大孔吸附樹脂在中藥分離純化中的應(yīng)用

大孔吸附樹脂在中藥分離純化中的應(yīng)用

1總結(jié)1.1中藥治療及保鮮大孔吸附樹脂是一種具有多孔三維結(jié)構(gòu)的大孔視網(wǎng)膜吸附劑。根據(jù)離子交換樹脂和其他吸附劑的應(yīng)用，研制了一種新的樹脂。在吸附分子之間的范德華力和氫鍵的基礎(chǔ)上，它依賴于表面的巨大比面。具有大的比表面積和類似活性炭顆粒的內(nèi)細(xì)孔結(jié)構(gòu),這些多孔特性使之從水溶液中有效地吸附有機(jī)化合物,且具選擇性吸附能力。目前,全球“回歸自然”的熱潮正在興起,人們?nèi)找嬷匾曁烊划a(chǎn)物的研究,越來(lái)越多的人采用中藥治療。國(guó)際中藥市場(chǎng)每年銷售額160億美元,其中日本和韓國(guó)分別占80%和10%,而我國(guó)作為中藥發(fā)源地和中藥材大國(guó),在國(guó)際市場(chǎng)上僅占3%,其主要原因是我國(guó)中藥開發(fā)投資不足,產(chǎn)品質(zhì)量未能與國(guó)際接軌。目前我國(guó)中藥產(chǎn)品多以三、四類藥物為主,劑型落后,品種少,遠(yuǎn)落后于西藥制劑。隨著科學(xué)技術(shù)的高速發(fā)展和中藥現(xiàn)代化發(fā)展戰(zhàn)略的提出,要求研制出新型中藥,這對(duì)中藥分離、純化提出了很高的要求。傳統(tǒng)的水提醇沉等方法已遠(yuǎn)遠(yuǎn)滿足不了要求,不能適用于工業(yè)大生產(chǎn)。新的分離純化方法中以大孔吸附樹脂最受中藥開發(fā)者青睞,它具有效果顯著、工藝簡(jiǎn)單、再生方便、生產(chǎn)成本低等優(yōu)點(diǎn),可用于中藥及天然藥物中生物堿、黃酮、萜類、皂苷、內(nèi)酯、蒽醌、醌類、有機(jī)酸、肽、蛋白質(zhì)及多糖類等活性成分的富集、分離、純化,它們的吸附性能、吸附條件參數(shù)因化合物的理化性質(zhì)不同而不同。應(yīng)用大孔吸附樹脂分離純化中藥有效成分的類型列于表1中。1.1.1大孔吸附樹脂技術(shù)的優(yōu)缺點(diǎn)(1)原生藥種,僅以溶液和水煮法聚氧法制備經(jīng)大孔樹脂吸附處理后得到的精制物可使藥效成分高度富集,雜質(zhì)少,僅為原生藥的2~5%,水煮法為20~30%,醇沉法為15%。可見,劑量縮小雜質(zhì)少了,有利于制成現(xiàn)代劑型的中藥,便于質(zhì)量控制。(2)中藥生產(chǎn)及貯藏期間存在的問(wèn)題傳統(tǒng)工藝制備的中成藥大部分有較強(qiáng)的吸潮性,是中藥生產(chǎn)及貯藏中長(zhǎng)期存在的難題。經(jīng)大孔樹脂吸附處理后,可有效地去除水煎液中大量的糖類、無(wú)機(jī)鹽、黏液質(zhì)等吸潮成分,可增強(qiáng)產(chǎn)品的穩(wěn)定性。(3)約包裝,降低成本免去了靜置沉淀、濃縮等耗時(shí)多的工序,節(jié)約包裝,降低成本,為中藥進(jìn)入國(guó)際市場(chǎng)創(chuàng)造了條件。大孔吸附樹脂技術(shù)的缺點(diǎn)是樹脂價(jià)格昂貴、吸附效果受流速和溶質(zhì)濃度影響。