hbsag酶聯(lián)免疫吸附試劑盒二次利用可行性分析

hbsag酶聯(lián)免疫吸附試劑盒二次利用可行性分析

目前，采用酶聯(lián)免疫吸毒儀檢測(cè)乙發(fā)育醇酯表面活性劑的首選方法是許多實(shí)驗(yàn)室的首選方法，尤其是在健康體檢方面的大幅劑量。判斷結(jié)果時(shí),通常是用目測(cè)法。在有多余酶試劑的情況下,HBsAg酶聯(lián)免疫吸附試劑盒能否進(jìn)行二次利用?其準(zhǔn)確性、重復(fù)性如何?至今尚未見(jiàn)這方面的報(bào)道。我們針對(duì)此課題進(jìn)行了實(shí)驗(yàn),現(xiàn)報(bào)告如下。1材料和方法1.1陰性結(jié)果實(shí)驗(yàn)由英科新創(chuàng)(廈門(mén))科技有限公司生產(chǎn)。經(jīng)首次使用后(目測(cè)結(jié)果,未加終止液)挑選陰性結(jié)果的測(cè)試孔,用自來(lái)水洗4次,拍干水份,置冰箱保存?zhèn)溆?簡(jiǎn)稱(chēng)二次利用板)。1.2樣本來(lái)源363份HBsAg陽(yáng)性及159份HBsAg陰性的血清,由體檢人群中,隨機(jī)抽取。1.3樣品檢測(cè)及數(shù)據(jù)判斷按廠(chǎng)家提供的作用說(shuō)明書(shū)操作:加血清50μl于相應(yīng)測(cè)試孔中,分別在每孔中加入酶標(biāo)記抗體50μl,輕拍混勻,置37℃暗處25min,室溫平衡5min,在電腦洗板機(jī)中用洗滌液洗滌5次,完后扣干,每孔加底物A、B各50μl,輕拍混勻,置37℃15min。目測(cè)或加終止液50μl混勻,上機(jī)用酶標(biāo)分析儀讀數(shù),判斷結(jié)果。臨界值=陰性對(duì)照OD均值N×2.1;陰性對(duì)照OD均值大于0.1時(shí)應(yīng)重新試驗(yàn),小于0.05時(shí)以0.05計(jì)算。結(jié)果判斷:樣品OD值S/C.0≥1HBsAg陽(yáng)性;<1者為HBsAg陰性。1.4x-711酶指數(shù)分析儀上海迅達(dá)醫(yī)療儀器有限公司生產(chǎn);自動(dòng)酶標(biāo)洗板機(jī):北京拓普分析儀器有限公司生產(chǎn)。2結(jié)果2.1hbsag血清樣本的準(zhǔn)確性的測(cè)定對(duì)363份HBsAg陽(yáng)性標(biāo)本及159份陰性標(biāo)本,分別用同一批號(hào)的試劑盒及二次利用板測(cè)試,占目測(cè)結(jié)果,再加終止液上機(jī)測(cè)試其結(jié)果見(jiàn)表1。2.2吸收亮度的比較對(duì)19份HBsAg陽(yáng)性血清,分別測(cè)其二次利用前、后的吸光度,其結(jié)果見(jiàn)表2。2.3吸收層的精度比較對(duì)6份陽(yáng)性血清,分別進(jìn)行多次二次利用前、后的測(cè)試,上機(jī)測(cè)其吸光度,見(jiàn)表3。2.4使用第2部分保存時(shí)間和結(jié)果制備好的二次利用板,經(jīng)第1d、第5d、第10d、第15d、第60d各用相同的陽(yáng)性血清測(cè)定1次,其結(jié)果見(jiàn)表4。