阿司匹林原料藥的質(zhì)量檢測-阿司匹林原料藥雜質(zhì)檢查

任務(wù)二：阿司匹林雜質(zhì)檢查子任務(wù)一藥物中雜質(zhì)來源及限量檢查子任務(wù)二藥物的雜質(zhì)檢查法

子任務(wù)三特殊雜質(zhì)的檢查方法基本要求

一、掌握一般雜質(zhì)檢查的原理、方法和計算。二、熟悉特殊雜質(zhì)檢查的方法和原理。三、熟悉藥物中雜質(zhì)的來源。子任務(wù)一藥物中雜質(zhì)來源及限量檢查

基本要求了解藥物中雜質(zhì)來源掌握雜質(zhì)限量檢查方法一、藥物的純度

指藥物純凈程度，反映了藥物質(zhì)量的優(yōu)劣，含有雜質(zhì)是影響藥品質(zhì)量的主要因素。

藥物的純度與化學(xué)試劑的純度藥物的純度考慮雜質(zhì)的生理作用，藥品只有兩個等級：合格或不合格。化學(xué)試劑有很多等級，如基準(zhǔn)試劑、優(yōu)級純（GR）、分析純（AR）、化學(xué)純（CP）、色譜純、光譜純。二、雜質(zhì)定義是指藥物中存在的：①無治療作用②影響藥物的穩(wěn)定性和療效,③甚至對人體健康有害的微量物質(zhì)

具體是指：

1.本身無毒副作用，也不影響藥物的穩(wěn)定性和療效，但影響藥物的科學(xué)管理的物質(zhì)

2.本身無毒副作用，但影響藥物的穩(wěn)定性和療效的物質(zhì)

3.有毒副作用的物質(zhì)三、藥物中雜質(zhì)的來源1.生產(chǎn)過程中引入（1）原料、反應(yīng)中間體及副產(chǎn)物

（2）試劑、溶劑、催化劑類

（3）生產(chǎn)中所用金屬器皿、裝置以及其他不耐酸、堿的金屬工具所帶來的雜質(zhì)2.貯藏過程中產(chǎn)生

水解、氧化、分解、異構(gòu)化、晶形轉(zhuǎn)變、聚合、潮解和發(fā)霉等

易發(fā)生水解反應(yīng)的結(jié)構(gòu)：

酯、內(nèi)酯、酰胺、鹵代烴、苷類等易發(fā)生氧化反應(yīng)的結(jié)構(gòu)：

醚、醛、酚羥基、巰基、亞硝基、雙鍵等四、雜質(zhì)的分類

藥物中的雜質(zhì)按來源分為

1.一般雜質(zhì)：如氯化物、硫酸鹽、鐵鹽、重金屬、砷鹽、酸、堿、水分、易炭化物、熾灼殘渣等。一般雜質(zhì)其檢查方法收載在中國藥典的附錄中。

2.特殊雜質(zhì)：指某一個或某一類藥物的生產(chǎn)或貯藏過程中引入的雜質(zhì)，如阿司匹林中的游離水楊酸、異煙肼中的游離肼、甾體激素中的其他甾體。特殊雜質(zhì)檢查方法收載在中國藥典正文各藥品的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中。按結(jié)構(gòu)可分為1.無機(jī)雜質(zhì)

Cl-、S2-、CN-、As、重金屬2.有機(jī)雜質(zhì)中間體、副產(chǎn)物、分解物、異構(gòu)體、殘留溶劑按性質(zhì)可分為1.信號雜質(zhì)

—指本身一般無害,但其含量多少可反映藥物純度水平,指示生產(chǎn)工藝是否合理.

如：氯化物、硫酸鹽等.2.有害雜質(zhì)

—對人體有毒害的雜質(zhì).在質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中嚴(yán)加控制,以保證用藥安全.

如：重金屬、砷鹽、氰化物、氟化物等.五、雜質(zhì)的限量檢查（一）雜質(zhì)限量

在不影響藥物療效、穩(wěn)定性及不發(fā)生毒性的前提下,藥物中所含雜質(zhì)的最大允許量。通常用百分之幾或百萬分之幾來表示雜質(zhì)量≤雜質(zhì)限量＜雜質(zhì)量藥品合格藥品不合格子任務(wù)二藥物的雜質(zhì)檢查法

1.對照法限量檢查法（LimitTest）特點(diǎn)：不需知道雜質(zhì)的準(zhǔn)確含量

2.靈敏度法

系指在供試品溶液中加入試劑，在一定反應(yīng)條件下，不得有正反應(yīng)出現(xiàn)。特點(diǎn)：不需對照品

3.比較法

含量測定法：測定雜質(zhì)的絕對含量，如測定吸收度(吸光度)、pH值等。特點(diǎn)：準(zhǔn)確測定雜質(zhì)的量，不需對照品三、雜質(zhì)限量的計算例題檢查某藥物中的砷鹽，取標(biāo)準(zhǔn)砷溶液2ml（每1ml相當(dāng)于1

g的As）制備標(biāo)準(zhǔn)砷斑，砷鹽限量為0.0001％，應(yīng)取供試品的量為

A.0.20gB.2.0gC．0.020gD.1.0gE.0.10g已知：c＝1

g/ml＝1×10

6g/mlV＝2mlL＝0.0001%例題檢查維生素C中的重金屬時，若取樣量為1.0g，要求含重金屬不得過百萬分之十，問應(yīng)吸取標(biāo)準(zhǔn)鉛溶液（每1ml＝0.01mg的Pb）多少ml？A.0.2mlB.0.4mlC．2mlD.1mlE.20ml