1.1.2分離條件的確定了解大孔吸附樹脂的分離原理、特性及結(jié)構(gòu)的基礎(chǔ)上,必須根據(jù)所分離物的結(jié)構(gòu)、特征來(lái)確定分離條件,才能達(dá)到較好效果。要達(dá)到理想的分離效果,需考慮6點(diǎn)影響因素。(1)黃酮含量的優(yōu)化大孔樹脂的極性和空間結(jié)構(gòu)(孔徑、比表面積、孔容)是影響吸附性能的重要因素。根據(jù)類似物吸附類似物的原理,化合物體積越大,其吸附力越強(qiáng)。麻秀萍等研究了10種大孔吸附樹脂對(duì)銀杏黃酮的吸附性能及動(dòng)力學(xué)過(guò)程,結(jié)果表明,銀杏黃酮分子量為760,通過(guò)篩選,得出弱極性樹脂AB-8效果最好。楊樺等探討大孔吸附樹脂提取分離川草烏中總生物堿的工藝,認(rèn)為弱極性或非極性樹脂效果較好。(2)銀杏總黃酮的吸附被吸附化合物的分子量大小和極性的強(qiáng)弱直接影響到吸附效果。極性大的分子適于在中極性樹脂上分離,極性小的分子適于在非極性樹脂上分離。如果樹脂和化合物間能發(fā)生氫鍵,吸附作用也將加強(qiáng)。麻秀萍等用極性的S-8、弱極性的AB-8和非極性的H107吸附分離銀杏總黃酮時(shí),S-8和AB-8的吸附量很大,分別達(dá)126.7mg/g、102.8mg/g,而H107只有47.7mg/g。這是由于銀杏黃酮具有多酚和糖苷鏈,具有一定的極性和親水性,有利于弱極性和極性樹脂的吸附。有機(jī)物通過(guò)樹脂的網(wǎng)孔擴(kuò)散到樹脂網(wǎng)孔內(nèi)表面而被吸附,因此吸附能力與分子體積密切相關(guān),大分子化合物選擇較大孔徑的樹脂。例如,銀杏總黃酮分子量為760,分子體積較大,用孔徑較大的S-8(孔徑為28.0~30.0nm)進(jìn)行吸附,吸附量為126.7mg/g,而使用孔徑較小的D4006時(shí),吸附量?jī)H為19.0mg/g。(3)無(wú)機(jī)鹽對(duì)人參皂苷的吸附①無(wú)機(jī)鹽的影響通常一種成分在某溶劑中溶解度大,則在該溶劑中,樹脂對(duì)該物質(zhì)的吸附量就小,反之亦然。故在上樣溶液中加入適量無(wú)機(jī)鹽(如氯化鈉、硫酸鈉、硫酸銨等)可使樹脂的吸附量加大。如用D101吸附分離人參皂苷時(shí),若提取液中加入3%的無(wú)機(jī)鹽,不僅能加快對(duì)人參皂苷吸附速率,且吸附量明顯增大,這是由于加入無(wú)機(jī)鹽降低了人參皂苷在水中溶解度,使其更容易被樹脂吸附。②溶劑pH值酸性化合物在酸溶液中吸附,而堿性化合物在堿溶液中吸附較為合適,中性化合物在近中性溶液下被吸附。例如,將黃岑素、葛根總黃酮的堿水溶液在D型樹脂上進(jìn)行吸附,其吸附作用很弱,而在中性及酸性下,樹脂對(duì)其吸附量增大。用D140型樹脂吸附分離銀杏總黃酮時(shí),隨著pH值的增加,吸附量增加,但到pH4.0以后,吸附量則隨著pH值的增加而減小,最適pH值為3~4。(4)綠茶浸提液中茶多酚的吸附大孔吸附樹脂吸附量一般與上樣溶液濃度成反比,通常以較低濃度吸附較為有利,濃度偏高,則吸附量會(huì)顯著減小。