香菇多糖沉降工藝研究

香菇多糖沉降工藝研究

氨基葡萄糖藥物是一種化學(xué)品，具有抗炎作用。是由香菇多糖粗品經(jīng)化學(xué)反應(yīng),經(jīng)沉降、酸解提取、精制得到的高分子多糖,香菇多糖注射液及注射用香菇多糖臨床上使用多年,療效顯著,毒副作用小,主要用于惡性腫瘤的輔助治療、病毒性肝炎的治療。我們對(duì)香菇多糖沉降反應(yīng)的相關(guān)條件進(jìn)行摸索和優(yōu)化,其成品收率相對(duì)較高,質(zhì)量指標(biāo)均達(dá)到國(guó)家藥品標(biāo)準(zhǔn)。1目的為香菇多糖沉降反應(yīng)找出最佳工藝條件。2方法2.1原料、溶劑和試劑的初始要求2.2烷基三甲基溴化銨溶液香菇多糖粗品用純化水溶解,過(guò)濾,濾液在攪拌條件下緩緩加入十六烷基三甲基溴化銨溶液,并用氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH,使溶液的pH保持相對(duì)穩(wěn)定,然后靜置、離心,沉淀物經(jīng)乙酸處理,堿溶醇析處理,再經(jīng)乙醇洗滌、離心、乙醚洗滌、真空干燥、檢測(cè)含量。3單因素沉降反應(yīng)的試驗(yàn)3.1ctab法稱210g香菇多糖粗品(030412批,自制,含量為31.2%),加純化水140L溶脹溶解,過(guò)濾,高速離心機(jī)離去極少量的不溶物,得清液。將此清液混勻分7份,每份各加CTAB沉降劑15.0克,用氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)反應(yīng)液的pH到10.6,并使每份的體積相同,反應(yīng)溫度均為40℃,沉降時(shí)間相同,析出物經(jīng)同法酸堿處理,乙醇、乙醚洗滌后真空干燥得成品檢測(cè)。料水比對(duì)香菇多糖沉降的單因素試驗(yàn):試驗(yàn)結(jié)果初步表明:調(diào)節(jié)水料倍數(shù)為500~1800,可以獲得相對(duì)滿意的收率和純度。3.2ctab用量比對(duì)產(chǎn)品品質(zhì)的影響稱100g香菇多糖粗品(自制,030412批,含量為31.2%),加純化水50L溶脹溶解,過(guò)濾,高速離心機(jī)離去極少量的不溶物,得清液。將此清液混勻分五份,每份加CTAB用量比分別為0.1、0.125、0.15、0.175、0.2,調(diào)節(jié)溶液pH值10.2,并使每份的體積相同,反應(yīng)溫度40℃相同,反應(yīng)及沉降時(shí)間相同,析出物經(jīng)同法酸堿處理,乙醇、乙醚洗滌后真空干燥得成品檢測(cè)。沉淀劑的用量單因素試驗(yàn):(結(jié)果見表1)由實(shí)驗(yàn)結(jié)果可初步判斷,CTAB用量比為0.15時(shí),可獲得相對(duì)較高的純化收率及純度。3.3不同ph值的ctab法稱140g香菇多糖粗品(030412批,自制,含量為31.2%),加純化水100L溶脹溶解,過(guò)濾,高速離心機(jī)離去極少量的不溶物,得清液。將此清液混勻分五份,CTAB用量比為0.15,用氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)反應(yīng)液的pH值,將這組溶液的pH值調(diào)節(jié)為9.5、10.0、10.5、11.0、11.5、12.0、12.5。并使每份的體積相同,反應(yīng)溫均為40℃,沉降時(shí)間相同,析出物經(jīng)同法酸堿處理,乙醇、乙醚洗滌后真空干燥得成品檢測(cè)。pH值對(duì)香菇多糖沉降的單因素試驗(yàn):(結(jié)果見表2)實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明調(diào)節(jié)溶液pH為11左右,可以獲得較好的收率和純度,實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)產(chǎn)品的色澤隨溶液的pH值升高而有所加深。