HIV實(shí)驗(yàn)質(zhì)量控制與質(zhì)量管理程序

HIV實(shí)驗(yàn)質(zhì)量控制與質(zhì)量管理程序目的：為HIV實(shí)驗(yàn)室各技術(shù)人員統(tǒng)一實(shí)驗(yàn)操作程序，確保明驗(yàn)檢測質(zhì)量，特制訂本程序。合用范疇：合用于HIV實(shí)驗(yàn)室技術(shù)人員。規(guī)范性引用文獻(xiàn)：《全國艾滋病檢測技術(shù)規(guī)范》（）。有關(guān)器材設(shè)備：酶標(biāo)儀、洗板機(jī)、原則血清。安全防護(hù)器材與方法：一次性乳膠手套、隔離衣、口罩、帽子，取用試劑時(shí)應(yīng)把試劑視作感染性材料看待。首先穿好一次性隔離衣，戴好口罩、帽子，最后戴好乳膠手套后再接觸試劑進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。操作環(huán)節(jié)：在每次實(shí)驗(yàn)中必須包含有內(nèi)部對照質(zhì)控血清和外部對照質(zhì)控血清。內(nèi)部對照質(zhì)控血清指試劑盒內(nèi)提供的陽性和陰性對照血清。內(nèi)部對照是質(zhì)量控制的基礎(chǔ)。每一次檢測必須按照試劑盒使用闡明書使用內(nèi)部對照，并且只能在同批號的試劑盒中使用。外部對照質(zhì)控血清是為了監(jiān)控檢測的重復(fù)性和穩(wěn)定性以及試劑盒批間或孔間差別而由實(shí)驗(yàn)室設(shè)立的一套對照血清，涉及強(qiáng)陽性、弱陽性和陰性對照血清。也能夠只設(shè)立一種弱陽性對照，以該試劑盒臨界值（Cut-off）的23倍為宜。6.1質(zhì)控血清的制備和保存（以ELISA實(shí)驗(yàn)檢測HIV抗體為例）6.1.1外部對照質(zhì)控血清的制備HIV抗體陽性和陰性血清，56℃30min滅活，3000r/min，離心15min。弱陽性對照能夠用HIV抗體陰性血清梯度稀釋HIV抗體強(qiáng)陽性血清并標(biāo)定后得到。按一年使用量配制（可加入不影響檢測成果的防腐劑）用0.2μm6.1.2外部對照質(zhì)控血清的保存6.1.2.1按一周實(shí)驗(yàn)用量分裝、分類、標(biāo)記、封口、-20℃6.1.2.2外部對照血清不可重復(fù)凍融，一旦融化后應(yīng)當(dāng)寄存28℃6.1.3外部對照質(zhì)控血清的使用每一次實(shí)驗(yàn)必須使用外部對照質(zhì)控血清，方便監(jiān)控實(shí)驗(yàn)的重復(fù)性和穩(wěn)定性。同時(shí)能夠理解各批試劑盒的批間或孔間差別，繪制質(zhì)量控制圖。6.1.4外部對照質(zhì)控物的質(zhì)量規(guī)定質(zhì)控物的管間或瓶間變異必須不大于監(jiān)測系統(tǒng)預(yù)期的變異（cv＜20%），并且質(zhì)控物的成分應(yīng)在穩(wěn)定狀態(tài)中。質(zhì)控物應(yīng)無菌，并不含有影響ELISA反映的防腐劑。6.2質(zhì)控圖的建立及應(yīng)用（以ELISA實(shí)驗(yàn)檢測HIV抗體為例）最慣用的質(zhì)控圖是Levey-Jennings質(zhì)控圖，使用累計(jì)和技術(shù)或趨勢分析技術(shù)的圖形可提供系統(tǒng)偏移和漂移的狀況。6.2.1建立質(zhì)控圖參數(shù)外部對照質(zhì)控物的平均值和原則差應(yīng)建立在實(shí)驗(yàn)室常規(guī)使用辦法對質(zhì)控物重復(fù)測定的基礎(chǔ)上。普通采用在不同批次檢測獲得最少20個(gè)數(shù)據(jù)；如果僅做少量批次的檢測，也最少做5個(gè)批次的檢測，每個(gè)批次中不少于4個(gè)質(zhì)控物測定成果，以建立一種臨時(shí)性的平均值和原則差，當(dāng)達(dá)成20批次數(shù)據(jù)后，替代臨時(shí)性的平均值和原則差。6.2.1.1算術(shù)平均值()：代表一組S/CO值的平均值。為了統(tǒng)計(jì)學(xué)上有明顯性意義，應(yīng)當(dāng)采用最少20次(天)所測得的外部對照質(zhì)控血清S/CO值成果計(jì)算出平均值。