微生物肥料資料

NY227—94微生物肥料1主題內(nèi)容與適用范圍本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了微生物肥料產(chǎn)品的分類、技術(shù)要求、試驗(yàn)方法、檢驗(yàn)規(guī)則、包裝、標(biāo)志、運(yùn)輸與貯存。本標(biāo)準(zhǔn)適用于有益微生物制成的，能改善作物營養(yǎng)條件(又有刺激作用)的活體微生物肥料制品。2引用標(biāo)準(zhǔn)GB8172蛔蟲卵測定方法GB4789大腸菌值測定方法GB7468總汞測定方法GB7471總鎘測定方法GB7466總鉻測定方法GB7485總砷測定方法GB7470總鉛測定方法3產(chǎn)品分類3.1根瘤菌肥料：能在豆科植物上形成根瘤(或莖瘤)，同化空氣中的氮?dú)猓?yīng)豆科植物的氮素營養(yǎng)。用根瘤菌屬(Rhizobium)或慢生根瘤菌屬(Bradyrhizobium)的菌株制造。3.2固氮菌肥料：在土壤和很多作物根際中同化空氣中的氮?dú)?，供?yīng)作物氮素營養(yǎng)；又能分泌激素刺激作物生長。用下列菌種之一制造。固氮菌屬(Azotobacter)氮單胞菌屬(Azomonas)固氮根瘤菌屬(Azorhizobium)根際聯(lián)合固氮菌：固氮螺菌屬(Azospirillum)陰溝腸桿菌(Enterobactercloacea)經(jīng)鑒定為非致病菌糞產(chǎn)堿菌(Alcaligenesfaecalis)經(jīng)鑒定為非致病菌肺炎克氏桿菌(Klebsiellapneumoniae)經(jīng)鑒定為非致病菌其他經(jīng)過鑒定的用于固氮菌肥料生產(chǎn)的菌種。這些菌主要特征是在含一種有機(jī)碳源的無氮培養(yǎng)基中能固定分子態(tài)氮。3.3磷細(xì)菌肥料：能把土壤中難溶性磷，轉(zhuǎn)化為作物可以利用的有效磷，改善作物磷素營養(yǎng)。用下列菌種之一制造。分解有機(jī)磷化合物的細(xì)菌：解磷巨大芽胞桿菌(Bacillusmegatheriumphosphaticum)解磷珊瑚紅賽氏桿菌(Serratiacarolleraphosphaticum)節(jié)桿菌屬中的一些種(Arthrobactersp.)轉(zhuǎn)化無機(jī)磷化合物的細(xì)菌：假單胞菌屬中的一些種(Pseudomonassp.)其他經(jīng)過鑒定的用于磷細(xì)菌肥料生產(chǎn)的菌種。有機(jī)磷細(xì)菌在含磷礦粉或卵磷脂的合成培養(yǎng)基上有一定解磷作用，在麥麩發(fā)酵液中都含刺激植物生長的生長素物質(zhì)。無機(jī)磷細(xì)菌具有溶解難溶性磷酸鹽的作用。3.4硅酸鹽細(xì)菌肥料：能對土壤中云母，長石等含鉀的鋁硅酸鹽及磷灰石進(jìn)行分解，釋放出鉀、磷與其他灰分元素，改善作物的營養(yǎng)條件。本品的生產(chǎn)菌種為膠質(zhì)芽胞桿菌(Bacillusmucilginosus)的菌株及其他經(jīng)過鑒定的用于硅酸鹽細(xì)菌肥料生產(chǎn)的菌種。該菌在含鉀長石粉的無氮培養(yǎng)基上有一定解鉀作用，菌體內(nèi)和發(fā)酵液中存在刺激植物生長的生長素物質(zhì)。3.5復(fù)合微生物肥料：含有上述(解磷、解鉀、固氮微生物)或其他經(jīng)過鑒定的兩種以上互不拮抗微生物，通過其生命活動(dòng)，能增加作物營養(yǎng)供應(yīng)量。4技術(shù)要求4.1成品技術(shù)指標(biāo)1)表1成品技術(shù)指標(biāo)1)

