eb病毒感染與鼻咽癌變

eb病毒感染與鼻咽癌變

由于廣州是癌癥的高發(fā)區(qū)，珠江三角洲的癌癥被稱為廣州腫瘤。中山大學(xué)中山醫(yī)學(xué)院地處廣州,早在上世紀50年代,即已將鼻咽癌作為一項醫(yī)學(xué)重點科研項目。20世紀50,60年代,我們曾多次組隊和參與廣東全省的鼻咽癌普查,指出鼻咽癌的高發(fā)區(qū)位于西江沿岸和珠江三角州地區(qū)。目前多數(shù)學(xué)者認為,EB病毒感染、化學(xué)致癌物及遺傳易感性是鼻咽癌的3大致病因素。EB病毒在鼻咽癌變中的作用如何,可從多個角度去探索。腫瘤流行病學(xué)者可從流行病學(xué)方面,病毒學(xué)者可從病毒生物學(xué)方面,而我們則著重從病理學(xué)方面去探索EB病毒在鼻咽癌變中的作用。現(xiàn)將近年來作者所參加的研究結(jié)果綜合報道如下。1胞是否有eb病毒試驗檢測在我國南方,EB病毒早在幼兒期,即4歲以前已感染人群。近年來廣州地區(qū)各醫(yī)院發(fā)現(xiàn),感染EB病毒的年齡在推遲,常在11~12歲,甚至成年后才被感染,情況與歐美人群感染EB病毒逐漸相似了。兒童傳染性單核細胞增多癥的發(fā)現(xiàn)率也似乎增高了。我們曾報道2例致死性傳染性單核細胞增多癥的尸解以及1例成人傳染性單核細胞增多癥。EB病毒在人群中的感染有地區(qū)差異。比較鼻咽癌高發(fā)區(qū)中山市和中發(fā)區(qū)潮汕地區(qū)人群血清中抗EB病毒殼抗原抗體VCA-IgA水平,兩地高低差異顯著。人體感染了EB病毒后,EB病毒長期存在于何處?經(jīng)典的說法是,EB病毒長期存在于口咽或/和鼻咽或/和腮腺的上皮細胞中,也可存在于外周血B淋巴細胞中。我們認真觀察了用EBERs(Epstein-BarrviralearlyRNAs)原位雜交染色的扁挑體、鼻咽和腮腺的活檢切片,未見正常被覆上皮細胞呈EBERs陽性者。用巢式PCR檢測鼻咽癌高發(fā)區(qū)正常人群外周血單個核細胞是否有EB病毒感染,發(fā)現(xiàn)58例成人中30例(51.7%)可以檢測到EB病毒的W片段,其中6例血漿/血清中(20.0%,6/30)可同時檢測到游離的EB病毒DNA(待發(fā)表材料)。我們所采用的巢式PCR法可以顯示每1mL血漿/血清中含75個EB病毒基因組拷貝。如果采用更為敏感的定量PCR法,則可顯示每1mL血漿/血清中含3~5個,甚至更少的EB病毒基因組拷貝。因此,廣州地區(qū)成人血液EB病毒攜帶者的百分率應(yīng)當(dāng)更高。我們最近設(shè)計了新的引物,采用巢式和實時定量PCR法檢測EB病毒LMP1基因,發(fā)現(xiàn)廣州地區(qū)成人血液EB病毒攜帶者的百分率可達80%以上,但基因拷貝數(shù)較少。絕大多數(shù)成人血液EB病毒攜帶者的EB病毒LMP1的基因序列與B95-8細胞株一樣,鮮有呈30bp缺失者。可是,我們所檢測到的大多數(shù)鼻咽癌細胞中的EB病毒卻是有30bp缺失的LMP1序列。為此,廣州地區(qū)健康成人血液中B淋巴細胞所攜帶的EB病毒毒株是否與鼻咽癌變直接有關(guān),值得懷疑。我們認為,可能是感染EB病毒后,由于某些因素導(dǎo)致EB病毒基因序列的變異才能在鼻咽癌變中起作用。外周血攜帶EB病毒的B淋巴細胞可以進入淋巴組織,并通過淋巴濾泡而長期存在。我們在伴有鼻咽淋巴組織增生的鼻咽炎癥活檢切片中,每可見EBERs陽性的B淋巴細胞即是證明。這是一種EB病毒的慢性持續(xù)感染,不一定發(fā)展為癌。