卷柏科5種藥材的顯微與薄層色譜鑒別研究

卷柏科5種藥材的顯微與薄層色譜鑒別研究

柏樹、側(cè)柏、江南柏樹、翠云草、柏樹和薄葉柏樹是柏樹科的五種材料。卷柏與墊狀卷柏在國內(nèi)局部地區(qū)分別作藥用,但通常又均作為中藥卷柏的來源,為中國藥典所收載;江南卷柏是抗癌中藥“石上柏”的來源之一(近年在亳州藥市上銷售的石上柏均為江南卷柏);薄葉卷柏亦曾在南寧市作為“石上柏”銷售;翠云草則作為地方習用藥材收載于廣西中藥材標準。上述5種藥材均具有廣泛藥理活性與療效,但因時有交叉混用,有必要進行較系統(tǒng)地比較鑒定研究,以提供其研究應(yīng)用的鑒別依據(jù)。1藥品樣品和試劑Olympus顯微鏡(日本Olympus光學工業(yè)株式會社);穗花杉雙黃酮對照品(中國藥品生物制品檢定所);5種藥材樣品[(卷柏、墊狀卷柏、江南卷柏、翠云草、薄葉卷柏)均自采于湖北省宜昌市霧渡河、車溪等地,學名由作者鑒定(江南卷柏、翠云草、薄葉卷柏由中國科學院植物研究所張憲春研究員核實)];硅膠G(青島海洋化工廠);試劑均為分析純。2顯微鏡結(jié)構(gòu)莖段橫截面2.1葉跡維管束結(jié)構(gòu)橫切面呈橢圓形。表皮細胞1列,壁厚,有時木化。表皮以內(nèi)(即外側(cè)皮層)為厚壁組織,可見10余列厚壁細胞,最外側(cè)數(shù)列細胞壁木化或微木化;厚壁組織中散列4個壁木化或微木化的纖維束;內(nèi)側(cè)皮層由薄壁細胞組成,呈圓多角形或類圓形,直徑約20μm。葉跡維管束2～4個,散列于皮層中,與纖維束相間排列。內(nèi)皮層不明顯。其內(nèi)為一卵圓形氣室,由內(nèi)皮層細胞分裂出的多數(shù)橫橋(絲狀體)將中柱懸于其中央,橫橋多由3～4個呈圓鼓狀或粗短管狀的薄壁細胞構(gòu)成。中柱呈長橢圓形或長條形,長徑260～380μm,短徑110～150μm;中柱鞘由1～3列薄壁細胞環(huán)列而成。維管束周韌型;木質(zhì)部管胞多呈圓多角形,直徑10～15μm,壁木化,詳見圖1A。本品莖先端部位橫切面有時可見2個氣室及2個中柱;也可見僅有一個氣室,但有2個中柱。2.2纖維環(huán)帶和橫橋形結(jié)構(gòu)與卷柏略似。主要區(qū)別為:表皮細胞多切向延長,壁木化。皮層主要為纖維群,10余列幾連成環(huán)帶狀;纖維環(huán)帶以內(nèi)為1至數(shù)列壁微木化或非木化的厚壁細胞,再內(nèi)為3～5列薄壁細胞,葉跡維管束多散列于皮層中的纖維環(huán)帶之內(nèi)。氣室長橢圓形或卵圓形。橫橋多由1～2個兩端鈍圓呈棒狀的細胞構(gòu)成。中柱長橢圓形,在氣室中占有較大比例;中柱鞘細胞1～2列,詳見圖1B。2.3細胞培養(yǎng)法或初犯橫切面呈類圓形、卵圓形或橢圓形。表皮細胞1列,多呈類圓形,直徑10～20μm,壁較厚。外側(cè)皮層有5～17列厚壁細胞,有時最外側(cè)幾列細胞壁微木化;其內(nèi)為圓多角形、多角形或類圓形的薄壁細胞,細胞較小,直徑10～40μm,排列緊密。內(nèi)皮層不明顯。氣室長條形,長徑820～1300μm,短徑200～330μm。橫橋多由1列(少2～4列)5～10余個呈蓮藕狀或香腸狀的薄壁細胞構(gòu)成;多列者各列相互平行或纏繞。中柱長條形,略短于氣室,短徑130～260μm;中柱鞘由2～4列薄壁細胞環(huán)列而成。維管束外韌型;木質(zhì)部長條形,管胞類圓形或多角形,直徑10～30μm,壁木化,詳見圖1C。