HIV實驗質量控制與質量管理程序

HIV實驗質量控制與質量管理程序目的：為HIV實驗室各技術人員統一實驗操作程序，確保明驗檢測質量，特制訂本程序。合用范疇：合用于HIV實驗室技術人員。規(guī)范性引用文獻：《全國艾滋病檢測技術規(guī)范》（）。有關器材設備：酶標儀、洗板機、原則血清。安全防護器材與方法：一次性乳膠手套、隔離衣、口罩、帽子，取用試劑時應把試劑視作感染性材料看待。首先穿好一次性隔離衣，戴好口罩、帽子，最后戴好乳膠手套后再接觸試劑進行實驗。操作環(huán)節(jié)：在每次實驗中必須包含有內部對照質控血清和外部對照質控血清。內部對照質控血清指試劑盒內提供的陽性和陰性對照血清。內部對照是質量控制的基礎。每一次檢測必須按照試劑盒使用闡明書使用內部對照，并且只能在同批號的試劑盒中使用。外部對照質控血清是為了監(jiān)控檢測的重復性和穩(wěn)定性以及試劑盒批間或孔間差別而由實驗室設立的一套對照血清，涉及強陽性、弱陽性和陰性對照血清。也能夠只設立一種弱陽性對照，以該試劑盒臨界值（Cut-off）的23倍為宜。6.1質控血清的制備和保存（以ELISA實驗檢測HIV抗體為例）6.1.1外部對照質控血清的制備HIV抗體陽性和陰性血清，56℃30min滅活，3000r/min，離心15min。弱陽性對照能夠用HIV抗體陰性血清梯度稀釋HIV抗體強陽性血清并標定后得到。按一年使用量配制（可加入不影響檢測成果的防腐劑）用0.2μm6.1.2外部對照質控血清的保存6.1.2.1按一周實驗用量分裝、分類、標記、封口、-20℃6.1.2.2外部對照血清不可重復凍融，一旦融化后應當寄存28℃6.1.3外部對照質控血清的使用每一次實驗必須使用外部對照質控血清，方便監(jiān)控實驗的重復性和穩(wěn)定性。同時能夠理解各批試劑盒的批間或孔間差別，繪制質量控制圖。6.1.4外部對照質控物的質量規(guī)定質控物的管間或瓶間變異必須不大于監(jiān)測系統預期的變異（cv＜20%），并且質控物的成分應在穩(wěn)定狀態(tài)中。質控物應無菌，并不含有影響ELISA反映的防腐劑。6.2質控圖的建立及應用（以ELISA實驗檢測HIV抗體為例）最慣用的質控圖是Levey-Jennings質控圖，使用累計和技術或趨勢分析技術的圖形可提供系統偏移和漂移的狀況。6.2.1建立質控圖參數外部對照質控物的平均值和原則差應建立在實驗室常規(guī)使用辦法對質控物重復測定的基礎上。普通采用在不同批次檢測獲得最少20個數據；如果僅做少量批次的檢測，也最少做5個批次的檢測，每個批次中不少于4個質控物測定成果，以建立一種臨時性的平均值和原則差，當達成20批次數據后，替代臨時性的平均值和原則差。6.2.1.1算術平均值()：代表一組S/CO值的平均值。為了統計學上有明顯性意義，應當采用最少20次(天)所測得的外部對照質控血清S/CO值成果計算出平均值。6.2.1.2原則差(s)：是描述樣品與均數之間離散程度的一種指標，是與對照質控血清S/CO值均值有關的預期范疇。一組S/CO值的原則差以s表達。6.2.1.3變異系數(cv)：是反映各次S/CO值相對于均值離散程度的一種指標，能夠用來衡量檢測的重復性或精密度。6.2.1.4控制限：由實驗室根據對質控物檢測成果的平均值和原則差來擬定。例如12S質控規(guī)則的控制限為外部對照S/CO平均值加減2個原則差；13S質控規(guī)則的控制限為外部對照S/CO平均值加減3個原則差。計算公式為：Σx=──ns計算公式為：───────∑(xn-)2s=───────n-1cv計算公式為：scv=──-x100%6.2.2繪制質控圖質控圖是把檢測數據與已擬定的（計算出的）“控制限”進行比較的圖，包含一條中心橫線和其上、下兩條平行的控制線，并準時間次序點入本實驗室每次實驗質控血清的測定值。質控圖的繪制環(huán)節(jié)：6.2.2.1在常規(guī)條件下，對同一批血清持續(xù)測定20次（天）或以上，獲得一組S/CO值，求均數()和原則差(s),超出2s或3s的數據不應刪除。6.2.2.2將均值()和原則差(s)分別在質控框架圖中標示出來。以S/CO值作縱座標(Y軸)，每一次(天)實驗作橫座標(x軸)，繪制質控圖。6.2.2.3從第21次起，將每次質控血清的檢測成果依次點入該質控框架圖中，檢查進入質控狀態(tài)。6.2.3質控規(guī)則及使用實驗室在報告實驗成果之前必須評價質控數據，可通過圖形統計的檢查或由計算機審核成果來決定?，F在許多質控規(guī)則已被采用，慣用的是12S和13S規(guī)則。