鹽酸滴定法測(cè)定鐵棒錘藥材中總生物堿含量

鹽酸滴定法測(cè)定鐵棒錘藥材中總生物堿含量

鐵錘是毛科植物的鐵錘。它是毛科植物的干燥子根。鐵棒錘AconitumpendulumBusch主產(chǎn)于西藏、云南西北部,四川西部,青海、甘肅南部,陜西南部及河南西部等地。伏毛鐵棒錘AconitumflavumHand.-Mazz.主產(chǎn)于四川西北部,西藏北部,陜西、青海、甘肅、寧夏南部,內(nèi)蒙古南部等地。鐵棒錘具有活血化瘀,止痛消腫的功效。用于跌打損傷、風(fēng)濕關(guān)節(jié)痛、牙痛、食積腫痛、神經(jīng)、凍瘡等。據(jù)有關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道,鐵棒錘中主要含生物堿,包括烏頭堿(Aconitine)、去氧烏頭堿(Deoxyaconitine),3-乙酰烏頭堿(3-Acetylaconitine),納派林堿(Napelline),伏烏堿(Flavaconition)等。其總生物堿及烏頭堿,3-乙酰烏頭堿均有較強(qiáng)的消炎、鎮(zhèn)痛和局部麻醉作用,為其主要有效成分,同時(shí)其總堿亦有較強(qiáng)的毒性。本文建立酸堿滴定法測(cè)定鐵棒錘中總生物堿含量,取得滿意測(cè)定結(jié)果,可為鐵棒錘藥材的質(zhì)量控制和臨床用藥提供可行依據(jù)。1藥品、試劑與試藥超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司,型號(hào):KQ-100型),分析天平(北京賽多利斯天平有限公司,型號(hào):BS210S,d=0.1mg),水浴鍋(江蘇醫(yī)療儀器廠,型號(hào):HH-S)、移液管(天津玻璃儀器廠,20ml)、滴定管(北京玻璃儀器廠,50ml)。所用試劑與試藥均為分析純,蒸餾水自制,烏頭堿購(gòu)自于中國(guó)藥品生物制品檢定所(批號(hào):0720-9807)。硫酸及氫氧化鈉滴定液的配制及標(biāo)定按《中國(guó)藥典》2000年級(jí)一部附錄XVF硫酸滴定液(0.01mol/L)及氫氧化鈉滴定液(0.01mol/L)配制及標(biāo)定方法進(jìn)行。經(jīng)標(biāo)定所用硫酸滴定液濃度為0.0137mol/L,氫氧化鈉滴定液濃度為0.0109mol/L。2方法和結(jié)果2.1消耗堿液體積測(cè)定取本品細(xì)粉5份,每份約10g,精密稱定,分別置250ml錐形瓶中,加入不同的溶劑50ml,再各加入氨試液6ml,搖勻,放置過(guò)夜,過(guò)濾,以20ml溶劑洗滌殘?jiān)盀V器,濾液水浴蒸干,殘?jiān)右掖?ml使溶解,再精密加入15ml硫酸滴定液及15ml水,搖勻,加2滴甲基紅指標(biāo)液,以NaOH滴定液滴定,測(cè)定其消耗堿液體積,計(jì)算含量,結(jié)果見(jiàn)表1。以上結(jié)果表明:以乙醚:氯仿(3:1)混合溶劑提取率較高,故確定提取溶媒為乙醚:氯仿(3:1)。2.2消耗堿液體積測(cè)定取本品細(xì)粉3份,每份10g,精密稱定,分別置250ml錐形瓶中,加入乙醚:氯仿(3:1)混合溶劑(下同)50ml及氨試液6ml,搖勻,放置過(guò)夜,過(guò)濾,殘?jiān)右颐?