例．磷酸可待因中嗎啡的檢查：已知：V=5.0ml；C=0.02mg/ml；S=0.1g

求：L=？解：L=C×V/S=5.0×0.02/0.1×1000×100%=0.1%

注意點(diǎn)①單位一致②稀釋倍數(shù)③表示方法（%）一、氯化物檢查法氯化物廣泛存在于自然界中，在藥物的生產(chǎn)過程中，常常要用到鹽酸或原料、中間體呈鹽酸鹽等，氯化物因此極易被引入到藥物中。Cl-對人體雖然無害，但它的量可以反映出藥物的純凈程度及生產(chǎn)過程、貯藏過程是否正常，如通過對氯化物控制，可同時控制與氯化物結(jié)合的一些陽離子以及某些同時生成的副產(chǎn)物。氯化物作為信號雜質(zhì)1.原理中國藥典對氯化物的檢查是利用氯化物在硝酸酸性溶液中與硝酸銀試液作用，生成氯化銀白色渾濁液，與一定量標(biāo)準(zhǔn)氯化鈉溶液在相同條件下生成的氯化銀渾濁液比較，以判定供試品中所含氯化物是否符合限量規(guī)定。

Ag++Cl-=AgCl2.方法除另有規(guī)定外，取各藥品項下規(guī)定量的供試品，加水溶解使成25ml(溶液如顯堿性，可滴加硝酸使成中性)，再加稀硝酸10ml；溶液如不澄清，應(yīng)濾過；置50ml納氏比色管中，加水使成約40ml，搖勻，即得供試溶液。另取各藥品項下規(guī)定量的標(biāo)準(zhǔn)氯化鈉溶液，置50ml納氏比色管中，加稀硝酸10ml，加水使成40ml，搖勻，即得對照溶液。于供試溶液與對照溶液中，分別加入硝酸銀試液1.0ml，用水稀釋至50ml，搖勻，在暗處放置5min，同置黑色背景上，從比色管上方向下觀察，比較。例如中國藥典對無水葡萄糖中氯化物的檢查方法：取本品0.60g，依法檢查(附錄VIA)，與標(biāo)準(zhǔn)氯化鈉溶液6.0ml制成的對照液比較，不得更濃(0.010％)。3.討論（1）氯化物的檢測靈敏度為1μg/ml。所用的標(biāo)準(zhǔn)氯化鈉溶液每1ml相當(dāng)于10μg的Cl-。在測定條件下，氯化物濃度以50ml中含50μg～80μg的Cl-(相當(dāng)于標(biāo)準(zhǔn)氯化鈉溶液5.0ml～8.0ml)所顯渾濁梯度明顯，便于比較。應(yīng)以此設(shè)計氯化物的檢查方法，根據(jù)其限量，取用適宜的供試品量，使氯化物的濃度處在適宜比濁的范圍內(nèi)。（2）氯化物檢查宜在硝酸酸性溶液中進(jìn)行，加入硝酸可加速氯化銀沉淀的生成并產(chǎn)生較好的乳濁，可避免弱酸銀鹽如碳酸銀、磷酸銀以及氧化銀沉淀的形成而干擾檢查。（3）為了避免光線使單質(zhì)銀析出，在觀察前應(yīng)在暗處放置5min。由于氯化銀為白色沉淀，比較時應(yīng)將比色管置黑色背景上，從上向下觀察，使得比較液層厚，背景對比度強(qiáng)，利于判斷。討論（4）供試液稀釋后，再加硝酸銀試液，避免在較大氯化物濃度下產(chǎn)生沉淀影響比濁。（5）溫度對產(chǎn)生氯化銀的渾濁有影響，以30～40℃產(chǎn)生濁度最大，結(jié)果也穩(wěn)定。但作為限量檢查，供試管與對照管在平行條件下操作，故可在室溫下進(jìn)行。討論4．供試品處理有的藥物在上述試驗條件下對檢查有干擾，應(yīng)排除干擾后再檢查。（1）供試品溶液如不澄清，可用含硝酸的水洗凈濾紙中的氯化物后濾過。（2）供試品溶液如帶顏色，可按中國藥典附錄所規(guī)定的內(nèi)消色方法處理。即取兩份供試品溶液，于其中一份中先加入硝酸銀試液1.0ml，搖勻，放置10min，如顯渾濁，可反復(fù)濾過，至濾液澄清，即得無氯化物雜質(zhì)又具有相同顏色的澄清溶液，再在其中加入規(guī)定量的標(biāo)準(zhǔn)氯化鈉溶液與水適量使成50ml，作為對照溶液；另一份中加入硝酸銀試液1.0ml與水適量使成50ml，作為供試品溶液。將兩液在暗處放置5min后比較，即可消除顏色的干擾。如枸椽酸鐵銨中氯化物檢查就采用此法。（3）某些有顏色的藥物也可根據(jù)其化學(xué)性質(zhì)，設(shè)計其他的排除干擾的方法。如高錳酸鉀中的氯化物檢查，可先加乙醇適量使高錳酸鉀還原褪色后，再依法檢查。（4）檢查碘化物(如碘化鈉)中氯化物，I-也能與硝酸銀形成沉淀，干擾檢查?？稍诠┰嚻分屑尤胍欢康乃岷瓦^氧化氫溶液，加熱煮沸，使將I-氧化成產(chǎn)物I2并揮發(fā)、溶液澄明無色后，再依法檢查。也可以利用碘化銀沉淀穩(wěn)定，在氨液中不溶解，而氯化銀、溴化銀沉淀在氨溶液中溶解的性質(zhì)，除去碘化物的干擾。如檢查碘中氯化物和溴化物，是將供試品加水研磨、濾過，于濾液中加鋅粉使碘還原為無色的碘化物，再在氨堿性條件下滴加硝酸銀試液使生成碘化銀沉淀而濾除。向濾液中加入硝酸，破壞絡(luò)離子后，AgBr和AgCl沉淀復(fù)析出，與一定量標(biāo)準(zhǔn)氯化鈉溶液生成的沉淀比較，即可確定氯化物和溴化物是否符合要求。（5）溶于水的有機(jī)藥物，可按中國藥典附錄規(guī)定的方法直接檢查氯化物;不溶于水的有機(jī)藥物，多數(shù)采用加水振搖，使所含氯化物溶解，濾除不溶物；或加熱溶解供試品，放冷后析出沉淀，濾過，取濾液依法檢查。如藥物在稀乙醇或丙酮中有一定溶解度，也可加這些溶液溶解后依法檢查。三氯叔丁醇中氯化物的檢查即如此。