用NKA-9對(duì)綠茶浸提液中的茶多酚吸附分離時(shí),隨上樣溶液中茶多酚濃度的增加(分別為10mg/mL,15mg/mL,20mg/mL)吸附量逐漸降低(分別為30.3mg/mL,29.4mg/mL,26.5mg/mL)。故上柱之前應(yīng)對(duì)樣品濃度進(jìn)行稀釋。(5)銀杏黃酮溶液的吸附流速與樹脂的孔徑、孔容、粒度、吸附物質(zhì)分子結(jié)構(gòu)及濃度、操作溫度等因素相關(guān)。吸附流速過(guò)大,樹脂的吸附量就會(huì)下降。例如,對(duì)同一濃度的銀杏黃酮溶液,用D140進(jìn)行吸附,吸附流速分別為1BV/h、2BV/h、3BV/h(BV柱床體積),其吸附率分別為56.14%、53.79%、51.97%。但流速過(guò)小,吸附時(shí)間就會(huì)增加。在實(shí)際應(yīng)用時(shí),既要使樹脂的吸附效果好,又要保證較高的工作效率。(6)洗脫溶劑與洗脫速率①洗脫劑種類常見的洗脫劑有甲醇、乙醇、丙酮、乙酸乙酯等,在實(shí)際工作中,乙醇應(yīng)用較多,可根據(jù)吸附量強(qiáng)弱選用不同的洗脫劑及濃度。對(duì)于非極性樹脂,洗脫劑極性越小,其洗脫能力越強(qiáng);對(duì)于中極性及極性樹脂,則用極性較大的洗脫劑為宜。例如,用不同濃度的乙醇對(duì)芍藥苷進(jìn)行梯度洗脫,發(fā)現(xiàn)10%、20%乙醇洗脫液中均含有芍藥苷,而濃度在30%以上的乙醇洗脫液中未檢出,故選用20%乙醇洗脫液即可將芍藥苷全部洗脫下來(lái)。再如,唐第光等探討了大孔樹脂提取三七皂苷,認(rèn)為水能洗除蔗糖,50%乙醇則能溶解三七皂苷,而70%乙醇洗脫液中幾乎不含任何加入物,90%乙醇則較好地洗除β-谷甾醇。②洗脫劑的pH值洗脫劑的pH值對(duì)其洗脫能力有顯著影響。通過(guò)改變洗脫劑pH值,可使吸附物形成較強(qiáng)的離子化合物,很容易被洗脫下來(lái),從而提高洗脫率。例如,黃連生物堿若用50%、70%、100%甲醇洗脫,小檗堿的回收率低,為24.31~83.46%,若先用氨水調(diào)pH12以上,加到D101柱上,用pH11水洗,再用含0.5%H2SO4的50%甲醇洗脫,則小檗堿的回收率可達(dá)100%。③洗脫流速一般控制在0.5~5mL/min為宜。例如,用50%乙醇洗脫毛冬青總皂苷時(shí),流速為1.5mL/min;用50%乙醇洗脫川烏總生物堿時(shí),流速為3mL/min。隨著中藥現(xiàn)代化的不斷深入和中藥新藥研發(fā)的發(fā)展,大孔吸附樹脂已廣泛應(yīng)用于中藥及天然藥物提取液中有效成分的分離和純化。大孔吸附樹脂是一種有機(jī)高聚物吸附劑,具有選擇性吸附有機(jī)化合物的能力,有吸附容量大,解吸容易,再生簡(jiǎn)便等特點(diǎn),現(xiàn)已被廣泛應(yīng)用于天然產(chǎn)物的分離和富集。用樹脂分離純化中藥及中藥復(fù)方已成為一種趨勢(shì),但應(yīng)明確純化的目的,充分考慮采用樹脂純化的必要性和方法的合理性,尤其是復(fù)方混合提取的上柱純化。