氯仿混合溶劑50ml,以不同的方法提取1小時(shí),放涼,過(guò)濾,合并兩次濾液,20ml乙醚:氯仿混合溶劑洗滌殘?jiān)盀V器,洗液并入濾液中,蒸干,殘?jiān)?ml乙醇使溶解,再精密加入15ml硫酸滴定液及15ml水,加2滴甲基紅指標(biāo)液,以NaOH滴定液滴定,測(cè)定其消耗堿液體積,計(jì)算含量,結(jié)果見(jiàn)表2。結(jié)果表明:振搖法提取率最高,故確定提取方法為以乙醚:氯仿(3:1)混合溶劑50ml及氨試液6,浸泡過(guò)夜,再以乙醚氯仿混合液50ml振搖提取1h。2.3提取堿的測(cè)定取本品細(xì)粉3份,每份約10.0g,精密稱定,以乙醚:氯仿(3:1)混合溶劑50ml及氨試液6ml,浸泡過(guò)夜,過(guò)濾,,殘?jiān)右颐崖确禄旌弦赫駬u提取1小時(shí)。過(guò)濾,殘?jiān)右颐?氯仿(3:1)混合溶劑洗劑5次,每次15ml,合并濾液及洗液,水浴,蒸干,殘?jiān)?ml乙醇使溶解,精密加入15ml硫酸滴定液及15ml水,搖勻,加2滴甲基紅指標(biāo)液,以NaOH滴定液滴定,測(cè)定其消耗堿液體積,計(jì)算含量,結(jié)果見(jiàn)表3。結(jié)果表明,洗滌3次,總生物堿已提取完全,因此,選擇洗滌次數(shù)為4次,以保證生物堿提取完全。2.4干擾實(shí)驗(yàn)結(jié)果精密量取乙醇5ml,置250ml錐形瓶中,精密加入15ml硫酸滴定液,15ml水與甲基紅指標(biāo)液3滴,用氫氧化鈉滴定滴至黃色,結(jié)果消耗堿液37.75ml,表明該溶劑系統(tǒng)未對(duì)測(cè)定結(jié)果產(chǎn)生干擾。2.5穩(wěn)定性試驗(yàn)取同一批號(hào)樣品約50g,按2.9項(xiàng)下步驟制備供試品溶液,精密量取5份,每份60ml,分別在0、2、4、6、8h進(jìn)行滴定,測(cè)定其消耗堿液體積,并計(jì)算含量,RSD=0.823%,表明供試品溶液在8h內(nèi)穩(wěn)定性良好。2.6重復(fù)試驗(yàn)取同一批號(hào)樣品5份,按2.9項(xiàng)下步驟操作測(cè)定,計(jì)算含量,結(jié)果總生物堿平均含量0.776%,RSD=0.733%。2.7方法精密度試驗(yàn)取已測(cè)定含量的同一批號(hào)樣品5份,按2.9項(xiàng)下步驟操作測(cè)定,計(jì)算含量,結(jié)果總生物堿含量RSD=0.484%,表明該方法精密度良好。2.8加標(biāo)回收率試驗(yàn)采用加樣回收法,取已測(cè)定含量的同一批號(hào)樣6份,每份約0.6g,精密稱定,分別精密加入烏頭堿對(duì)照品,按2.9項(xiàng)下步驟操作測(cè)定,計(jì)算回收率,結(jié)果見(jiàn)表4。2.9消耗堿液體積測(cè)定5批樣品各取1份,每份約10g,精密稱定,分別置250ml錐形瓶中,加入乙醚:氯仿(3:1,下同)混合溶劑50ml及氨試液6ml,搖勻,放置過(guò)夜,過(guò)濾,殘?jiān)右颐崖确禄旌先軇?0ml,振搖提取1h,過(guò)濾,再以乙醚氯仿混合溶劑洗滌4次,每次15ml,合并濾液及洗液,蒸干,殘?jiān)?ml乙醇使溶解,精密加入15ml硫酸滴定液及15ml水,搖勻,加2滴甲基紅指標(biāo)液,以NaOH滴定液滴定,測(cè)定消耗堿液體積,并計(jì)算含量,結(jié)果見(jiàn)表5。3總氧化物用量的確定3.1鐵棒錘中游離生物堿易溶于乙醚,但乙醚的揮發(fā)性較大,在提取中易散