（6）檢查有機(jī)氯雜質(zhì)，可根據(jù)有機(jī)藥物的雜質(zhì)結(jié)構(gòu)，選擇適宜的有機(jī)破壞方法如氧瓶燃燒法，將有機(jī)氯轉(zhuǎn)變?yōu)殡x子狀態(tài)，再依法檢查。若雜質(zhì)中氯原子連接于環(huán)上，則需先對其進(jìn)行有機(jī)破壞，使分解后再檢查。二、硫酸鹽檢查法藥物中存在的微量硫酸鹽雜質(zhì)，也是一種信號雜質(zhì)。藥物中存在的微量硫酸鹽與氯化鋇在鹽酸酸性介質(zhì)中生成硫酸鋇白色渾濁，與一定量標(biāo)準(zhǔn)硫酸鉀溶液在相同條件下生成的渾濁比較，判定供試品硫酸鹽是否符合限量規(guī)定。Ba2++SO42-=BaSO4其它略三、鐵鹽檢查法藥物中微量鐵鹽的存在可能會加速藥物的氧化和降解，因此需要控制其存在量，常用以下兩種方法檢查。(一)硫氰酸鹽法

檢查藥品中的鐵鹽雜質(zhì)，中國藥典和美國藥典均采用硫氰酸鹽法。鐵鹽在鹽酸酸性溶液中與硫氰酸銨生成紅色可溶性硫氰酸鐵配位離子，再與一定量標(biāo)準(zhǔn)鐵溶液用同法處理后所呈的顏色進(jìn)行比較，顏色不得更深。其它略Fe3+

+

6SCN-

[Fe(SCN)6]3-

（二）巰基醋酸法英國藥典采用巰基醋酸(mercaptoracetic

acid)法檢查藥物中鐵鹽。巰基醋酸還原Fe3+為Fe2+，在氨堿性溶液中進(jìn)一步與Fe2+作用生成紅色配位離子，與一定量標(biāo)準(zhǔn)鐵溶液經(jīng)同法處理后產(chǎn)生的顏色進(jìn)行比較，以限制鐵的量。2Fe3++2HSCH2COOH

2Fe2+

+SCH2COOH+2H+四、重金屬檢查重金屬系指在實(shí)驗條件下能與S2-作用顯色的金屬雜質(zhì)，如銀、鉛、汞、銅、鎘、銻、錫、鉍等。由于在藥品生產(chǎn)過程中遇到鉛的機(jī)會較多，鉛在體內(nèi)又易積蓄中毒，故檢查時以鉛為代表。中國藥典對重金屬的檢查一共收載有四種方法。

示例：阿司匹林原料藥檢查項重金屬取本品1.0g，加乙醇23ml溶解后，加醋酸鹽緩沖液（pH3.5）2ml，依法檢查（附錄ⅧH第一法），含重金屬不得過百萬分之十。（一）硫代乙酰胺法

此法最為常用，適用于溶于水、稀酸和乙醇的藥物1．原理硫代乙酰胺在弱酸性(pH3.5醋酸鹽緩沖液)條件下水解，產(chǎn)生硫化氫，與微量重金屬離子生成黃色到棕黑色的硫化物均勻混懸液，與一定量標(biāo)準(zhǔn)鉛溶液經(jīng)同法處理后所呈顏色比較，顏色不得更深。CH3CSNH2+H2O

CH3CONH2+H2SpH3.5H2S

+

Pb2+

PbS↓+2H+其它略原理重金屬可與藥物的芳環(huán)、雜環(huán)形成較牢固的價鍵，所以將供試品熾灼破壞后，加硝酸加熱處理，使有機(jī)物分解、破壞完全后，使重金屬游離，再按第一法進(jìn)行檢查。其它略(二)適用于在水、稀酸、乙醇中難溶，或能與重金屬離子形成配位化合物的有機(jī)藥物

（三）適用于難溶于稀酸但能溶解于堿性水溶液的藥物。如磺胺類、巴比妥類藥物等。在堿性介質(zhì)中，以硫化鈉為顯色劑，使pb2+生成PbS微粒的混懸液，與一定量標(biāo)準(zhǔn)鉛溶液經(jīng)同法處理后所呈顏色比較，不得更深。硫化鈉試液對玻璃有一定的腐蝕性，且久置后會產(chǎn)生絮狀物，應(yīng)臨用新制。其它略

（四）微孔濾膜法適用于重金屬限量低的藥物此法適用于含2～5μg重金屬雜質(zhì)及有色供試液的檢查。使重金屬生成的硫化物富集于微孔濾膜上，比較供試品和一定量的標(biāo)準(zhǔn)鉛溶液同法處理后產(chǎn)生的色斑深淺，確定重金屬是否超過限量。2．試驗裝置所用濾器由具有螺紋絲扣并能密封的上下兩部分，以及墊圈、濾膜和輔助濾板所組成（其它略）五、砷鹽檢查法

砷鹽是有毒的物質(zhì)，多由藥物生產(chǎn)過程所使用的無機(jī)試劑引入。常用下列三種方法:古蔡氏法二乙基二硫代氨基甲酸銀法白田道夫法中國藥典采用前兩種方法檢查藥物中微量的砷鹽。

(一)古蔡(Gutzeit)氏法中國藥典（2000年版）主要采用此法檢查藥物中微量砷鹽。金屬鋅與酸作用產(chǎn)生新生態(tài)的氫，與藥物中微量砷鹽反應(yīng)生成具揮發(fā)性的砷化氫，遇溴化汞試紙產(chǎn)生黃色至棕色的砷斑，與一定量標(biāo)準(zhǔn)砷溶液所生成的砷斑比較，顏色不得更深，判斷砷鹽的限量。