一般情況下,僅用一個(gè)指標(biāo)、一種洗脫溶劑是不容易達(dá)到純化效果的。應(yīng)根據(jù)處方組成、復(fù)方成分,盡可能以每味藥的主要有效成分為指標(biāo)監(jiān)控各步純化分離過(guò)程。有時(shí),為保證純化前后藥物的等效性,還應(yīng)配合主要的藥效學(xué)對(duì)比試驗(yàn)進(jìn)行控制和評(píng)價(jià)。1.2d-108樹脂預(yù)處理法市售商品樹脂均為化工樹脂,含有未聚合的單體、致孔劑、分散劑和交聯(lián)劑等有機(jī)溶劑,如苯、甲苯、二甲苯、苯乙烯、二乙烯苯、二乙苯及一些直鏈烷烴等,都有不同程度的毒性,不僅造成藥品的不安全,還影響樹脂的吸附性能。用前必須預(yù)處理,除去樹脂中有機(jī)殘留物。國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局(SFDA)已規(guī)定樹脂有機(jī)殘留物的限量檢查標(biāo)準(zhǔn)。樹脂預(yù)處理方法有回流法、滲漉法和水蒸汽蒸餾法等,所采用的溶劑主要有乙醇、甲醇、異丙醇及稀鹽酸、稀氫氧化鈉溶液等。目前預(yù)處理方法大多采用滲漉法,即將樹脂裝柱,加有機(jī)溶劑浸泡,洗脫,再浸泡,再洗脫,加2%鹽酸溶液浸泡,洗脫,水洗至pH值中性,加2%氫氧化鈉溶液浸泡,洗脫,水洗至pH值中性。該方法溶劑用量為10~20BV,預(yù)處理周期為3~5d,不僅成本高、時(shí)間長(zhǎng)、效果差,且環(huán)境污染也大。D-101是以苯乙烯為結(jié)構(gòu)骨架,以二乙烯苯為交聯(lián)劑聚合而成,是目前使用最廣泛的樹脂之一。為降低D-101預(yù)處理成本,提高效率,賈存勤等對(duì)D-101預(yù)處理方法進(jìn)行了系統(tǒng)研究,對(duì)有機(jī)殘留物進(jìn)行了檢測(cè),并用紫外可見分光光度法建立了快速監(jiān)測(cè)方法。2大孔吸附樹脂在生物分離和提取中的應(yīng)用2.1大孔吸附樹脂對(duì)天麻氧化酶的分離純化生物堿包括川烏,草烏生物堿,黃柏總生物堿,黃連中小檗堿,麻黃堿,川芎總生物堿,氧化苦參堿等,這里重點(diǎn)介紹大孔吸附樹脂對(duì)麻黃生物堿的分離純化。2.2大孔吸樹脂法分離純度麻黃總堿活性物質(zhì)2.2.1及其提取方法麻黃為麻黃科植物草麻黃EphedrasinicaAtapf的地上部分。具有發(fā)汗、解熱、鎮(zhèn)咳、治喘、利水功效,臨床上主要用于治療風(fēng)寒感冒、惡寒發(fā)熱、急性腎炎、支氣管炎等癥。黃連根莖含多種生物堿,其主要有效成分為L(zhǎng)-麻黃堿(L-ephedrine);其次為D-偽麻黃堿(D-pseudoephedrine)?，F(xiàn)代藥理學(xué)試驗(yàn)表明,麻黃堿對(duì)支氣管平滑肌有松弛作用,其總生物堿具有明顯的平喘、發(fā)汗、利水等作用。麻黃堿提取方法有多種,如水蒸汽蒸餾法、水浸煮-甲苯提取法,前者蒸餾時(shí)部分麻黃堿會(huì)分解損失;后者設(shè)備簡(jiǎn)便得率高,但要使用甲苯等有毒溶劑;以大孔吸附樹脂純化富集的效果明顯優(yōu)于上述方法。