6.2.3.1告警（12S）：當外部對照的S/CO值超出+2s范疇時，系統處在告警狀態(tài)，應予注意，與否能夠繼續(xù)檢測需要進一步觀察。若將12S做失控原則，有較高的假失控概率，因此普通不采用。6.2.3.2失控（13S）：當外部對照的S/CO值超出+3s范疇時，系統處在失控狀態(tài)，本次實驗成果不能被接受，可能是系統誤差、隨機誤差或外部對照滴度下降造成。6.2.3.3位移：持續(xù)幾次（35次）外部對照S/CO值都落在均值的一側則稱為位移，提示實驗條件發(fā)生了較大的變化。6.2.3.4趨勢：持續(xù)幾次（57次）外部對照S/CO值幾乎按一種方向分布時稱為趨勢，普通由參數的緩慢變化引發(fā)。質控規(guī)則的使用應檢出隨機誤差和系統誤差，即含有高的檢出分析誤差的能力，同時應含有較低的假失控概率?？疾鞂嶒炏到y的可靠性應采用多原則質控方案，多規(guī)則質控辦法能提高誤差檢出，并含有低的假失控概率。其要點為：出現一次2s范疇的變化時，系統處在告警狀態(tài)，應予注意，與否能夠繼續(xù)檢測需要進一步觀察。出現下列狀況時，應暫停檢測查找因素：出現一次3s范疇的變化、持續(xù)兩次出現同一方向2s范疇的變化、持續(xù)四次出現同一方向的1s范疇的變化、持續(xù)10次成果都在1s范疇內，但落在均值線的同一側。6.2.4質控圖的分析及失控解決實驗室應建立質控圖分析及失控狀況解決程序。當質控已有計劃并恰本地執(zhí)行時，規(guī)定可靠的平均值和原則差用于計算質控限，將假失控概率降到最低。當出現失控時進行如重復質控測定或重新分析新的質控物不是最有效的辦法，必須找出問題因素，找出解除故障的辦法，并消除因素，避免將來出現同樣的問題。6.2.5繪制和分析質控圖的要點6.2.5.1要在常規(guī)條件下建立質控圖參數，用S/CO比值繪制質控圖。對同一批質控物持續(xù)測定得到20個數據，求均值()和原則差(s),超出2s或3s的數據不應刪除。6.2.5.2由專人負責建立質控圖，每月定時召開質控分析會，討論本月的質量控制狀況。6.2.5.3建議長久和穩(wěn)定地使用一種質量好的試劑盒，更換不同廠家的試劑盒后，必須重新繪制質控圖。改用新批號試劑盒也應重新制作質控圖。使用新批號或不同廠家的試劑盒必須在質控圖上注明使用日期。6.2.5.4發(fā)現質控成果失控，應填寫報告單，上交質量負責人，分析因素并決定與否發(fā)出檢測報告。6.2.5.5使用新批次的外部對照質控物時，必須重新繪制質控圖。變異系數(cv)不大于20％，表達外部對照處在穩(wěn)定狀態(tài)。6.3“即刻法”質控“即刻法”質控辦法是在對同一批外部質控血清持續(xù)測定3次后，即可對第3次檢查成果進行質控。具體計算辦法以下：6.3.1將質控血清的測定值從小到大排列：x1，x2，x3……xn(x1為最小值，xn為最大值)。6.3.2計算和s。6.3.3計算SI上限值和SI下限值。SI上限=X最大值-sSI下限=-X最小值s6.3.4將SI上限、SI下限與SI值表（表7）中的數字比較。表7SI值表nn3sN2snn3sn2s31.161.15122.552.2941.491.46132.612.3351.751.67142.662.3761.941.82152.712.4172.101.94162.752.4482.222.03172.792.4792.322.11182.822.50102.412.18192.852.53112.482.23202.882.56（1）當SI上限和SI下限<n2s時表達處在控制范疇內，能夠繼續(xù)測定。繼續(xù)重復以上各項計算。（2）當SI上限和SI下限有一值處在n2s~n3s值之間時闡明該值在2s3s范疇，處在“告警”狀態(tài)。（3）當SI上限和SI下限有一值>n3s值時闡明該值已在3s范疇之外，屬“失控”。數值處在“告警”和“失控”狀態(tài)應舍去，需重新測定該質控血清和病人樣品。舍去的只是失控的這次數值，其它測定值仍可繼續(xù)使用。6.4注意事項：出現一次2s范疇的變化時，系統處在告警狀態(tài)，應予注意，與否能夠繼續(xù)檢測需要進一步觀察。出現下列狀況時，應暫停檢測查找因素：出現一次3s范疇的變化、持續(xù)兩次出現同一方向2s范疇的變化、持續(xù)四次出現同一方向的1s范疇的變化、持續(xù)十次成果都在1s范疇內，但落在均值線的同一側。6.5繪制和分析質控圖的要點：（1）要在最佳條件下建立質控圖參數。（2）用S/CO比值繪制質控圖。（3）由專人負責建立質控圖，每月定時召開質控分析會，討論本月的質量