儀器裝置如圖所示（其它略）(二)二乙基二硫代氨基甲酸銀法

[簡稱Ag(DDC)法]本法為中國藥典和USP(24)收載的方法。不僅可用于砷鹽的限量檢查，也可用作微量砷鹽的含量測定。金屬鋅與酸作用，產(chǎn)生新生態(tài)的氫，與微量砷鹽反應(yīng)，生成具有揮發(fā)性的砷化氫；砷化氫遇二乙基二硫代氨基甲酸銀，使其還原產(chǎn)生紅色的膠態(tài)銀，用目視比色法或在510nm波長處測定吸收度，再與一定量標(biāo)準(zhǔn)砷溶液用同法處理后得到的有色溶液進(jìn)行比較。裝置同古蔡(Gutzeit)氏法其它略六、硫化物檢查法硫化物為有毒物質(zhì)供試品中的硫化物與稀鹽酸在80～90℃作用產(chǎn)生硫化氫氣體，遇醋酸鉛試紙產(chǎn)生棕色的硫化鉛，稱為“硫斑”，與一定量的標(biāo)準(zhǔn)硫化鈉溶液在相同條件下生成的硫斑比較，判斷供試品中硫化物是否符合限量規(guī)定。

裝置同古蔡氏法其它略七、氟化物檢查氟檢查法用于檢查有機(jī)氟化物中氟的含量。有機(jī)氟化物經(jīng)氧瓶燃燒分解產(chǎn)生氟化氫，用水吸收；在PH4.3時茜素氟藍(lán)與硝酸亞鈰以1:1結(jié)合成紅色配位化合物，當(dāng)有F－存在時，三者以1:1:1結(jié)合成藍(lán)紫色配位化合物，在暗處放置1小時，置2cm吸收池中，于610nm波長處測定吸收度，并用空白試驗進(jìn)行校正。

其它略八、溶液顏色檢查法該方法是控制藥品在生產(chǎn)過程或貯存過程中產(chǎn)生的有色雜質(zhì)的限量方法。《中國藥典》（2000年版）采用三種檢查方法。(一)目視比色法取各藥品項下規(guī)定量的供試品，加水溶解，置于25ml納氏比色管中，加水稀釋至10ml。另取規(guī)定色調(diào)和色號的標(biāo)準(zhǔn)比色液10ml，置于納氏比色管中，兩管同置白色背景上，自上向下透視或平視觀察，供試品管呈現(xiàn)的顏色與對照管比較，不得更深。其它略(二)分光光度法方法除另有規(guī)定外，取規(guī)定量的供試品，加水溶解使成10ml，必要時濾過(除去不溶性雜質(zhì)對吸收度測定的干擾)，濾液于規(guī)定波長處測定，吸收度不得超過規(guī)定值。其它略九、澄清度檢查法

澄清度可檢查藥物溶液中的微量不溶性雜質(zhì)的存在情況，在一定程度上可反映藥品的質(zhì)量和生產(chǎn)的工藝水平，對于供制備注射液用原料藥物的純度檢查，尤為重要。

示例：阿司匹林檢查項之一【檢查】溶液的澄清度與顏色取本品0.5g，加氫氧化鈉試液10ml溶解后，溶液應(yīng)澄清無色，如顯混濁，與一號濁度標(biāo)準(zhǔn)溶液（附錄ⅨA第一法）比較，不得更深。1.阿司匹林中特殊雜質(zhì)檢查原理

合成工藝這些雜質(zhì)是怎么產(chǎn)生的?還有其他雜質(zhì)嗎?溶液的澄清度

檢查--酚、苯酯類雜質(zhì)

原理——根據(jù)這些雜質(zhì)與阿司匹林的酸性強(qiáng)弱，利用它們在氫氧化鈉溶液中的溶解度差異，規(guī)定一定量樣品在氫氧化鈉溶液中應(yīng)澄清。酚水楊酸苯酯乙酸苯酯乙酰水楊酸苯酯2.方法在室溫條件下，將用水稀釋至一定濃度的供試品溶液與等量的濁度標(biāo)準(zhǔn)液分別置于配對的比濁用玻璃管(內(nèi)徑15mm～16mm，平底，具塞，以無色、透明、中性硬質(zhì)玻璃制成)中，裝入的液面的高度為40mm。在濁度標(biāo)準(zhǔn)液制備后5min，同置黑色背景上，在漫射光下，從比濁管上方向下觀察，比較；或在暗室內(nèi)垂直同置于傘棚燈下，照度為1000lx，從水平方向觀察、比較，以檢查溶液的澄清度或其渾濁程度。除另有規(guī)定外，供試品溶解后應(yīng)立即檢視。濁度標(biāo)準(zhǔn)貯備液配制配制1.0％硫酸肼水溶液，放置4h～6h，待濁度穩(wěn)定后，取此溶液和10.0％烏洛托品水溶液等容量混合，搖勻，于25℃避光靜置24h，即得。濁度標(biāo)準(zhǔn)貯備液應(yīng)置冷處避光保存，在2個月內(nèi)使用，用前搖勻。濁度標(biāo)準(zhǔn)原液配制取濁度標(biāo)準(zhǔn)貯備液15.0ml，置1000ml量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻。取適量，置1cm吸收池中，于550nm波長處測定，測得的吸收度應(yīng)在0.12—0.15范圍內(nèi)。濁度標(biāo)準(zhǔn)原液應(yīng)在48h內(nèi)使用，用前搖勻。

濁度標(biāo)準(zhǔn)液配制臨用時，取濁度標(biāo)準(zhǔn)原液與水按表3.1配制、充分搖勻，即得不同級號的濁度標(biāo)準(zhǔn)液。表3.1不同級號濁度標(biāo)準(zhǔn)液濁度標(biāo)準(zhǔn)原液(m1)級號0.5

