高效液相色譜法同時測定蔬菜、土壤中氯蟲苯甲酰胺和甲氧蟲酰農(nóng)藥殘留

高效液相色譜法同時測定蔬菜、土壤中氯蟲苯甲酰胺和甲氧蟲酰農(nóng)藥殘留

氯甲基苯甲酮是美國杜邦公司開發(fā)的一種高效、低毒的甲基苯基甲酮酯中毒。它主要通過昆蟲魚的受體激活蜱蟲，表現(xiàn)出昆蟲活性。甲氧蟲酰肼(methoxyfenozide)是美國陶氏益農(nóng)公司開發(fā)出來的新一代雙酰肼類昆蟲生長調(diào)節(jié)劑,可誘使害蟲過早蛻皮,從而相對快速地抑制昆蟲進食。氯蟲苯甲酰胺和甲氧蟲酰肼在我國蔬菜生產(chǎn)中得到廣泛使用,防治對有機磷、擬除蟲菊酯類農(nóng)藥產(chǎn)生抗藥性的鱗翅目害蟲均有特效。2008年、2009年,上海市農(nóng)業(yè)技術推廣服務中心先后將這兩種農(nóng)藥列為“上海市重點推薦農(nóng)藥品種”。但大量使用農(nóng)藥對環(huán)境和食品不可避免帶來潛在危機。國內(nèi)外關于氯蟲苯甲酰胺和甲氧蟲酰肼殘留的單獨檢測已有報道,但在蔬菜、土壤上同時測定這兩種農(nóng)藥殘留,國內(nèi)外尚未見報道。本文選擇了黃瓜(瓜類)、青菜(葉菜類)、豇豆(豆類)、卷心菜(甘藍類)、番茄(茄果類)5種代表性的蔬菜及土壤樣品,經(jīng)乙腈提取,過固相萃取小柱凈化,HPLC測定。該方法準確、快速、簡便,完全能滿足農(nóng)藥殘留檢測的要求。1試驗部分1.1儀器和檢測方法Agilent1200高效液相色譜儀(帶DAD檢測器),高速勻漿分散器(T25DS25,德國制造),電熱恒溫水浴鍋(GB11240-89,上海),氮吹濃縮器(AC–401,安徽黃山),恒溫振蕩器(國華SHAC,江蘇),離心機(TDL–5–A,江蘇)。氯蟲苯甲酰胺純度98.0%,甲氧蟲酰肼純度98.5%,北京天和安業(yè)科技有限公司提供。VenusilXBP–C18反相色譜柱(天津艾杰爾科技有限公司);NH2–SPE小柱(Agela公司)。試劑∶乙腈、二氯甲烷、氯化鈉等為分析純,液相色譜儀所用甲醇、乙腈為色譜純、高純水。1.2醇–乙腈–水法色譜柱:25cm×4.6mm×5μm不銹鋼柱,內(nèi)填VenusilXBP–C18,柱溫45℃,流動相為甲醇–乙腈–水。采用梯度洗脫程序,0min時,水溶液100%;4min時,V(水)∶V(乙腈)∶V(甲醇)=35∶15∶50;8min時,V(水)∶V(乙腈)∶V(甲醇)=5∶65∶30;整個分析過程中,流速為1.0mL/min,進樣量20μL,停止時間14min,延遲2min。使用紫外檢測器,檢測波長230nm。1.3測試方法1.3.1離心條件:以速度離心2.土壤:稱取25g樣品加入到250mL三角瓶中,加50mL乙腈振蕩提取1h,將提取液轉移至離心試管中,以3000r/min的速度離心5min,吸取上清液10mL。蔬菜:稱取25g樣品加入到250mL三角瓶中,加入50mL乙腈,在勻漿機中高速勻漿2min后用濾紙過濾,濾液收集到裝有5~7g氯化鈉的100mL具塞量筒中,蓋上蓋子,劇烈震蕩1min,室溫下靜止30min,吸取上清液10mL。1.3.2上清液氧化合物spe土壤:將吸取的上清液在50℃的水浴溫度下,氮吹蒸發(fā)至近干,用乙甲醇定容,混勻后用0.45μm濾膜過濾,待測。蔬菜:將吸取的上清液在50℃的水浴溫度下,氮吹蒸發(fā)至近干。用4mL甲醇預淋SPE小柱,用10mL甲醇–二氯甲烷溶液[V(甲醇)∶V(二氯甲烷)=5∶95]分兩次轉移提取液,過SPE小柱,收集淋洗液。吹干,甲醇定容,過膜,待測。