劑型→

項(xiàng)目

↓

液體

固體

顆粒1.外觀

2.有效活菌數(shù)

根瘤肥料

慢生根瘤菌，億/mL

≥

快生根瘤菌，億/mL

≥

固氮菌肥料，億mL

≥

硅酸鹽細(xì)菌肥料，億/mL

≥

磷細(xì)菌肥料

有機(jī)磷細(xì)菌，億/mL

≥

無機(jī)磷細(xì)菌，億/mL

≥

復(fù)合微生物肥料，億/mL

≥

3.水分，％

4.細(xì)度，mm

5.有機(jī)質(zhì)(以C計(jì))，％

≥

(以蛭石等作為吸附劑不在此列)

6.pH

7.雜菌數(shù)，％

≤無異臭味

5

10

5

10

5

15

10

—

—

5.5～7

5黑褐色或褐色

粉狀、濕潤、松散

1

2

1

2

1

3

2

20～35

粒徑0.18

20

6.0～7.5

15褐色顆粒

1

1

1

1

1

2

1

＜10

粒徑2.5～4.5

25

6.0～7.5

6.0～7.5

208.有效期不得低于

六個(gè)月不得低于六個(gè)月不得低于六

個(gè)月

注：1)在產(chǎn)品標(biāo)明的失效期前有效活菌數(shù)應(yīng)符合指標(biāo)要求，出廠時(shí)產(chǎn)品有效活菌數(shù)必須高出本指標(biāo)30％以上。4.2成品無害化指標(biāo)表2成品無害化指標(biāo)

編號

參數(shù)單位標(biāo)準(zhǔn)限值1.

2.

3.

4.

5.

6.

7.蛔蟲卵死亡率

大腸桿菌值

汞及化合物(以Hg計(jì))

鎘及化合物(以Cd計(jì))

鉻及化合物(以Cr計(jì))

砷及化合物(以As計(jì))

鉛及化合物(以Pb計(jì))％

mg/kg

mg/kg

mg/kg

mg/kg

mg/kg95～100

10-1

≤5

≤3

≤70

≤30

≤605檢測方法5.1外觀感觀檢驗(yàn)符合4.1成品技術(shù)指標(biāo)。5.2有效活菌數(shù)和雜菌含量測定5.2.1試劑和溶液a.無菌水、蒸餾水；b.選擇培養(yǎng)基(附錄A)；c.剛果紅染液(0.5％)。5.2.2儀器a.顯微鏡1000×；b.搖床旋轉(zhuǎn)式200r/min；c.恒溫培養(yǎng)箱；d.恒溫烘干箱；e.滅菌鍋；f.扭力天平(分度值0.01g)；g.玻璃儀器(滅菌的9cm平皿、10mL、5mL、1mL吸管、三角瓶、玻璃刮刀)。5.2.3測定步驟5.2.3.1采樣應(yīng)不少于500g，從中稱取10～20g(精確0.01g5.2.3.2用無菌吸管吸取5mL上述母液的菌懸液加入45mL無菌水中，混勻成1∶10稀釋的菌懸液，這樣依次稀釋，分別得到1∶1×102，1∶1×103和1：1×104，1∶1×105等濃度(每個(gè)稀釋度必須更換無菌吸管)。5.2.3.3用1mL無菌吸管分別吸取不同稀釋度菌懸液0.1mL，加至直徑為9cm平皿的瓊脂培養(yǎng)基表面，用無菌玻璃刮刀將菌懸液均勻地涂于瓊脂表面?；蛉?mL不同稀釋度菌懸液加入培養(yǎng)皿內(nèi)，與瓊脂培養(yǎng)基混勻。每個(gè)樣品取3個(gè)連續(xù)適宜稀釋度，每一稀釋度重復(fù)3次，同時(shí)加無菌水的空白對照，培養(yǎng)2～5d，每個(gè)稀釋度取5～10個(gè)菌落的菌體，涂片染色，顯微鏡觀察識別后計(jì)數(shù)菌落。5.2.4計(jì)算公式：統(tǒng)計(jì)算出同一稀釋度三個(gè)平皿上菌落平均數(shù)。根據(jù)式(1)和式(2)計(jì)算：菌劑含菌數(shù)＝菌落平均數(shù)×稀釋倍數(shù)×(母液菌懸液的體積/菌劑數(shù))………………(1)雜菌率(％)＝〔雜菌數(shù)/(有效菌數(shù)+雜菌數(shù))〕×100………(2)根據(jù)菌落特征判定，分別計(jì)算出制品中的特定微生物及雜菌數(shù)率。固體(包括顆粒)菌劑含菌數(shù)以億/g表示，液體菌劑含菌數(shù)以億/mL表示。5.2.5菌落計(jì)數(shù)5.2.5.1以平板上出現(xiàn)30～300個(gè)菌落數(shù)的稀釋度平板為計(jì)數(shù)標(biāo)準(zhǔn)。5.2.5.2當(dāng)只有一個(gè)稀釋度，其平均菌落數(shù)在30～300之間時(shí)，則以該平均菌落數(shù)乘以其稀釋倍數(shù)(見表3例1)。5.2.5.3若有兩個(gè)稀釋度，其平均菌落數(shù)均在30～300之間，應(yīng)按兩者菌落總數(shù)之比值來決定。若其比例小于2應(yīng)計(jì)數(shù)兩者的平均數(shù)，若大于2則計(jì)數(shù)其中稀釋較小的菌落總數(shù)(見表3例2及例3)。5.2.5.4若三個(gè)稀釋度的平均菌落數(shù)均大于300，則應(yīng)按稀釋度最高的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)(見表3例4)。5.2.5.5若三個(gè)稀釋度的平均菌落數(shù)均小于30，則應(yīng)按稀釋度最低的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)(見表3例5)。5.2.5.6若三個(gè)稀釋度的平均菌落數(shù)均不在30～300之間，則以最接近300或30的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)(見表3例6)。表3計(jì)算菌落總數(shù)方法的示例例次