2.4厚壁細胞組構(gòu)與江南卷柏的主要區(qū)別為:橫切面有2個相對的凹陷而略呈“8”字形或葫蘆狀。表皮細胞較小,直徑8～15μm。外側(cè)皮層僅有3～6列厚壁細胞,壁非木化;其內(nèi)的薄壁細胞較大。內(nèi)皮層明顯,細胞較小。中央具3個近平行的長橢圓形氣室,正中(或偏中)一個較大,兩側(cè)的較小,長徑375～750μm,短徑150～270μm。橫橋僅由單列的1～2(3)個細胞構(gòu)成。中柱呈長橢圓形或長條形;中柱鞘細胞2列。管胞較大,直徑30～45μm。有的外側(cè)皮層有1～4個較小的葉跡維管束,詳見圖1D。2.5細胞培養(yǎng)及細胞大、大小黨員,內(nèi)皮層多角形或長柱形態(tài)與江南卷柏略似。主要區(qū)別為:橫切面呈類方形、多角形或長圓形,有2～4個脊狀突起。外側(cè)皮層僅有3～5列厚壁細胞,內(nèi)側(cè)為數(shù)列至10余列較大的薄壁細胞,直徑25～90μm。內(nèi)皮層明顯。氣室多角形或卵圓形,直徑430～600μm,橫橋細胞單列,1～2(3)個,呈棒狀、長卵形或類圓形。中柱不規(guī)則卵形或長橢圓形;中柱鞘細胞1～2(5)列;木質(zhì)部多分隔為并列的大小2束,大者紡錘形或長條形,小者類圓形;管胞較大,直徑10～50μm,詳見圖1E。本品莖先端橫切面木質(zhì)部漸分為3束而呈“品”字形排列。3層析成像3.1穗花杉雙黃酮對照品溶液的制備分別取上述5種藥材樣品粉末(40目)各0.8g,分別加乙醇10mL,超聲處理30min,濾過,濾液分別濃縮至約1mL,作為供試品溶液。另取穗花杉雙黃酮對照品適量,加乙醇制成每1mL含0.5mg的對照品溶液。分別吸取上述6種溶液各3μL,分別點于同一CMC-硅膠G薄層板上,以甲苯-甲酸乙酯-甲酸(5∶4∶1)為展開劑,展開,展距約10cm,取出,晾干,噴10%三氯化鐵乙醇溶液,觀察顯色結(jié)果。見圖2。3.2各藥材添加量的確定5種藥材的薄層色譜有較大的相似性,但彼此間斑點的位置與數(shù)目,尤其是斑點的大小與顏色深淺互有差異,可以區(qū)別。各藥材供試品色譜與對照品色譜相對應(yīng)的位置上,均有相同的灰褐色斑點,說明5種藥材均含穗花杉雙黃酮。卷柏與墊狀卷柏的5個主斑點雖彼此對應(yīng),但卷柏多出3個弱斑點,可以將兩者區(qū)分;薄葉卷柏與江南卷柏均有8個對應(yīng)的斑點,但其大小與顏色深淺仍有明顯差異;翠云草的薄層色譜與其他藥材相比其區(qū)別更為明顯。4討論4.1細胞、中柱5種藥材(莖橫切面)具有許多顯著的共性特征,如外側(cè)皮層具機械組織;皮層薄壁細胞多呈圓多角形;中央有氣室;中柱由橫橋懸于氣室之中等等。但在莖橫切面形態(tài)、皮層是否具纖維、厚壁細胞的列數(shù)、氣室與中柱的數(shù)目及形態(tài)大小、構(gòu)成橫橋細胞的列數(shù)與個數(shù)、中柱鞘細胞的列數(shù)等等方面,均有顯著的不同,可用于各種藥材的鑒定。4.2薄層色譜鑒定法5種藥材薄層色譜有一定差異,可藉以鑒別。由于各藥材在植物來源上屬近緣種,均含穗花杉雙黃酮,僅以對照品無法用于種的鑒定,像這類近緣種類植物藥的薄層色譜鑒定,應(yīng)同時以對照藥材作對照。從薄層色譜結(jié)果還可看出,卷柏與墊狀卷柏的5個主斑點均一一對應(yīng),說明二者主要化學成分類同,同作為中藥卷柏的來源有其合理性;薄葉卷柏與江南卷柏所有斑點均對應(yīng),提示二者在化學本質(zhì)上確定十分相似,薄葉卷柏在局部地區(qū)與江南卷柏同等入藥有一定理由。4.3種類劃分難確