2結果與討論2.1流動相和檢測波長的選擇實驗中分別對流動相乙腈–水、甲醇–水、甲醇–乙腈–水的不同配比進行了比較選擇,結果表明乙腈–水的梯度進樣,色譜分離效果較甲醇–水的更好,所測兩種農(nóng)藥分離較好,靈敏度也較高,但分析時間較早;而選擇甲醇–乙腈–水的梯度進樣,兩種農(nóng)藥的分離效果也較好,分析時間稍晚一些,但這樣能與樣品中的雜質(zhì)完全分離開,因而選擇了甲醇–乙腈–水3種混合溶劑作為流動相。在檢測波長的選擇上,根據(jù)紫外掃描結果,氯蟲苯甲酰胺、甲氧蟲酰肼在190~400nm的波長范圍內(nèi)進行掃描,這兩種農(nóng)藥除了在200nm處有最大吸收外并無其他明顯吸收峰,其吸收波長的強度隨檢測波長的增大而減少。當檢測波長為200nm時,農(nóng)藥標樣的峰面積很大,但是雜質(zhì)和溶劑也有很大的吸收,樣品、溶劑和雜質(zhì)等分開不完全。實際樣品檢測過程中發(fā)現(xiàn)檢測波長在230nm處雜質(zhì)干擾較小,且樣品響應值較高。因此選擇了230nm作為這兩種農(nóng)藥的檢測波長。2.2淋洗液的凈化不同蔬菜中樣品基質(zhì)復雜,故提取后還需凈化才能完成樣品的檢測分析。本文選擇了過NH2小柱,選擇V(甲醇)∶V(二氯甲烷)=1∶99、5∶95、10∶90、50∶504個不同比例淋洗液來凈化,檢測結果發(fā)現(xiàn)當甲醇比例≤10%時,蔬菜樣品添加回收率基本滿足要求。在1∶99、5∶95、10∶903種配比的淋洗液凈化中發(fā)現(xiàn),隨著甲醇比例增加,淋洗出的色素也加深,對色素較深的綠葉菜易產(chǎn)生雜質(zhì)干擾,且對色譜柱的損耗較大。因此試驗結果表明用1∶99和5∶95的淋洗液能更好地滿足方法的要求,且保護色譜柱。2.3標準曲線的繪制分別稱取0.05g氯蟲苯甲酰胺和甲氧蟲酰肼標樣,甲醇定容至50mL,配制1000mg/L的單標母液,取一定量的母液,分別稀釋成0.2、0.5、1、5、10、25mg/L6個不同濃度的標準溶液,搖勻,按照1.2儀器檢測條件,以峰面積Y為縱坐標,濃度X(mg/L)為橫坐標進行線性回歸分析,得到氯蟲苯甲酰胺和甲氧蟲酰肼線性回歸方程分別為y=52.813x+1.5913(R2=0.9998),y=43.621x–0.1221(R2=1)。標準曲線圖見圖1。儀器最小檢出量1×10-9g,在蔬菜及土壤中的最低檢測濃度為0.05mg/L。2.4加標回收率及進線時間分別在卷心菜、番茄、黃瓜、青菜、豇豆、空白蔬菜及空白土壤樣品中加入3種濃度的標樣氯蟲苯甲酰胺和甲氧蟲酰肼混標,按上述方法對樣品進行提取、凈化、色譜測定后,計算添加回收率,結果如表1所示,這兩種農(nóng)藥在樣品之間的平均添加回收率為87.6%~114.4%;變異系數(shù)(CV)為0.25%~8.6%。氯蟲苯甲酰胺和甲氧蟲酰肼標樣出峰時間分別為10.1、10.7min。標樣、土壤和蔬菜樣品空白、樣品添加回收色譜圖見圖2~圖14。3蔬菜殘留測定研究并建立了一種采用高效液相色譜儀測定蔬菜和土壤中殘留量的分析方法。該方法具有干擾少,操作簡便,準確度和靈敏度較高的特點。在3檔添加濃度下,本方法的平均回收率在87.6%~114.4%,最低檢出濃度為0.05mg/kg,均滿足殘留測定要求。美國規(guī)定氯蟲苯甲酰胺在蔬菜上的最大殘留限量(MRL)為0.25~13mg/kg,葫蘆類蔬菜MRL為0.25mg/kg、果類蔬菜為0.70mg/kg、葉類蔬菜為13mg/kg;日本已制定了甲氧蟲酰肼在大多數(shù)蔬菜和水果上的最大殘留限量,蔬菜MRL值在0.1~10mg/kg之