不同稀釋度的平均菌落數(shù)

兩個(gè)稀釋度

菌落數(shù)之比菌落總數(shù)個(gè)/mL或個(gè)/g10-510-610-71143115922—1.6×1082

2760235311.32.7×10832676136342.51.4×1084無法計(jì)數(shù)1142312—3.1×109528125—2.8×1066無法計(jì)數(shù)30318—3.0×1085.3含水量測定5.3.1儀器a.土壤鋁盒；b.扭力天平(分度值0.01g)；c.恒溫烘干箱；d.干燥器。5.3.2測定步驟稱取樣品30～40g(精確到0.01g)二份放入鋁盒中，于105℃5.3.3計(jì)算公式：H2O％＝〔(m0－m0)/m0〕×100……………(3)式中：m0──表示烘干前樣品重，g；m1──表示烘干后樣品重，g。5.4pH值測定5.4.1試劑和溶液無離子水。5.4.2儀器a.燒杯；b.酸度計(jì)；c.扭力天平(分度值0.01g)。5.4.3測定步驟隨機(jī)稱取樣品8g，將樣品置于干凈燒杯內(nèi)，按1∶2加入無離子水，浸泡振蕩均勻。預(yù)熱pH計(jì)，用標(biāo)準(zhǔn)溶液(pH6.86)校正儀器后，測定樣品懸液pH，邊測邊攪拌，儀器讀數(shù)穩(wěn)定后記錄。每個(gè)樣品重復(fù)三次。5.5細(xì)度檢驗(yàn)5.5.1儀器a.扭力天平(分度值0.01g)；b.標(biāo)準(zhǔn)篩孔徑0.18mm孔徑0.25mm。5.5.2測定步驟供檢樣100g，經(jīng)過105℃烘干1h，過孔徑0.18mm標(biāo)準(zhǔn)篩，篩下部分占檢樣重量≥80％，其他部分全部通過孔徑0.25mm5.6有機(jī)質(zhì)測定5.6.1儀器a.瓷坩堝；b.烘箱；c.高溫電爐；d.干燥器；e.扭力天平（分度值0.01g）。5.6.2測定步驟采用灼燒減重法測定。稱取樣品10g，置已稱重的瓷坩堝中于60℃烘箱中烘4～6h，冷卻稱重(m0)。然后在550～600℃高溫電爐中灼燒2h，用坩堝鉗取至干燥器中，放冷至室溫，稱重（m15.6.3計(jì)算公式有機(jī)質(zhì)％＝(m0－m1/m)×100………(4)式中：m0──表示坩堝加烘干樣品重，g；m1──表示坩堝加灼燒后樣品重，g；m──表示風(fēng)干后樣品重，g。5.7有毒物質(zhì)(重金屬)的測定5.7.1汞按GB7468操作。5.7.2鎘