2.2.2大孔吸附樹脂，純度提取麻黃堿2.2.3樹脂-藥材比值對(duì)麻黃堿回收利用的影響(1)麻黃醇提液的pH值約為5,在弱酸性下,麻黃堿在樹脂上吸附力較弱,極易穿透樹脂床,造成麻黃堿的泄漏。pH值越高,越有利于吸附。因此,上樣前需調(diào)最佳吸附pH值至11.0,增加麻黃堿的吸附,減少泄漏。吸附要有一個(gè)過(guò)程,上柱流量不能過(guò)快,以4BV/h體積流量,即可保證麻黃堿較高的保留率。(2)用水洗滌飽和樹脂時(shí),為清洗雜質(zhì)不至于造成麻黃堿的過(guò)多流失,清洗液流量不宜太快,以2BV/h為宜。樹脂-藥材比值不宜過(guò)小,一般以4:1。選用0.08mol/LHCl溶液作為D151、XAD-7大孔樹脂的洗脫劑,流速控制在4BV/h,可達(dá)到較好的洗脫效果。(3)如采用XAD-4大孔樹脂吸附,則宜用0.02mol/LHCl與甲醇1:1混合液作為洗脫劑,3種樹脂回收率均在90%以上,純度在80%以上。本法一次吸附提純倍數(shù)為15~19倍。3孔內(nèi)吸附樹脂黃酮分離純度的應(yīng)用3.1大孔吸附樹脂對(duì)根總黃酮的分離純化黃酮類包括紅花黃色素,黃芩總黃酮,葛根總黃酮,腫節(jié)風(fēng)黃酮,槲皮苷黃酮,降香總黃酮,菟絲子黃酮等,這里重點(diǎn)介紹大孔吸附樹脂對(duì)葛根總黃酮的分離純化。3.2采用大孔吸樹脂法分離葛根總黃酮3.2.1葛根素的藥代動(dòng)力學(xué)葛根為豆科植物野葛PuerariathomsoniiBenth的根,為常用中藥,具有調(diào)節(jié)血壓、增加冠脈血流量、改善腦循環(huán)、抑制血小板聚集、抗氧化自由基等作用。臨床應(yīng)用于冠心病、腦血栓均取得了明顯療效。葛根主要有效成分為大豆素、大豆苷、葛根素等總黃酮,由于葛根粉中葛根素的含量遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于野葛根,從而大大限制了葛根粉的藥用。目前有利用野葛根分離得到葛根素的報(bào)道,但大多采用酸水解法或溶劑萃取法,前者雖可得到高含量葛根素,卻破壞了其他藥效成分。有報(bào)道采用大孔吸附樹脂,僅通過(guò)“吸附-脫附”一步的簡(jiǎn)單工藝即可從葛根粉中得到較高含量的葛根素。3.2.2采用大孔吸附樹脂法分離一般葛根黃酮3.2.3中提取出白砂糖糖基的活性(1)將葛根藥材進(jìn)行預(yù)處理,50%乙醇回流提取2次(2h,1.5h),制成葛根總黃酮醇提液,用水稀釋后上柱;以1BV/h上柱流速,LSA-10大孔吸附樹脂能有效地吸附葛根總黃酮。(2)葛根素的分子結(jié)構(gòu)有一個(gè)極性糖基和一個(gè)非極性黃酮母核,呈弱酸性,同時(shí)又具有酚羥基結(jié)構(gòu),可作為良好的氫鍵供體。中極性吸附樹脂LSA-10具有較低的比表面積,但帶有孤電子對(duì)的羰基官能團(tuán),羰基是良好的氫鍵受體,能與葛根素形成氫鍵作用,從而大大提高了吸附選擇性。(3)上柱量過(guò)少,使周期過(guò)長(zhǎng),樹脂與藥液的比為1:4;飽和樹脂先以2BV/h水洗滌,除去多糖類等雜質(zhì),后以4BV50%乙醇洗脫,控制流速0.5BV/h,收集乙醇洗脫液,減壓濃縮后即得葛根總黃酮干膏。