1

2

3

4濁度標(biāo)準(zhǔn)原液（ml）

2.55.010.030.050.0水（ml）97.595.090.070.050.0中國藥典規(guī)定：供試品溶液的澄清度與所用溶劑相同或未超過0.5號濁度標(biāo)準(zhǔn)液時，為澄清；供試品溶液的乳色比0.5號明顯，而不及1級時，稱為濁度0.5號；其余依此類推。BP(2000)用同樣方法進(jìn)行澄清度檢查，其對照混懸液I、Ⅱ及Ⅲ分別與我國藥典濁度標(biāo)準(zhǔn)液1，2，3及4號相當(dāng)。濁度未超過I號對照混懸液即為澄清，限量較我國稍寬。3.注意事項（1）多數(shù)藥物的澄清度檢查以水為溶劑，但也有或同時有用酸、堿或有機(jī)溶劑(如乙醇、甲醇、丙酮)作溶劑的。如無水葡萄糖、山梨酸、苯巴比妥、葡萄糖、硼酸等藥品檢查乙醇溶液的澄清度，如安乃近、奮乃靜等檢查甲醇溶液的澄清度等。（2）有機(jī)酸的堿金屬鹽類藥物強(qiáng)調(diào)用“新沸過的冷水”，因為水中若溶有二氧化碳，將影響溶液的澄清度；當(dāng)檢查后的溶液還需供“酸度”檢查用時，也應(yīng)強(qiáng)調(diào)用“新沸過的冷水”。（3）供制備注射用的原料藥物往往既要檢查溶液澄清度又要檢查溶液顏色，如華法林鈉的檢查：取本品0.20g，加丙酮10ml溶解后，溶液應(yīng)澄清無色；如顯混濁與1號濁度標(biāo)準(zhǔn)液比較，不得更濃；如顯色，置4cm吸收池中，采用分光光度法檢查，在460nm波長處測定的吸收度，不得超過0.12。十、炭化物檢查法炭化物檢查法是檢查藥物中遇硫酸易炭化或易氧化而呈色的微量有機(jī)雜質(zhì)。這類雜質(zhì)數(shù)結(jié)構(gòu)未知，用硫酸呈色的方法可以簡便地控制它們的總量。示例：阿司匹林檢查項之一易炭化物取本品0.5g，依法檢查，（附錄ⅧO）與對照液（取比色用氯化鈷液0.25ml、比色用重鉻酸鉀液0.25ml、比色用硫酸銅液0.40ml，加水使成5ml）比較，不得更深。1．方法取相同的比色管兩支：甲管中加各品種項下規(guī)定的對照液5ml；乙管中加硫酸[含H2SO494.5％～95.5％(g／g)]5ml后，分次緩緩加入規(guī)定量的供試品，振搖使溶解。除另有規(guī)定外，靜置15min后，將甲乙兩管同置白色背景前，平視觀察，乙管中所顯顏色不得較甲管更深。

供試品如為固體，應(yīng)先研成細(xì)粉，如需加熱才能溶解時，可取供試品與硫酸混合均勻，加熱溶解后，放冷至室溫，再移置比色管中。對照液主要有三類：①用“溶液顏色檢查”項下的標(biāo)準(zhǔn)比色液作為對照液；②由比色用氯化鈷液、比色用重鉻酸鉀液和比色用硫酸銅液按規(guī)定方法配成的對照液；③高錳酸鉀液。2．注意事項（1）比色時，應(yīng)將甲、乙兩管同置白色背景前，平視觀察比較，判斷結(jié)果。（2）供試品為固體時，應(yīng)先研成細(xì)粉，以利于溶解、呈色和檢出。（3）如需加熱才能溶解時，可取供試品與硫酸混合均勻，加熱溶解，放冷至室溫，再移至比色管中。（4）硫酸的濃度、反應(yīng)溫度與時間均影響易炭化物所呈現(xiàn)的顏色，必須按規(guī)定嚴(yán)格控制。十一、熾灼殘渣(residueonignition)有機(jī)藥物經(jīng)炭化或揮發(fā)性無機(jī)藥物加熱分解后，加硫酸濕潤，高溫?zé)胱疲?00～800℃），所產(chǎn)生的非揮發(fā)性無機(jī)雜質(zhì)。英國藥典稱其為硫酸灰分(sulphatedash)。熾灼殘渣檢查用于控制有機(jī)藥物和揮發(fā)性無機(jī)藥物中存在的非揮發(fā)性無機(jī)雜質(zhì)。示例：阿司匹林檢查項之一熾灼殘渣不得過0.1％（附錄ⅧN）。1.方法取供試品1.0g～2.0g或各藥品項下規(guī)定的重量，置已熾灼至恒重的坩堝中，精密稱定，緩緩熾灼至完全炭化，放冷至室溫；除另有規(guī)定外，加硫酸0.5ml～1ml使?jié)駶?，低溫加熱至硫酸蒸氣除盡后，在700～800℃熾灼使完全灰化，移置干燥器內(nèi)，放冷至室溫，精密稱定后，再在700～800℃熾灼至恒重，即得。根據(jù)下式計算，判斷熾灼殘渣是否符合限量規(guī)定。2.注意事項

（1）供試品的取用量應(yīng)根據(jù)熾灼殘渣限量和稱量誤差決定。樣品量過多，炭化和灰化時間太長；樣品量過少，稱量誤差增大。一般應(yīng)使熾灼殘渣量為1mg～2mg，殘渣限量一般為0.1％～0.2％。當(dāng)限量為0.1％，取樣量約1g；限量為0.05％，取樣約2g；限量為1％以上者，取樣可在1g以下。（2）供試品應(yīng)緩緩加熱，直至完全灰化。為了避免供試品炭化時驟然膨脹而逸出，可采用將坩堝斜置方式，(不產(chǎn)生煙霧)，放冷，加硫酸，低溫加熱。（3）坩堝在進(jìn)行高溫爐內(nèi)熾灼操作前，務(wù)必蒸發(fā)除盡硫酸，以免硫酸蒸氣腐蝕爐膛，造成漏電事故。除盡硫酸蒸氣，應(yīng)低溫加熱，以防由于溫度過高，供試品飛濺，而影響測定的結(jié)果。（4）含氟的藥品對瓷坩堝有腐蝕，應(yīng)采用鉑坩堝。（5）一些重金屬(如鉛)于高溫下易揮發(fā)，故若需將熾灼殘渣留作重金屬檢查時，熾灼溫度必須控制在500～600℃。（6）可采用藍(lán)墨水與FeCl3溶液的混合液涂寫烘烤供瓷坩堝編號。十二、干燥失重測定法干燥失重系指藥品在規(guī)定的條件下，經(jīng)干燥后所減失的量，以百分率表示。干燥失重的量應(yīng)恒重。示例：阿司匹林檢查項之一干燥失重取本品，置五氧化二磷干燥器中減壓干燥至恒重，減失重量不得過0.5（附錄ⅧL）。