3次利用的吸光度3.1對(duì)363份HBsAg陽(yáng)性標(biāo)本及159份HBsAg陰性標(biāo)本,用同一批號(hào)的HBsAg酶聯(lián)免疫吸附試劑盒及當(dāng)天制備的二次利用板進(jìn)行測(cè)定,結(jié)果經(jīng)過(guò)目測(cè)判定和酶標(biāo)儀判定:陽(yáng)性標(biāo)本準(zhǔn)確率為100%,陰性標(biāo)本中有2份標(biāo)本為目測(cè)判定弱陽(yáng)性,酶標(biāo)儀判定為陽(yáng)性,陰性標(biāo)本準(zhǔn)確率為98.7%(χ2=1.9×10-2,P>0.05),二次利用前、后的實(shí)驗(yàn)結(jié)果差異無(wú)顯著性的意義;造成假陽(yáng)性的原因,可能是制備二次利用板時(shí),有部分略顯色的測(cè)試孔未去除。提示:首次使用后的HBsAg酶聯(lián)免疫吸附盒,可以進(jìn)行二次回收利用,用于對(duì)HBsAg標(biāo)本的測(cè)定,但對(duì)結(jié)果陽(yáng)性的標(biāo)本,建議用新的試劑復(fù)查。3.2在對(duì)二次利用前、后試劑的吸光度比對(duì)試驗(yàn)中,雖然,二次利用前陽(yáng)性標(biāo)本、空白值、陽(yáng)性對(duì)照的吸光度,均要高于二次利用的吸光度(t=5.25,P<0.01),其吸光度差異具有非常顯著性的意義,但二次利用的吸光度呈整體降低(陰性對(duì)照除外,見(jiàn)表2),并不影響目測(cè)和酶標(biāo)儀的判斷結(jié)果。因?yàn)槲舛确ㄊ菧y(cè)定若干陰性對(duì)照標(biāo)本,定出上限,以待測(cè)標(biāo)本OD值大于該上限者為陽(yáng)性;或以陰性標(biāo)本OD均值+2個(gè)標(biāo)準(zhǔn)差作為陰性和陽(yáng)性的界限。造成吸光度下降的原因,可能是試劑盒測(cè)試孔的包被物,經(jīng)多次洗滌后,濃度有所降低。3.3相同的樣本在二次利用前、后,經(jīng)多次測(cè)定,二次利用的標(biāo)本吸光度平均值均降低(t=3.97,P<0.01),差異有非常顯著性的意義,但吸光度的精密度(SD)(t=2.41,P>0.05),差異無(wú)顯著性的意義。見(jiàn)表3。3.4對(duì)制備二次利用測(cè)試孔所用洗滌液的比較中,用隨試劑盒所附洗滌液稀釋后(pH=7.4)洗滌5次的檢測(cè)效果比用自來(lái)水(pH=6.0,游離余氯=0.05mg/L)洗滌5次的效果更差。兩種洗板液所制反應(yīng)板的目測(cè)陽(yáng)性檢出率之間的差異有非常顯著的意義(χ2=9.6,P<0.01);而上機(jī)判斷則差異無(wú)顯著性的意義(χ2=2.03,P>0.05)見(jiàn)表4。原因可能是緩沖洗滌液,更易洗脫包被物,使包被物濃度下降,造成檢測(cè)結(jié)果的假陰性。建議使用自來(lái)水或蒸餾水(pH=6.0,游離余氯<0.05mg/L)來(lái)洗滌,且洗滌次數(shù)為4次為宜。3.5對(duì)二次利用板保存時(shí)間的觀察中發(fā)現(xiàn):用自來(lái)水制備的二次利用板從第1d到第60d的陽(yáng)性標(biāo)本檢測(cè)中,目測(cè)和酶標(biāo)儀判定結(jié)果均為陽(yáng)性,準(zhǔn)確率為100%;而用緩沖液制備的二次利用板,在制備當(dāng)天使用,準(zhǔn)確率為100%;第5d以后的顯色反應(yīng)明顯下降,目測(cè)判定為微弱陽(yáng)性,顯色反應(yīng)越來(lái)越差,假陰性也隨之增高(見(jiàn)表4)。3.6我們?cè)鴮?duì)別的廠(chǎng)家生產(chǎn)的產(chǎn)品,也做過(guò)二次利用試驗(yàn),但以失敗告終。提示不同的廠(chǎng)家,由于質(zhì)量不同,二次利用試驗(yàn)的結(jié)果也不一樣。建議使用質(zhì)量好的名牌產(chǎn)品。3.7HBsAg酶聯(lián)免疫吸附試劑盒的二次利用,可降