(4)用8BV的50%乙醇可將吸附在樹脂上的樣品洗脫下來(lái),經(jīng)LSA-10純化后葛根總黃酮得以富集并提高了純度,吸附樹脂法分離葛根素收率高、成本低、操作簡(jiǎn)便、易于工業(yè)化生產(chǎn)。4孔內(nèi)吸附樹脂在類分離中的應(yīng)用4.1大孔吸附樹脂對(duì)北藥體的分離純化萜類包括北五味子配糖體,京尼平苷,京尼平苷酸,杜仲中松脂瓊二葡萄糖苷,秦艽中龍膽苦苷等,這里重點(diǎn)介紹大孔吸附樹脂對(duì)北五味子中的配糖體的分離純化。4.2大孔吸樹脂法分離了北五味子中的糖合物4.2.1質(zhì)、酯類、活性成分及提取物北五味子[Schisandrachinensis(Tarez.)Baill.]主產(chǎn)于我國(guó)東北,故又稱“遼五味”。藥用干燥成熟果實(shí),其功效為收斂固澀、益氣生津、補(bǔ)腎寧心,用于肺喘虛咳、心悸失眠諸病。北五味子的化學(xué)成分研究比較深入,其組分中含有木脂素、三萜、倍半萜(倍半蒈烯sesquiearene、β-花柏烯及衣蘭烯)、有機(jī)酸(檸檬酸12%、蘋果酸10%及少量酒石酸)、揮發(fā)油3%及多糖等成分。北五味子的水提醇沉提取物是復(fù)方生脈注射液的組成部分之一。中科院昆明所與中科院上海藥物所王逸平教授合作的藥理篩選表明,北五味子的水提醇沉提取物在心血管方面顯示較強(qiáng)的活性,在深入研究過(guò)程中,又從其果實(shí)的水提醇沉提取物中用大孔吸附樹脂分離到5個(gè)配糖體。4.2.2大孔吸樹脂法分離出北五味子果實(shí)的水提取物提取過(guò)程4.2.3洗脫、濃縮法(1)D-101大孔樹脂能有效地吸附北五味子干果實(shí)的水提醇沉提取物,飽和樹脂先用水洗滌,后用甲醇洗脫,收集甲醇洗脫液,濃縮后上硅膠柱層析,以氯仿:甲醇:水(7:3:0.5)進(jìn)行洗脫,收集層析洗脫液。(2)將第3、4和5流分,再經(jīng)反復(fù)硅膠、RP-C18和SephadexLH-20反復(fù)柱層析,分離得到化合物I、II、III、IV、V等5個(gè)配糖體。5大孔吸附樹脂對(duì)肥皂和純度的分離5.1大孔吸附樹脂對(duì)三七皂苷的分離純化皂苷包括三七皂苷,人參總皂苷,麥冬總皂苷,紅景天苷,威靈仙總皂苷,蒺藜總皂苷,柴胡總皂苷等,這里重點(diǎn)介紹大孔吸附樹脂對(duì)三七皂苷的分離純化。5.2大孔吸樹脂分離純度為三七醇5.2.1改種成分的活性成分三七系五茄科植物三七PanaxnotoginsengB.F.H.Chen的干燥根,具有化瘀止血、活血定痛之功效,中醫(yī)臨床多用于冠心病、心絞痛的治療。主要含有皂苷、黃酮、甾醇、多糖等成分,其中三七皂苷是主要活性成分。三七含28種皂苷,以人參皂苷Rg1,Re,Rb1和三七皂苷R1的生理活性較為明確。隨著吸附分離技術(shù)的廣泛應(yīng)用,D101型大孔吸附樹脂純化三七皂苷的報(bào)道很多,但都局限于三七總皂苷的提取,不能反應(yīng)三七總皂苷的組成。