干燥失重的內(nèi)容物主要指水分，也包括其它揮發(fā)性物質(zhì)，如殘留的揮發(fā)性有機(jī)溶劑等。干燥失重測定方法主要有下列四種:(一)常壓恒溫干燥法(二)干燥劑干燥法(三)減壓干燥法(四)熱分析法(一)常壓恒溫干燥法

本法適用于受熱較穩(wěn)定的藥物，中國藥典收載的藥物有重酒石酸間羥胺、度米芬、洋地黃毒苷、鹽酸乙胺丁醇、格列吡嗪、磺胺嘧啶銀、磷酸二氫鈉等40余種采用本法測定。1．方法將供試品置于相同條件下已干燥至恒重的扁形稱量瓶中，在烘箱內(nèi)于規(guī)定溫度下干燥至恒重，由減失的重量和取樣量即可計算供試品的干燥失重。2.注意事項（1）干燥溫度一般為105℃。干燥時間，除另有規(guī)定外，根據(jù)含水量的多少，一般在達(dá)到指定溫度±2℃干燥至2～4h恒重為止。（2）為了使水分及揮發(fā)性物質(zhì)易于揮散，供試品應(yīng)平鋪于扁形稱量瓶中，其厚度不超過5mm。如為疏松物質(zhì)，厚度不超過10mm。大顆粒結(jié)晶藥物，應(yīng)先研細(xì)至粒度約2mm。（3）放入烘箱進(jìn)行干燥時，應(yīng)將瓶蓋取下，置稱量瓶旁，或?qū)⑵可w半開進(jìn)行干燥。取出時，須先將瓶蓋蓋好，置干燥器中放冷至室溫，然后稱定重量。（4）有的藥物含有較多結(jié)晶水，在105℃不易除去，可提高干燥溫度。如磷酸氯喹在105℃下干燥時，失重緩慢，不易恒重。經(jīng)試驗，改用120℃干燥，數(shù)小時即恒重。（5）某些藥物中含有較大量的水分，熔點(diǎn)又較低，如直接在105℃干燥，供試品易融化，表面結(jié)成一層薄膜，使水分不易繼續(xù)揮發(fā)。例如硫代硫酸鈉含5分子結(jié)晶水，理論含水量達(dá)36.3％，但其在48.2℃以上出現(xiàn)熔化現(xiàn)象，不便于直接高溫加熱。試驗時采用先于40～50℃加熱，使結(jié)晶水緩緩釋去；然后逐漸升高溫度，在105℃干燥至恒重的方式。（6）供試品為膏狀物，應(yīng)先取一含洗凈粗砂粒及一小玻棒的稱量瓶于規(guī)定條件下干燥至恒重，然后稱入一定量的供試品，用玻棒攪勻、干燥，并在干燥過程中攪拌數(shù)次，促使水分揮發(fā)，直至恒重。

（7）某些易吸濕、或受熱發(fā)生相變而達(dá)不到恒重的藥物，可采用一定溫度下、干燥一定時間所減失的重量代表干燥失重。右旋糖酐40極易吸濕，經(jīng)多次干燥，仍不易恒重，空氣濕度較大時，恒重更為困難。中國藥典規(guī)定在105℃干燥6h后，減失重量不得超過5.0％。

(二)干燥劑干燥法本法適用于受熱分解、或易于揮發(fā)的供試品。中國藥典收載的藥物如氯化銨、苯佐卡因、硝酸異山梨酯、馬來酸麥角新堿等采用本法測定。1．方法將供試品置干燥器中，利用干燥器內(nèi)的干燥劑吸收水分，干燥至恒重。2.注意事項藥典中常用的干燥劑有硅膠、硫酸和五氧化二磷等。（1）五氧化二磷的吸水效率、吸水容量和吸水速度均較好。使用時需將干燥劑鋪于培養(yǎng)皿中，置于干燥器內(nèi)。若發(fā)現(xiàn)干燥劑表層結(jié)塊、出現(xiàn)液滴，應(yīng)將表層刮去，另加新的五氧化二磷再使用；棄去的五氧化二磷不可倒入下水道，應(yīng)埋入土中。五氧化二磷價格較貴，且不能反復(fù)使用。（2）硫酸的吸水效率與吸水速度次于五氧化二磷，但吸水容量比五氧化二磷大，價格也較便宜；使用時，應(yīng)將硫酸盛于培養(yǎng)皿或燒杯中，不能直接傾入干燥器；搬動干燥器時，應(yīng)注意勿使硫酸濺出；用過的硫酸經(jīng)加熱除水后可再用。除水的方法是：將含水硫酸置燒杯中加熱至冒白煙、保持在110℃左右約30min，即可除水。（3）硅膠的吸水效率僅次于五氧化二磷，大于硫酸。試驗用硅膠為變色硅膠，其中加有氯化鈷。無水氯化鈷呈藍(lán)色，吸水后含兩分子結(jié)晶水時而呈淡紅色，于140℃下干燥后又可恢復(fù)為無水物。變色硅膠具有使用方便、價廉、無腐蝕性且可重復(fù)使用的特點(diǎn)，為最常用的干燥劑。(三)減壓干燥法適用于熔點(diǎn)低、受熱不穩(wěn)定或難驅(qū)除水分的藥物。中國藥典收載的藥物有鹽酸阿糖胞苷、鹽酸去甲萬古霉素、山梨醇、乙酰半胱氨酸、癸氟奮乃靜等多種。1.原理

在減壓條件下可降低干燥溫度和縮短干燥時間。2.方法在一定溫度下，采用減壓干燥器或恒溫減壓干燥箱干燥，壓力應(yīng)控制在2.67kPa(20mmHg)以下。如鹽酸去甲萬古霉素引濕性強(qiáng)，中國藥典將本品在干燥條件下研細(xì)后，經(jīng)60℃減壓干燥4h，以檢查其失重。3.注意事項減壓干燥器初次使用時，應(yīng)用厚布包好再進(jìn)行減壓，以防炸裂傷人。開蓋時，因器外壓力大于內(nèi)壓，必須先將活塞緩緩旋開，使空氣緩緩進(jìn)入，勿使氣流進(jìn)入太快，將稱量瓶中的供試品吹散；在供試品取出后應(yīng)立即關(guān)閉活塞。