外周血中攜帶EB病毒的B淋巴細胞是一種潛伏感染,表達EBERs和EBNA1(Epstein-Barrviralnuclearantigen1),偶可表達LMP-2A(latentmembraneprotein2A)。上述約20%人群外周血攜帶EB病毒的B淋巴細胞中的EB病毒可以從潛伏感染轉(zhuǎn)為溶解性感染,并使B淋巴細胞破裂,產(chǎn)生游離于細胞外的病毒顆粒。這可能就是EB病毒慢性持續(xù)感染被再激活的表現(xiàn)(待發(fā)表材料)。在外周血液中循環(huán)的攜帶EB病毒的B淋巴細胞與機體所產(chǎn)生的對EB病毒特異的細胞毒性T細胞,特別是Tγδ細胞,相互之間的平衡決定了慢性持續(xù)感染時外周血中攜帶EB病毒的B淋巴細胞的數(shù)量。我們在非鼻咽癌的活檢切片中,?？梢姷浇櫽诒茄收Ｉ掀ぜ毎g或上皮下組織中的EBERs陽性B淋巴細胞。這些EBERs陽性B淋巴細胞又可游出上皮組織,粘附于上皮表層,排泄到唾液中。因此,在EB病毒攜帶者的唾液中可以檢測到EB病毒DNA。如果EBERs陽性B淋巴細胞浸潤于鼻咽異型上皮細胞之間時,就可能使EB病毒感染呈異型性改變的上皮細胞。感染了EB病毒的鼻咽異型上皮細胞中的EB病毒可以表達LMP1和LMP2A,偶可表達EBNA2(Epstein-Barrviralnuclearantigen2),從而在鼻咽癌變過程中起十分關(guān)鍵的作用。也就是說,鼻咽上皮細胞要在先發(fā)生異型性的前提下,再感染EB病毒的變異毒株(例如有30bp缺失的LMP1或“f”變異毒株),EB病毒才在鼻咽癌變中起作用。2血清學(xué)陽性人群絕大多數(shù)鼻咽癌患者血清呈抗EB病毒殼抗原VCA-IgA陽性,其滴度常在1∶40以上,但亦有抗體滴度偏低者。我們在鼻咽癌的切片中,也可見到上皮下有漿細胞浸潤帶。這些漿細胞產(chǎn)生的抗體可以滲透到唾液中,因此在鼻咽癌患者的唾液中也可檢測到抗EB病毒的抗體。鼻咽癌切片中觀察到富有漿細胞浸潤者的血清中VCA-IgA抗體的幾何平均滴度要較漿細胞浸潤較少者高。鼻咽癌患者血清中除VCA-IgA抗體較有意義外,還存在相當(dāng)廣譜的抗EB病毒抗體,特別是EA-IgG抗體(IgGantibodiesagainstearlyantigens)。EA-IgG抗體的水平不但可以反映臨床病程的發(fā)展,還與病理組織學(xué)改變有聯(lián)系。我們在高發(fā)區(qū)42048例30~59歲人群中普查時發(fā)現(xiàn),血清VCA-IgA抗體滴度超過1∶5者達7%~8%,但1∶5陽性者中絕大多數(shù)不是鼻咽癌患者。VCA-IgA檢測的靈敏度較高,而特異度較低。我們最近對66例鼻咽癌患者和58例正常健康成人所作VCA-IgA檢測結(jié)果說明,陽性正確率最高時的靈敏度僅是0.8030,特異度僅是0.8793。目前許多醫(yī)院對疑為鼻咽癌的患者血清還采用免疫酶標法檢測EA-IgA(IgAantibodiesagainstearlyantigens)。血清EA-IgA陽性(滴度等于或超過1∶5)者大多數(shù)為鼻咽癌患者,但相當(dāng)一部分鼻咽癌患者血清EA-IgA滴度小于1∶5。我們的檢測結(jié)果說明,EA-IgA的免疫酶標檢測的特異度雖較高,達0.9828,但靈敏度卻仍較低,為0.8182(待發(fā)表材料)。我們采用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)法代替免疫酶標法,并以相對光密度來衡量EA-IgA陰性或陽性,則既保持了它的較高特異度,又相應(yīng)地提高了它的靈敏度(待發(fā)表材料)。