生長(zhǎng)年限及環(huán)境因素對(duì)高良姜中高良姜素動(dòng)態(tài)積累的影響

生長(zhǎng)年限及環(huán)境因素對(duì)高良姜中高良姜素動(dòng)態(tài)積累的影響

好姜具有辛性熱、胃止吐、祛寒止痛的功效，針對(duì)寒痛、胃寒嘔吐、惡心嘔吐等癥狀進(jìn)行臨床應(yīng)用。現(xiàn)代研究表明,高良姜具有抗氧化、降血糖、抗促癌、促進(jìn)滲透性、抗?jié)儭⒅箛I抗腹瀉、鎮(zhèn)痛、抗炎、抗凝血、抗血栓形成等獨(dú)特的藥理作用。高良姜素為高良姜主要活性成分之一,也是2010年版《中國(guó)藥典》一部高良姜的品質(zhì)評(píng)價(jià)指標(biāo)性成分。近年來(lái),由于高良姜野生資源的匱乏,市售的藥材中主要以人工栽培品為主。其中,產(chǎn)于廣東省湛江市徐聞縣的藥材在市場(chǎng)中占很大比重。此外,海南省陵水、儋州等地有少量栽培。高良姜的品質(zhì)與環(huán)境、地理因素及采收時(shí)間有很大的關(guān)系,如何協(xié)調(diào)這幾種因素,規(guī)范高良姜的種植,是確保高良姜品質(zhì)的關(guān)鍵所在。本實(shí)驗(yàn)以高良姜素的含量為指標(biāo),對(duì)不同產(chǎn)地、不同生長(zhǎng)年限及不同采收期的高良姜樣品進(jìn)行對(duì)比分析,探討生長(zhǎng)年限及環(huán)境因素對(duì)高良姜質(zhì)量的影響,以期為高良姜的優(yōu)良品種選育及規(guī)范化種植提供理論依據(jù)。1高良姜alperar清洗儀測(cè)定組試驗(yàn)所用藥材于2013年2,3月(初春)及2013年8,9月(夏末秋初)分別采集于廣東省湛江市徐聞縣各鄉(xiāng)鎮(zhèn)及海南省臨高、儋州、陵水等地,經(jīng)廣東藥學(xué)院姬生國(guó)教授鑒定為姜科高良姜AlpiniaofficinarumHance的根莖。藥材洗凈,切段,于40℃烘箱中干燥,粉碎過(guò)60目篩,備用。1120型全自動(dòng)高效液相色譜儀(日本島津公司),BIY211b型電子天平(日本島津公司),KQ-500DE型超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司),試劑除流動(dòng)相為色譜純外其余均為分析純。高良姜素對(duì)照品(批號(hào)MUST-12102909,純度≥98%),購(gòu)于成都曼思特生物科技有限公司。2姜素高劑量測(cè)定2.1流動(dòng)相甲醇-0.2%磷酸ODS-C18色譜柱(4.6mm×250mm,5μm,日本島津公司),流動(dòng)相甲醇-0.2%磷酸(55∶45),流速1mL·min-1,柱溫30℃,檢測(cè)波長(zhǎng)266nm,進(jìn)樣量5μL。2.2對(duì)照品溶液的制備精密稱取高良姜素對(duì)照品4.5mg,置于10mL量瓶中,加甲醇溶解并稀釋至刻度,搖勻,制成每1mL含高良姜素0.45mg的對(duì)照品溶液。2.3甲醇法制備續(xù)濾液取樣品0.2g,精密稱定,置具塞錐形瓶中,精密加入甲醇50mL,密塞,稱定質(zhì)量,加熱回流1h,放冷,再稱定質(zhì)量,用甲醇補(bǔ)足減失的質(zhì)量,搖勻,過(guò)0.45μm微孔濾膜,取續(xù)濾液,即得。2.4重量測(cè)定精密吸取上述溶液5μL,按2.1項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定,記錄60min色譜圖。對(duì)照品及樣品HPLC見圖1。2.5方法研究2.5.1y高良姜素用量的測(cè)定精密吸取2.2項(xiàng)下高良姜素對(duì)照品溶液2.0,1.0,1.0,2.0,1.0,1.0mL,分別置5,5,10,25,25,50mL量瓶中,加甲醇定容至刻度,搖勻,0.45μm微孔濾膜濾過(guò)。按2.4項(xiàng)下方法進(jìn)樣測(cè)定,以對(duì)照品峰面積為縱坐標(biāo)(Y),質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)(X),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,得回歸方程Y高良姜素=2×107X-16707(r=0.9999)。結(jié)果表明,高良姜素在質(zhì)量濃度為0.009~0.45g·L-1與峰面積呈良好的線性關(guān)系。2.5.2在精密度試驗(yàn)中，取對(duì)照溶液高良姜素，按2.4項(xiàng)下方法連續(xù)進(jìn)樣測(cè)定6次,得高良姜素RSD0.13%,結(jié)果表明儀器精密度良好。