(四)熱分析法在程序控制溫度的情況下，測定物質(zhì)的物理、化學(xué)變化與溫度關(guān)系的一類儀器分析方法稱為熱分析法。優(yōu)點(diǎn)：具有樣品用量少，靈敏、快速等；應(yīng)用：用于物質(zhì)的熔點(diǎn)、多晶型、純度、溶劑化物、水分及熱解產(chǎn)物的測定。方法熱重分析法差示熱分析法差示掃描量熱法具體的內(nèi)容請自己學(xué)習(xí)并作為作業(yè)布置十三、有機(jī)溶劑殘留量測定法

在藥物的合成、精制以及提取過程中，常常要使用有機(jī)溶劑。不少有機(jī)溶劑對人體有害，殘留在藥物中勢必影響用藥的安全。因此，中國藥典于1995年版起正式收載“有機(jī)溶劑殘留量測定法”，用以檢查藥物在生產(chǎn)過程中引入的有害有機(jī)溶劑，包括苯、氯仿、1，4-二氧六環(huán)、二氯甲烷、吡啶、甲苯及環(huán)氧乙烷等。如果生產(chǎn)過程中還涉及其他有害的有機(jī)溶劑，則在該品種的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中另作規(guī)定。定義:藥物中的殘留溶劑（ResidualSolvent）系指在原料藥或輔料的生產(chǎn)中，以及在制劑制備過程中使用的，但在工藝過程中未能完全去除的有機(jī)溶劑。研究的性質(zhì)：雜質(zhì)研究的范疇研究的目的:控制藥物質(zhì)量，保障病人用藥安全。殘留溶劑的基本特征:特指有機(jī)揮發(fā)性化合物在藥品生產(chǎn)過程中使用過在藥品生產(chǎn)過程中應(yīng)當(dāng)去除而未除盡種類相對固定，ICH規(guī)定了69種在具體樣品中具有不確定性殘留量相對較低，在痕量或微量范圍同一樣品中不同溶劑的殘留量相差較大有機(jī)溶劑的分類類別毒性PDE（mg/天）第一類溶劑人體致癌物、疑為人體致癌物或環(huán)境危害物0.1以下(1,1,1)三氯乙烷除外第二類溶劑有非遺傳致癌毒性或其他不可逆毒性、或其他嚴(yán)重的可逆毒性0.5-50第三類溶劑對人體低毒50以上第四類溶劑沒有足夠毒性資料有機(jī)溶劑的引入根據(jù)研究對象具體情況有機(jī)溶劑毒性分析有機(jī)溶劑的引入確定何種有機(jī)溶劑需要進(jìn)行研究研究方法的建立及方法學(xué)驗證研究結(jié)果的分析及質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的建立有機(jī)溶劑的引入原料藥/輔料：合成過程中引入包括：作為合成原料或反應(yīng)溶劑引入作為反應(yīng)副產(chǎn)物引入由其他合成原料或其他溶劑帶入制劑各種成份（原料藥、輔料）帶入制劑制備過程中引入有機(jī)溶劑的引入研究集中在：原料藥的第一種情況（合成）影響因素：有機(jī)溶劑在合成過程中使用的步驟后續(xù)步驟中使用的有機(jī)溶劑對之前使用的溶劑的影響中間體的影響（中間體的純化方法、干燥條件）終產(chǎn)品精制方法和條件等等有機(jī)溶劑的引入

制劑

控制原料藥的殘留溶劑，最終目的是控制制劑的殘留溶劑，使之符合規(guī)定。有時候根據(jù)制劑的一些特點(diǎn)，可能對原料藥殘留溶劑的研究和限度要求進(jìn)行特殊性的考慮。

有機(jī)溶劑的引入

制劑及其臨床應(yīng)用特點(diǎn)劑型、給藥途徑處方

工藝適應(yīng)癥劑量、用藥周期《中國藥典》采用氣相色譜法檢查殘留有機(jī)溶劑。使用填充柱，內(nèi)裝直徑為0.25～0.18mm的二乙烯苯—乙基乙烯苯型高分子多孔小球作為固定相，以氮?dú)鉃檩d氣，氫火焰離子化檢測器檢測，柱溫為80～170℃。氣相色譜法（GC法）：為殘留溶劑檢測的首選方法，2010版中國藥典推薦采用頂空毛細(xì)管氣相色譜法。特點(diǎn)：分離效率高、速度快；檢測靈敏度高，選擇性好；樣品用量少，基本可以滿足所有殘留溶劑測定的要求。

進(jìn)樣方法

直接進(jìn)樣：沸點(diǎn)高的溶劑或受熱不易分解的樣品優(yōu)點(diǎn)：簡便、無需專用設(shè)備，絕對進(jìn)樣量大，檢測靈敏度較高缺點(diǎn)：污染進(jìn)樣口及柱子，溶劑峰響應(yīng)大，樣品分解產(chǎn)物或溶劑雜質(zhì)峰可能影響測定，對溶劑的純度要求高十四、水分測定法藥品中的水分包括結(jié)晶水和吸附水。過多的水分可使藥物的含量降低，還可導(dǎo)致藥物的水解、霉變，從而直接影響其理化性狀及生理作用。應(yīng)對藥品中的水分進(jìn)行限量控制?！吨袊幍洹?2005年版)采用費(fèi)休氏法和甲苯法測定藥物中的水分，尤以費(fèi)休法為主。（一）費(fèi)休水分測定法特點(diǎn)：操作簡便、專屬性強(qiáng)、準(zhǔn)確度高，適用于受熱易被破壞的藥物，因而成為國際上通用的水分測定法。USP(25版)、BP(2000年版)、JP(14版)亦均采用此法測定水分。費(fèi)休水分測定法為非水氧化還原滴定反應(yīng)，采用的標(biāo)準(zhǔn)滴定液稱費(fèi)休試液，是由碘、二氧化硫、吡啶和甲醇按一定比例組成。其它課程已學(xué)

