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文檔簡介

液相色譜基礎知識液相色譜（HPLC）是一種廣泛應用于分離、純化、鑒定和定量目標分子的分析技術(shù)，其原理是利用樣品在液相中的分配行為進行分離。液相色譜的原理分配作用分子在液相中的分配系數(shù)不同，導致不同大小、極性的分子分離。吸附作用樣品成分吸附在色譜填料表面，不同吸附強度導致分子分離。離子交換作用樣品離子與固定相離子交換，但不同離子強度導致分子分離。排阻作用分子在固定相的孔隙中排斥，不同分子的大小形狀導致分離。液相色譜的分類正相色譜以極性固定相為分離介質(zhì)，極性物質(zhì)迅速被吸附出來。反相色譜以非極性固定相為分離介質(zhì)，非極性物質(zhì)迅速被吸附出來。離子交換色譜利用固定相上的電荷轉(zhuǎn)移進行分離，可對樣品分子帶電的成分進行分離。凝膠過濾色譜利用固定相上的孔徑分布進行分離，可按分子大小分離。色譜柱的選擇1固定相根據(jù)樣品性質(zhì)選用不同的固定相，如疏水固相、親水固相、離子交換固相、手性固相等。2色譜柱長度色譜柱越長，分離效果越好，但帶來的是更長的分析時間。3內(nèi)徑內(nèi)徑越小，背壓越大，但靈敏度和分離效果越好。4粒徑粒徑越小，分離效果越好，但是背壓越大。色譜流動相的選擇1有機溶劑有機溶劑在控制流動相中的比例時起到分離的作用，常用甲醇、乙醇、乙腈、異丙醇等。2緩沖液可調(diào)節(jié)pH值，防止固相失活，同時可以使有電解質(zhì)的滯留時間延長。3添加劑如有機酸、有機堿等，能夠影響樣品的極性，改善分離效果。注射器的選擇自動進樣器能夠?qū)崿F(xiàn)高效率、高精度的進樣，避免手動注射器的誤差。手動進樣器操作簡單，成本低，適用于一些簡單實驗。濾膜的選擇尺寸選擇必須使得樣品可通過，但可去除固相顆粒等零碎物。濾膜材料濾膜材料應為化學惰性，不得與樣品化學反應。吸附特性保證樣品在濾膜上的吸附率及其變差不大，防止數(shù)據(jù)誤差。液相色譜中的檢測方法1UV檢測器利用吸收波長檢測樣品的含量，具有快速、簡單、靈敏、精確、選波范圍廣、源穩(wěn)定等特點。2熒光檢測器對某些熒光化合物靈敏，采用熒光檢測器靈敏度高，特異性好。3光導檢測器抗噪技術(shù)精度高，實現(xiàn)對各種溶劑、物質(zhì)的偵測。4大質(zhì)量比檢測器使用質(zhì)譜技術(shù)篩查和分析樣品，高靈敏度和分辨率。液相色譜的應用領(lǐng)域環(huán)境污染監(jiān)測可用于大氣、水、土壤等的污染物檢測和鑒別。食品安全檢測可對食品中的雜質(zhì)、

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