我們又采用酶聯(lián)免疫吸附法檢測ZEBRA-IgG、EA-IgA和EBNA-IgG,進一步提高了靈敏度和特異度。我們于1986年在中山市30~59歲人群中進行的VCA-IgA血清學(xué)普查時,將42048人分為陽性(VCA-IgA滴度≥1/5者3093例)和陰性(38966例)兩組,并隨訪12年。當(dāng)年在陽性組中篩查到42例鼻咽癌患者,陰性組3例。隨后12年內(nèi),又發(fā)生109例鼻咽癌,陽性組在普查后12年內(nèi)鼻咽癌的發(fā)病率12倍于陰性組。這說明,EB病毒血清學(xué)陽性人群鼻咽癌的發(fā)病機率較高。也就是說,EB病毒血清學(xué)陽性的人群反映了鼻咽異型上皮容易癌變的人群。眾所周知,人體感染EB病毒并成為攜帶者后,一般會導(dǎo)致免疫反應(yīng),產(chǎn)生抗體。血液中抗體水平維持一段時間后即可逐漸消退。血液中抗體的持續(xù)存在反映了潛伏EB病毒的經(jīng)常被再激活。各種抗體水平間相互平衡,而且這種平衡因人而異,形成了不同的血清抗EB病毒的抗體譜。被激活的EB病毒可能容易呈DNA變異,可能更容易感染鼻咽異型上皮細胞,從而在鼻咽癌變中起作用。被激活的EB病毒可以導(dǎo)致許多種抗體的產(chǎn)生,因此檢測血液中的多種抗體就更能反映EB病毒被激活的狀態(tài)。我們最近的研究結(jié)果說明,3種抗體陽性在發(fā)現(xiàn)和診斷鼻咽癌方面的優(yōu)勢比高于2種抗體陽性,2種陽性的優(yōu)勢比又高于1種陽性。所以,以后采用EB病毒血清學(xué)在人群中進行鼻咽癌普查時,就能將被檢測的人群分為高危、中危和低危3個亞群,而采取相應(yīng)不同的隨訪措施了。這是我們在鼻咽癌人群普查實踐中的貢獻。我們考慮到檢測血清EB病毒抗體僅代表機體對被激活的EB病毒的反應(yīng),如果能既檢測血清抗體又檢測血清中被激活的EB病毒,是否更能說明EB病毒可在鼻咽癌變中的作用呢?作者采用巢式PCR法檢測血清中游離的EB病毒DNA和用免疫酶標法檢測血清中VCA-IgA或EA-IgA,均獲得可喜的結(jié)果?，F(xiàn)在我們用定量PCR替代巢式PCR,用ELISA替代免疫酶標,既檢測血清中抗EB病毒幾種抗體又檢測血清中EB病毒DNA,作為在人群中普查和在臨床上診斷鼻咽癌的新血清學(xué)指標。3eb病毒與腦胰腺癌細胞的關(guān)系按照1991年世界衛(wèi)生組織的組織學(xué)分型,鼻咽癌可分為角化型鱗狀細胞癌和非角化型癌兩大型。10年前,多數(shù)學(xué)者認為非角化型癌與EB病毒感染密切相關(guān),但角化型鱗狀細胞癌與EB病毒的相關(guān)性卻不密切。我們采用顯示W(wǎng)片段DNA和EB病毒小RNA(EBERs)的原位雜交法觀察了幾批角化型鱗狀細胞癌的材料后認為,角化型鱗狀細胞癌也與EB病毒感染密切相關(guān)。但是,在非角化型癌中,幾乎所有的癌細胞核均呈EBERs陽性;而在角化型鱗狀細胞癌中,只有分化較差的癌細胞呈EBERs陽性。最近,我們研究了高發(fā)區(qū)鼻咽腺癌與EB病毒感染的關(guān)系。在13例普通型腺癌中,僅有1例的腺癌細胞核呈EBERs陽性;4例腺癌未見癌細胞呈EBERs陽性,但在間質(zhì)中卻見有浸潤的EBERs陽性的淋巴細胞;另8例腺癌切片中未觀察到EBERs陽性的癌細胞和浸潤淋巴細胞;抽提出來的組織DNA,采用巢式PCR也未見EB病毒W(wǎng)片段帶出現(xiàn)(待發(fā)表材料)。在16例鼻咽腺樣囊性癌中,4例癌細胞呈EBERs陽性,其中1例間質(zhì)中也有EBERs陽性淋巴細胞浸潤,另3例僅在間質(zhì)中見有EBERs陽性淋巴細胞浸潤。