（二）甲苯法甲苯法常被用于測定顏色較深的藥品或氧化劑、還原劑、皂類、油類等藥品中的水分。子任務(wù)三特殊雜質(zhì)的檢查方法藥物除檢查一般雜質(zhì)外，還需檢查可能存在的特殊雜質(zhì)，由于藥物品種不同，所含的特殊雜質(zhì)不同（與不同藥物的生產(chǎn)、貯存有關(guān)）。檢查方法也不同，一般按藥物和雜質(zhì)在物理、化學(xué)性質(zhì)上的差異，采用物理、化學(xué)方法檢查。一、利用藥物和雜質(zhì)在物理性質(zhì)上的差異

（一）臭味及揮發(fā)性質(zhì)的差異例如：黃凡士林中異性有機(jī)物檢查：本品2.0g,直火加熱無辛味。濃過氧化氫中不揮發(fā)性雜質(zhì)檢查：10ml水浴蒸干殘渣＜15mg

（二）顏色差異例如：磺胺嘧啶中有色偶氮苯化合物的檢查：取本品2.0g，加NaOH試液10ml，加水25ml，與黃色3號比色液比，

不得更深。

（三）溶解行為的差異例如：吡哌酸中堿中不溶物吡哌酸甲酯（I）和（II）檢查（四）旋光性質(zhì)的差異例如：硫酸阿托品中莨菪堿的檢查：本品溶液(50mg/ml)α＜-0.4

（五）對光吸收性質(zhì)的差異

1.紫外分光光度法：例如:地蒽酚中二羥基蒽醌的檢查

再如：苯丙醇中苯丙酮的檢查：可利用供試液的吸收度比來控制雜質(zhì);純品苯丙醇A247nm/A258nm=0.59;99.5%時A247nm/A258nm=0.79;

因此規(guī)定供試品A247nm/A258nm

＜0.79;即所含苯丙酮＜

0.5%.

2.原子吸收分光光度法：是通過測定藥物中所含待測元素原子蒸氣，吸收發(fā)自光源的該元素特定波長的程度，以求出藥物中待測元素的含量。限量檢查時：對照品液=供試品+限量-----a

供試品液=------------------b

符合規(guī)定時b＜(a-b);b＞(a-b)不合格。

3.紅外分光光度法：

主要用于藥物中無效或低效晶型檢查，如甲苯咪唑中A晶型檢查

A晶型C晶型在640cm-1有強(qiáng)吸收吸收很弱在662cm-1吸收很弱有強(qiáng)吸收

662cm-1640cm-1662cm-1640cm-1

供試品+10%A晶型D2D1

供試品D2D1＜10%R=D1/D2

＞R’=D’1/D’2

4.熒光分析法

3,4-二去氫利血平利血平中氧化產(chǎn)物檢查：利血平(無熒光)(I)(黃綠色熒光)3,4,5,6-四去氫利血平

(II)(藍(lán)色熒光)(六)吸附或分配性的差異

1.薄層色譜法(TLC)

(1)雜質(zhì)對照品法例如:鹽酸左旋咪唑中檢查硅膠G2,3-二氫-6-苯基咪唑[2,1-b]噻唑鹽苯:甲醇:冰HAC

樣品

對招品?！ぁぁぁぁ?/p>

(2)高低濃度對比品法例如:鹽酸異丙嗪中有關(guān)物質(zhì)的檢查硅膠G

有多個雜質(zhì)而且結(jié)構(gòu)不清樣品10mg/ml;對照品(1)0.15mg/ml己烷:丙酮:乙胺

(2)0.05mg/ml

樣品液對(1)(2)

供試液雜質(zhì)斑點(diǎn)不多于3個;雜質(zhì)斑點(diǎn)與對照(2)的主斑點(diǎn)比較,不得更深;如有一點(diǎn)超過,應(yīng)不深于對照液(2)的主斑點(diǎn).......

....

...

2.紙層析法(PC)

常用于極性大的藥物的分離、分析，如地高辛中的有關(guān)雜質(zhì)的檢查。3.高效液相色譜法(HPLC)①峰面積歸一化法：②不加校正因子的主成分自身對照法(TLC中高低濃度對照法）：③加校正因子的主成分自身對照法④內(nèi)標(biāo)法測定樣品中雜質(zhì)的總量限度：⑤外標(biāo)法測定供試品中某個雜質(zhì)限量：4.GC已廣泛用于藥物的含量測定和雜質(zhì)檢查（同HPLC)

示例：阿司匹林原料藥檢查之一游離水楊酸取本品約0.1g,精密稱定,置10ml量瓶中，加1%醋酸甲醇適量,振搖溶解,并稀釋至刻度，搖勻，作為供試試品溶液(臨用新配)；取水楊酸對照品約10mg,精密稱定,置100ml量瓶中，加1%醋酸甲醇適量,振搖溶解,并稀釋至刻度，搖勻，精密量取5ml,置50ml量瓶中,用1%醋酸甲醇適量,振搖溶解,并稀釋至刻度，搖勻，作為對照品溶液。照高效液相色譜法（附錄ⅤD）試驗。用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以乙腈-四氫呋喃-冰醋酸-水（20：5：5：70）為流動相；檢測波長為303nm。理論板數(shù)按水楊酸峰計算不低于5000，阿司匹林主峰與水楊酸主峰分離度應(yīng)符合要求。立即精密量取供試品溶液、對照品溶液各10μl，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖。供試品溶液色譜圖中如有與水楊酸色譜峰保留時間一致的色譜峰，按外標(biāo)法以峰面積計算供試品中水楊酸含量，含水楊酸不得過0.1%。有關(guān)物質(zhì)略二、利用藥物和雜質(zhì)在化學(xué)性上的差異（一）酸堿性的差異

1.規(guī)定消耗滴定液體積例如己酸羥孕酮中正己酐、對甲苯磺酸檢查：(NaOH0.02mol/L)

取本品0.20g+中