6.2.1.2原則差(s)：是描述樣品與均數(shù)之間離散程度的一種指標(biāo)，是與對照質(zhì)控血清S/CO值均值有關(guān)的預(yù)期范疇。一組S/CO值的原則差以s表達(dá)。6.2.1.3變異系數(shù)(cv)：是反映各次S/CO值相對于均值離散程度的一種指標(biāo)，能夠用來衡量檢測的重復(fù)性或精密度。6.2.1.4控制限：由實(shí)驗(yàn)室根據(jù)對質(zhì)控物檢測成果的平均值和原則差來擬定。例如12S質(zhì)控規(guī)則的控制限為外部對照S/CO平均值加減2個(gè)原則差；13S質(zhì)控規(guī)則的控制限為外部對照S/CO平均值加減3個(gè)原則差。計(jì)算公式為：Σx=──ns計(jì)算公式為：───────∑(xn-)2s=───────n-1cv計(jì)算公式為：scv=──-x100%6.2.2繪制質(zhì)控圖質(zhì)控圖是把檢測數(shù)據(jù)與已擬定的（計(jì)算出的）“控制限”進(jìn)行比較的圖，包含一條中心橫線和其上、下兩條平行的控制線，并準(zhǔn)時(shí)間次序點(diǎn)入本實(shí)驗(yàn)室每次實(shí)驗(yàn)質(zhì)控血清的測定值。質(zhì)控圖的繪制環(huán)節(jié)：6.2.2.1在常規(guī)條件下，對同一批血清持續(xù)測定20次（天）或以上，獲得一組S/CO值，求均數(shù)()和原則差(s),超出2s或3s的數(shù)據(jù)不應(yīng)刪除。6.2.2.2將均值()和原則差(s)分別在質(zhì)控框架圖中標(biāo)示出來。以S/CO值作縱座標(biāo)(Y軸)，每一次(天)實(shí)驗(yàn)作橫座標(biāo)(x軸)，繪制質(zhì)控圖。6.2.2.3從第21次起，將每次質(zhì)控血清的檢測成果依次點(diǎn)入該質(zhì)控框架圖中，檢查進(jìn)入質(zhì)控狀態(tài)。6.2.3質(zhì)控規(guī)則及使用實(shí)驗(yàn)室在報(bào)告實(shí)驗(yàn)成果之前必須評價(jià)質(zhì)控?cái)?shù)據(jù)，可通過圖形統(tǒng)計(jì)的檢查或由計(jì)算機(jī)審核成果來決定。現(xiàn)在許多質(zhì)控規(guī)則已被采用，慣用的是12S和13S規(guī)則。6.2.3.1告警（12S）：當(dāng)外部對照的S/CO值超出+2s范疇時(shí)，系統(tǒng)處在告警狀態(tài)，應(yīng)予注意，與否能夠繼續(xù)檢測需要進(jìn)一步觀察。若將12S做失控原則，有較高的假失控概率，因此普通不采用。6.2.3.2失控（13S）：當(dāng)外部對照的S/CO值超出+3s范疇時(shí)，系統(tǒng)處在失控狀態(tài)，本次實(shí)驗(yàn)成果不能被接受，可能是系統(tǒng)誤差、隨機(jī)誤差或外部對照滴度下降造成。6.2.3.3位移：持續(xù)幾次（35次）外部對照S/CO值都落在均值的一側(cè)則稱為位移，提示實(shí)驗(yàn)條件發(fā)生了較大的變化。6.2.3.4趨勢：持續(xù)幾次（57次）外部對照S/CO值幾乎按一種方向分布時(shí)稱為趨勢，普通由參數(shù)的緩慢變化引發(fā)。質(zhì)控規(guī)則的使用應(yīng)檢出隨機(jī)誤差和系統(tǒng)誤差，即含有高的檢出分析誤差的能力，同時(shí)應(yīng)含有較低的假失控概率?？疾鞂?shí)驗(yàn)系統(tǒng)的可靠性應(yīng)采用多原則質(zhì)控方案，多規(guī)則質(zhì)控辦法能提高誤差檢出，并含有低的假失控概率。其要點(diǎn)為：出現(xiàn)一次2s范疇的變化時(shí)，系統(tǒng)處在告警狀態(tài)，應(yīng)予注意，與否能夠繼續(xù)檢測需要進(jìn)一步觀察。出現(xiàn)下列狀況時(shí)，應(yīng)暫停檢測查找因素：出現(xiàn)一次3s范疇的變化、持續(xù)兩次出現(xiàn)同一方向2s范疇的變化、持續(xù)四次出現(xiàn)同一方向的1s范疇的變化、持續(xù)10次成果都在1s范疇內(nèi)，但落在均值線的同一側(cè)。6.2.4質(zhì)控圖的分析及失控解決實(shí)驗(yàn)室應(yīng)建立質(zhì)控圖分析及失控狀況解決程序。