2.5.3高良姜素含量rsd的測(cè)定精密稱定樣品約0.2g,按2.3項(xiàng)下方法制成供試品溶液,按2.4項(xiàng)下方法測(cè)定,于0,3,6,9,12,24h分別進(jìn)樣測(cè)定,計(jì)算得高良姜素含量RSD1.0%,結(jié)果表明供試品溶液在24h內(nèi)穩(wěn)定。2.5.4高良姜素含量測(cè)定取同一批樣品6份,每份0.2g,精密稱定,分別按2.3項(xiàng)下方法制備成供試品溶液,按2.4項(xiàng)下方法進(jìn)樣測(cè)定,計(jì)算得高良姜素含量,RSD0.11%。結(jié)果表明該方法的重復(fù)性良好。2.5.5加高良姜素對(duì)照品溶液制備精密稱取6份已知含量的樣品(高良姜素質(zhì)量分?jǐn)?shù)為15.45mg·g-1,)各0.1g。分別精密加入1.55mg高良姜素對(duì)照品,按2.3項(xiàng)下方法制備供試品溶液,按2.4項(xiàng)下方法進(jìn)樣測(cè)定,計(jì)算回收率。結(jié)果高良姜素平均回收率為99.69%,RSD0.49%。見表1。3結(jié)果與分析3.1高良姜素的測(cè)定夏末秋初采集廣東省及海南省各地產(chǎn)的3年生栽培高良姜,對(duì)高良姜素進(jìn)行含量測(cè)定,結(jié)果見表2。經(jīng)SPSS19.0對(duì)結(jié)果進(jìn)行多重比較,海南栽培高良姜中高良姜素含量總體顯著高于廣東(P<0.05)。3.2不同年份、不同生長(zhǎng)時(shí)期、不同年齡、高良姜中高良姜素含量的變化在夏末秋初采集廣東省徐聞縣龍?zhí)伶?zhèn)的不同栽培年限的樣品,對(duì)高良姜素的含量進(jìn)行測(cè)定,結(jié)果栽培2~5年高良姜中高良姜素的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.89%,1.09%,1.27%,1.10%。經(jīng)SPSS19.0對(duì)結(jié)果進(jìn)行LSD-t檢驗(yàn)得知,2年生、3年生及4年生栽培高良姜中高良姜素含量具有顯著差異(P<0.05),并且2年生<3年生<4年生。而5年生栽培高良姜中高良姜素含量明顯高于2年生高良姜,卻低于4年生高良姜,與3年生高良姜差異不顯著。可見4年為高良姜最佳栽培周期。3.3樣品中高良姜素含量測(cè)定對(duì)分別在初春及夏末秋初采集于廣東省龍?zhí)伶?zhèn)栽培的4年生樣品中的高良姜素進(jìn)行含量測(cè)定,初春采集樣品平均含量為0.99%(n=5),夏末秋初采集樣品平均含量為1.27%(n=5),結(jié)果表明于夏末秋初采集的樣品中高良姜素的含量顯著高于初春采集的樣品。4生長(zhǎng)年限及環(huán)境因素對(duì)高良姜質(zhì)量的影響本實(shí)驗(yàn)以高良姜素的含量為指標(biāo),對(duì)不同產(chǎn)地、不同生長(zhǎng)年限及不同采收時(shí)間的高良姜樣品進(jìn)行對(duì)比分析,發(fā)現(xiàn)生長(zhǎng)年限及環(huán)境因素對(duì)高良姜質(zhì)量具有極大的影響。具體分析如下。4.1廣東徐聞的立地條件研究結(jié)果表明,海南采高良姜樣品中高良姜素的平均含量(1.54%)明顯高于廣東徐聞采集的樣品(1.14%)。分析原因可能是由于海南島屬熱帶季風(fēng)海洋性氣候,廣東徐聞屬北熱帶季風(fēng)濕潤(rùn)氣候,海南年均日照強(qiáng)度、降雨量均高于廣東徐聞。從生長(zhǎng)的土質(zhì)情況看,海南多為赤紅壤土質(zhì),廣東徐聞以磚紅壤土質(zhì)為主。赤紅壤富鋁化作用弱于磚紅壤,是紅壤和磚紅壤間的過(guò)渡性土壤,土質(zhì)中營(yíng)養(yǎng)及各種微量元素不同,是影響其化學(xué)成分積累的一個(gè)原因。4.2不同采收期對(duì)藥材質(zhì)量的影響研究發(fā)現(xiàn),不同年限的高良姜栽培品中的高良姜素的含量有顯著差異。其中,2年生樣品,3年生樣品及4年生樣品中高良姜素的含量呈遞增關(guān)系,而5年生樣品中高良姜素含量與3年生樣品相近。因此,我們認(rèn)為高良姜的采收期以4年為宜。但是在種植地了解,藥農(nóng)一般種植3年即采收,且當(dāng)藥材市場(chǎng)價(jià)格較低時(shí),可能會(huì)晚1~2年采收,造成藥材質(zhì)量的不同。根據(jù)研究結(jié)果,故認(rèn)為高良姜一般應(yīng)種植4年采收為宜。4.3適時(shí)采收,注意受季節(jié)的影響《中國(guó)藥典》2010年版一部高良姜項(xiàng)下規(guī)定,