌的功能提供了實驗依據(jù),有報道現(xiàn)代臨床用白蘞和麻油調(diào)糊治療燒傷創(chuàng)面、多發(fā)性毛囊炎、唇瘡、疔瘡療效顯著,故本實驗采用白蘞麻油調(diào)糊外用治療瘡瘍。2005版《中華人民共和國藥典》記載白蘞外用適量,煎湯洗或研成極細粉敷患處,故本實驗同時也采用白蘞水煎液外用治療瘡瘍,為白蘞斂瘡生肌的外用功能提供了實驗依據(jù),也為臨床瘡瘍的治療提供簡易有效的救治方法。白蘞斂瘡生肌的外用功能也為白蘞的臨床外用提供了理論支撐。2.藥物和試劑3.各組大鼠白水漿制備和溶菌酶含量見表1。大鼠造瘡瘍模型后,模