當(dāng)質(zhì)控已有計(jì)劃并恰本地執(zhí)行時(shí)，規(guī)定可靠的平均值和原則差用于計(jì)算質(zhì)控限，將假失控概率降到最低。當(dāng)出現(xiàn)失控時(shí)進(jìn)行如重復(fù)質(zhì)控測定或重新分析新的質(zhì)控物不是最有效的辦法，必須找出問題因素，找出解除故障的辦法，并消除因素，避免將來出現(xiàn)同樣的問題。6.2.5繪制和分析質(zhì)控圖的要點(diǎn)6.2.5.1要在常規(guī)條件下建立質(zhì)控圖參數(shù)，用S/CO比值繪制質(zhì)控圖。對同一批質(zhì)控物持續(xù)測定得到20個(gè)數(shù)據(jù)，求均值()和原則差(s),超出2s或3s的數(shù)據(jù)不應(yīng)刪除。6.2.5.2由專人負(fù)責(zé)建立質(zhì)控圖，每月定時(shí)召開質(zhì)控分析會(huì)，討論本月的質(zhì)量控制狀況。6.2.5.3建議長久和穩(wěn)定地使用一種質(zhì)量好的試劑盒，更換不同廠家的試劑盒后，必須重新繪制質(zhì)控圖。改用新批號試劑盒也應(yīng)重新制作質(zhì)控圖。使用新批號或不同廠家的試劑盒必須在質(zhì)控圖上注明使用日期。6.2.5.4發(fā)現(xiàn)質(zhì)控成果失控，應(yīng)填寫報(bào)告單，上交質(zhì)量負(fù)責(zé)人，分析因素并決定與否發(fā)出檢測報(bào)告。6.2.5.5使用新批次的外部對照質(zhì)控物時(shí)，必須重新繪制質(zhì)控圖。變異系數(shù)(cv)不大于20％，表達(dá)外部對照處在穩(wěn)定狀態(tài)。6.3“即刻法”質(zhì)控“即刻法”質(zhì)控辦法是在對同一批外部質(zhì)控血清持續(xù)測定3次后，即可對第3次檢查成果進(jìn)行質(zhì)控。具體計(jì)算辦法以下：6.3.1將質(zhì)控血清的測定值從小到大排列：x1，x2，x3……xn(x1為最小值，xn為最大值)。6.3.2計(jì)算和s。6.3.3計(jì)算SI上限值和SI下限值。SI上限=X最大值-sSI下限=-X最小值s6.3.4將SI上限、SI下限與SI值表（表7）中的數(shù)字比較。表7SI值表nn3sN2snn3sn2s31.161.15122.552.2941.491.46132.612.3351.751.67142.662.3761.941.82152.712.4172.101.94162.752.4482.222.03172.792.4792.322.11182.822.50102.412.18192.852.53112.482.23202.882.56（1）當(dāng)SI上限和SI下限<n2s時(shí)表達(dá)處在控制范疇內(nèi)，能夠繼續(xù)測定。繼續(xù)重復(fù)以上各項(xiàng)計(jì)算。（2）當(dāng)SI上限和SI下限有一值處在n2s~n3s值之間時(shí)闡明該值在2s3s范疇，處在“告警”狀態(tài)。（3）當(dāng)SI上限和SI下限有一值>n3s值時(shí)闡明該值已在3s范疇之外，屬“失控”。數(shù)值處在“告警”和“失控”狀態(tài)應(yīng)舍去，需重新測定該質(zhì)控血清和病人樣品。舍去的只是失控的這次數(shù)值，其它測定值仍可繼續(xù)使用。6.4注意事項(xiàng)：出現(xiàn)一次2s范疇的變化時(shí)，系統(tǒng)處在告警狀態(tài)，應(yīng)予注意，與否能夠繼續(xù)檢測需要進(jìn)一步觀察。出現(xiàn)下列狀況時(shí)，應(yīng)暫停檢測查找因素：出現(xiàn)一次3s范疇的變化、持續(xù)兩次出現(xiàn)同一方向2s范疇的變化、持續(xù)四次出現(xiàn)同一方向的1s范疇的變化、持續(xù)十次成果都在1s范疇內(nèi)，但落在均值線的同一側(cè)。6.5繪制和分析質(zhì)控圖的要點(diǎn)：（1）要在最佳條件下建立質(zhì)控圖參數(shù)。（2）用S/CO比值繪制質(zhì)控圖。（3）由專人負(fù)責(zé)建立質(zhì)控圖，每月定時(shí)召開質(zhì)控分析會(huì)，討論本月的質(zhì)量