2例粘液表皮樣癌中見有1例的癌細胞呈EBERs陽性(待發(fā)表材料)。我們曾報道鼻咽腺鱗癌1例,有EB病毒感染;最近又觀察到既向鱗狀分化又向腺性分化的腺鱗癌6例,其中4例的鱗狀分化部分呈EBERs陽性(待發(fā)表材料)。上述結(jié)果說明,同樣是鼻咽部上皮組織發(fā)生的惡性腫瘤,不同組織類型的癌與EB病毒感染的相關(guān)性卻有顯著的差異。有向鱗狀分化能力的未分化癌細胞似較易感染EB病毒。鼻咽非角化型癌就是一種有向鱗狀分化能力的未分化癌細胞;角化型鱗狀細胞癌中的分化差的癌細胞也可以說是一種有向鱗狀分化能力的癌細胞;腺鱗癌中的鱗癌成分當(dāng)然是有鱗狀分化能力的癌細胞了。另一方面,有向腺性分化的鼻咽腺癌細胞卻很少感染EB病毒。所以,不能籠統(tǒng)地說,EB病毒在鼻咽癌變中起關(guān)健作用,應(yīng)該說EB病毒在鼻咽非角化型癌和鱗狀細胞癌的癌變過程中起關(guān)健作用,而EB病毒在鼻咽腺癌的發(fā)生中的作用卻是無足輕重的。鼻咽以外部位在病理組織學(xué)形態(tài)學(xué)上與鼻咽非角化型癌類同的淋巴上皮瘤樣癌(lymphoepithelioma-likecarcinoma)或稱淋巴上皮性癌(lymphoepithelialcarcinoma)的發(fā)生也與EB病毒感染密切相關(guān)。我們采用EBERs原位雜交法系統(tǒng)地研究了廣州地區(qū)鼻腔鼻竇、腮腺、肺、胃、喉、和扁桃體的淋巴上皮瘤樣癌。這些部位的淋巴上皮瘤樣癌并不少見,也均與EB病毒感染密切相關(guān)。它們的大多數(shù)癌細胞核顯示EBERs信號,表達EBNA1,部分癌細胞胞漿表達LMP1,也屬潛伏Ⅱ型感染。部分病例的癌組織中也可見EBERs陽性的淋巴細胞浸潤。文獻中有胸腺淋巴上皮瘤樣癌也感染EB病毒的報道,但我們所見的7例中卻未能證實。這問題有待進一步的澄清。我們注意到,淋巴上皮瘤樣癌或淋巴上皮性癌實際上是一種伴有豐富淋巴細胞間質(zhì)的未分化癌(undifferentiatedcarcinomawithlymphoidstroma)。EB病毒所以也感染這些部位的癌細胞,就是因為這類癌細胞也是具有鱗狀分化能力的未分化癌細胞。這就從另一角度說明,EB病毒導(dǎo)致的鼻咽癌變確是與具有鱗狀分化能力的未分化細胞有關(guān),而與具有腺性分化能力的未分化細胞的惡變關(guān)系不大。這也提示我們,進一步研究鼻咽上皮性干細胞及其分化將會對鼻咽癌變機理的闡明有很大幫助。4eb病毒在肺癌變中的作用采用免疫組化法和EBERs原位雜交法可以顯示鼻咽非角化型癌和角化型鱗狀細胞癌的核幾乎均表達EBNA1和EBERs。采用顯示LMP1mRNA的原位雜交法,80%以上病例的大多數(shù)癌細胞表達LMP1mRNA,在冰凍切片上也有70%以上病例的癌細胞表達LMP1蛋白,而在石蠟切片上只有50%左右的病例小部分癌細胞表達LMP1蛋白。這證實鼻咽癌細胞中的EB病毒主要是Ⅱ型潛伏感染。我們在36例鼻咽非角化型癌中見有4例的少數(shù)癌細胞核表達EBNA2,說明鼻咽癌細胞內(nèi)的EB病毒也可以是Ⅲ型潛伏感染(待發(fā)表材料)。部分鼻咽癌細胞中的EB病毒也可從潛伏感染轉(zhuǎn)換為溶解性感染,表達VCA和MA(membanousantigens)。我們特別重視EB病毒LMP1的表達及其在鼻咽癌變中的作用。眾所周知,LMP1可以轉(zhuǎn)化成纖維細胞,但是否可以轉(zhuǎn)化鼻咽上皮細胞呢?我們在大量癌旁上皮病變中觀察到,正常上皮中未見EBERs陽性細胞,EBERs陽性細胞開始出現(xiàn)在上皮呈