3.4反應(yīng)溫度的確定稱180g香菇多糖粗品(030416批,自制,含量為30.7%),加純化水180L溶脹溶解,過(guò)濾,高速離心機(jī)離去極少量的不溶物,得清液。將此清液混勻分九份,CTAB用量比均為0.15,用氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)反應(yīng)液的pH值到11.0,將這組溶液的溫度分別調(diào)節(jié)為10℃、15℃、20℃、25℃、30℃、35℃、40℃、45℃、50℃。并使每份的體積相同,反應(yīng)時(shí)間相同,沉降時(shí)間相同,析出物經(jīng)同法酸堿處理,乙醇、乙醚洗滌后真空干燥得成品檢測(cè)。溫度對(duì)香菇多糖沉降的單因素試驗(yàn):(結(jié)果見表3)實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明隨溫度上升,反應(yīng)速度加快,當(dāng)溫度上升到45℃以上時(shí),反應(yīng)液的色澤加深,產(chǎn)品內(nèi)在質(zhì)量相對(duì)下降,故適宜的溫度范圍約在30~45℃。3.5反應(yīng)時(shí)間的影響稱120g香菇多糖粗品(030418批,自制,含量為30.3%),加純化水100L溶脹溶解,過(guò)濾,高速離心機(jī)離去極少量的不溶物,得清液。將此清液混勻分6份,CTAB用量比均為0.15,用氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)反應(yīng)液的pH值到11.0,將這組溶液的溫度調(diào)節(jié)為35℃。并使每份的體積相同,反應(yīng)時(shí)間分別為15分鐘、30分鐘、40分鐘、50分鐘、60分鐘、70分鐘,沉降時(shí)間相同,析出物經(jīng)同法酸堿處理,乙醇、乙醚洗滌后真空干燥得成品檢測(cè)。反應(yīng)時(shí)間對(duì)香菇多糖沉降的單因素試驗(yàn):(結(jié)果見表4)實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明反應(yīng)時(shí)間太短,反應(yīng)不完全,以40分鐘效果較好,隨時(shí)間的延長(zhǎng),收率和質(zhì)量波動(dòng)不是很明顯,反應(yīng)時(shí)間對(duì)收率和質(zhì)量的影響不是很大。4香菇多糖沉降工藝的正交試驗(yàn)通過(guò)單因素初步試驗(yàn),可大致判斷出影響反應(yīng)效果的主要因素為:料水比、沉降劑用量、反應(yīng)溫度、pH條件。在此基礎(chǔ)上優(yōu)化香菇多糖沉降工藝,設(shè)計(jì)四因素三水平正交試驗(yàn)L9(3)(在做正交試驗(yàn)時(shí)將反應(yīng)時(shí)間均設(shè)為40分鐘)。按照這幾個(gè)因素設(shè)計(jì)正交試驗(yàn)表,通過(guò)正交試驗(yàn),找出相對(duì)優(yōu)化的工藝參數(shù)。5最佳工藝條件的確定按推算出的最優(yōu)工藝組合做了一組驗(yàn)證性平行性試驗(yàn),結(jié)果見表7。在該條件下香菇多糖平均得率為:10.99%,明顯高于正交試驗(yàn)組中的最高值9.98。因此香菇多糖沉降的最佳工藝條件為:水料比為1000倍、沉降劑用量百分比為15%、反應(yīng)溫度為41℃、pH為11。平行性試驗(yàn)制成的產(chǎn)品經(jīng)中國(guó)藥科大學(xué)生物工程學(xué)院進(jìn)行結(jié)構(gòu)確證,符合文獻(xiàn)報(bào)道,各項(xiàng)檢測(cè)均符合香菇多糖國(guó)家藥品標(biāo)準(zhǔn)。6最佳工藝條件的確定各因素對(duì)多糖得率影響的主次順序依次為:pH>沉降劑與原料比>料水比>反應(yīng)溫度,其中pH對(duì)多糖得率影響最大。由表可知:A2B2C3D2為香菇多糖沉降反應(yīng)的最佳工藝條件,