歐來(lái)良等根據(jù)三七皂苷的結(jié)構(gòu)特征,選用強(qiáng)極性吸附樹脂ADS-2,以50%乙醇為洗脫劑,產(chǎn)品中有效成分含量為:人參皂苷Rg131.7%,Re5.40%,Rb15.79%,三七皂苷R129.7%,產(chǎn)率為7.75%,探索了一種高效、實(shí)用的分離純化三七皂苷的技術(shù),方法簡(jiǎn)單、可行,易于工業(yè)化生產(chǎn)。5.2.2大孔吸附樹脂abs-2分離37v污泥的過(guò)程5.2.3sd-2-愛氧法(1)三七粗粉預(yù)處理后,20倍量70%乙醇80℃回流提取2次(3h;2h),合并濾液,減壓回收乙醇,過(guò)濾制成三七澄清提取液,水稀釋后,以1.5BV/h吸附流速上柱;ADS-2大孔強(qiáng)極性吸附樹脂帶有少量可交換功能基,能有效地吸附三七中較大極性的達(dá)瑪烷型皂苷。(2)ADS-2與藥液比例為1:4;飽和樹脂先用水洗滌至中性,再用4BV的50%乙醇可將三七皂苷洗脫下來(lái),收集洗脫液,解吸峰非常集中,洗脫率達(dá)95%以上,減壓濃縮后即得白色三七皂苷產(chǎn)品。(3)經(jīng)ADS-2純化后,三七皂苷總固體物得以富集并大幅度提高了純度。該法具有產(chǎn)品色澤好,生產(chǎn)過(guò)程中不用毒性有機(jī)溶劑,對(duì)產(chǎn)品、環(huán)境無(wú)污染,利于工業(yè)化生產(chǎn)等優(yōu)勢(shì)。(4)利用HPLC對(duì)三七皂苷中人參皂苷Rg1,Re,Rb1和三七皂苷R1進(jìn)行了定量分析,有效成分含量分別為:人參皂苷Rg131.7%,Re5.40%,Rb15.79%,三七皂苷R129.7%。6孔內(nèi)吸附樹脂在去除和提取內(nèi)容的應(yīng)用6.1大孔吸附樹脂對(duì)銀杏酯、糖酯、白砂糖li的分離純化內(nèi)酯、蒽醌類包括銀杏內(nèi)酯和白果內(nèi)酯,倍半萜內(nèi)酯A、B,決明子蒽醌苷元,虎杖中白藜蘆醇等,這里重點(diǎn)介紹大孔吸附樹脂對(duì)銀杏內(nèi)酯和白果內(nèi)酯的分離純化。6.2用大孔吸附樹脂分離銀杏內(nèi)核和白術(shù)內(nèi)核6.2.1血小板聚集誘導(dǎo)劑銀杏內(nèi)酯是天然植物藥開發(fā)熱點(diǎn)之一。銀杏葉的主要活性成分,有銀杏內(nèi)酯(ginkgolide)A、B、C、J、M和白果內(nèi)酯(bilobalide),前者為二萜內(nèi)酯化合物,后者具有互相稠合在一起的4個(gè)五元環(huán),其中之一個(gè)五元環(huán)上連有天然產(chǎn)物中罕見的叔丁基,結(jié)構(gòu)見圖1。它們均為強(qiáng)血小板活化因子(platelet-activatingfactor,PAF)受體拮抗劑,血小板活化因子是由血小板和多種炎癥組織分泌產(chǎn)生的一種內(nèi)源性磷脂,是迄今最有效的血小板聚集誘導(dǎo)劑,目前被認(rèn)為是最有臨床應(yīng)用前景的天然血小板激活因子受體拮抗劑。其中尤以銀杏內(nèi)酯B的活性最強(qiáng),藥用價(jià)值最大,有望成為治療休克、燒傷、過(guò)敏性哮喘、中風(fēng)、移植排斥、血液透析等病癥的一類新藥,因而引起世界制藥工業(yè)界的極大興趣。從銀杏葉或銀杏浸膏中提取銀杏內(nèi)酯和白果內(nèi)酯的方法,采用溶劑萃取法和柱色譜法,已得到純度95%以上的銀杏內(nèi)酯A、B和白果內(nèi)酯的單一產(chǎn)品。即先用萃取法得到內(nèi)酯含量達(dá)80%以上,再采用柱色譜法,即得單一產(chǎn)品。但硅膠具有不可逆吸附性,造成了大量樣品的損失。大孔吸附樹脂具有成本低、效率高、穩(wěn)定性好、容易再生等特點(diǎn),有研究報(bào)道,選擇國(guó)產(chǎn)樹脂HPD-100、HPD-400、NKA-II、AB-8、LSA-10、BS-556種不同型號(hào)的大孔樹脂,對(duì)銀杏內(nèi)酯A、B和白果內(nèi)酯進(jìn)行分離,實(shí)踐證明,LSA-10、AB-8和HPD-1003種大孔樹脂可達(dá)到分離純化單一內(nèi)酯的目標(biāo)。6.2.2用大孔吸附樹脂分離銀杏和白芍的過(guò)程(2)hpd-100的制造工藝-26.2.3ab-8樹脂吸附na、nka-9、d4020、dm-133活性樹脂①銀杏浸膏經(jīng)預(yù)處理得到銀杏內(nèi)酯混合物(含銀杏內(nèi)酯A、B及白果內(nèi)酯,分別用GA、GB、BB表示)。其中GA、GB、BB的含量分別為44.2%、33.2%和16.2%,3種成分總含量為93.6%。用AB-8樹脂吸附,上柱液濃度4mg/mL,70%甲醇液吸附率最大。②韓金玉等比較了AB-8、NKA-9、D4020、ABD-4和DM-1305種大孔樹脂對(duì)銀杏內(nèi)酯和白果內(nèi)酯的吸附及解吸性能,結(jié)果表明,AB-8是較適宜的吸附劑,不僅吸附量較大,而且解吸率高于其它樹脂。③分別選用30%乙醇、無(wú)水乙醇、60%甲醇、無(wú)水甲醇和丙酮作為脫附劑對(duì)飽和樹脂進(jìn)行解吸,結(jié)果表明,以無(wú)水甲醇的脫附效果大大優(yōu)于其它脫附劑。(2)銀杏內(nèi)酯干膏①銀杏浸膏經(jīng)預(yù)處理得到銀杏內(nèi)酯混合物(含銀杏內(nèi)酯A、B、C及白果內(nèi)酯,分別用GA、GB、GC、BB表示)。其中GA、GB、GC、BB的含量分別為30%、15%、3%和20%。②仝燕等報(bào)道,HPD-100樹脂與生藥的最佳比例為1:1(mL/g);飽和樹脂先用水洗滌,再用10%、20%乙醇洗滌至近無(wú)色后,用4倍量60%乙醇可將銀杏內(nèi)酯洗脫下來(lái),收集洗脫液,減壓濃縮,60℃真空干燥3h后即得銀杏萜內(nèi)酯粗提物干膏。③銀杏萜內(nèi)酯粗提物經(jīng)含量測(cè)定,含白果內(nèi)酯5.7%、銀杏內(nèi)酯A4.5%、銀杏內(nèi)酯B2.1%、銀杏內(nèi)酯C2.9%,粗提物總內(nèi)酯為15%,同時(shí)含有35%銀杏黃酮。進(jìn)一步精制只需用很少量的乙酸乙酯萃取或乙醇水溶液重結(jié)晶,即可制得純度達(dá)95%以上的白果內(nèi)酯,銀杏內(nèi)酯A、B、C單體。7大孔吸附樹脂在有機(jī)酸、堿類分離中的應(yīng)用7.1大孔吸樹脂法