按GB7471操作。5.7.3鉻按GB7466操作。5.7.4砷按GB7485操作。5.7.5鉛按GB7470操作。5.8蛔蟲卵的測定按GB8172操作。5.9大腸菌值的測定按GB4789操作。6檢驗(yàn)規(guī)則6.1生產(chǎn)微生物肥料所使用的菌種，須在本標(biāo)準(zhǔn)菌種規(guī)定范圍之內(nèi)。若使用規(guī)定之外的菌種，必須經(jīng)過國家級科研單位的鑒定，包括菌種屬及種的學(xué)名，形態(tài)，生理生化特性，效力，安全性等完整資料。以杜絕一切植物檢疫對象，傳染病病源作為菌種生產(chǎn)的產(chǎn)品。6.2本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定中的成品無害化指標(biāo)和有效活菌數(shù)、雜菌數(shù)及有效期，是微生物肥料質(zhì)量安全、有效的重要依據(jù)，一切微生物肥料的產(chǎn)品必須達(dá)到的指標(biāo)。成品無害化檢驗(yàn)可委托省市以上環(huán)境監(jiān)測機(jī)構(gòu)進(jìn)行，并提供檢驗(yàn)證明。有效活菌數(shù)、雜菌數(shù)，由農(nóng)業(yè)部指定檢測機(jī)構(gòu)檢驗(yàn)。本標(biāo)準(zhǔn)所規(guī)定的外觀、水分、細(xì)度、有機(jī)質(zhì)和pH值等指標(biāo)，作為微生物肥料質(zhì)量檢驗(yàn)參考指標(biāo)。6.3復(fù)合微生物肥料，是指兩種以上微生物菌種的復(fù)合。不論使用何種微生物菌種、幾種菌種生產(chǎn)，其菌種必須符合本標(biāo)準(zhǔn)(6.1)規(guī)定。而且有效活菌數(shù)：液體型不得低于10億/mL固體型不得低于2億/g，顆粒型不得低于1億/g。復(fù)合微生物肥料的成分中，除主體微生物外，含有其他基質(zhì)成分的，其基質(zhì)成分應(yīng)有利于微生物肥料中的菌體生存，絕不能降低或抑制菌體的存活。因加基質(zhì)成分過多、不當(dāng)，微生物肥料有效活菌數(shù)過低或有效活菌數(shù)測不出來的而不達(dá)標(biāo)者，則該產(chǎn)品不是微生物肥料。6.4微生物肥料應(yīng)由生產(chǎn)廠的技術(shù)檢驗(yàn)部門進(jìn)行檢驗(yàn)，生產(chǎn)廠應(yīng)保證所有出廠的微生物肥料都達(dá)到本標(biāo)準(zhǔn)要求，每批出廠的微生物肥料都應(yīng)附有一定格式的質(zhì)量合格證明。6.5微生物肥料按批檢驗(yàn)，以每一發(fā)酵罐生產(chǎn)的產(chǎn)品為一批。6.6取樣方法，隨機(jī)抽樣，以箱或袋為抽樣單位。每批固體菌劑抽樣5～10箱。每箱中抽1袋，無菌操作取樣100g，混勻用四分法縮分到500g，供檢驗(yàn)用。顆粒菌劑每批抽樣5或10袋，無菌操作，每袋取樣0.5kg，仔細(xì)混勻后，用四分法縮分到500g，以供檢驗(yàn)用。液體菌劑每批抽樣5或10箱，每箱抽1瓶，無菌操作，每瓶吸取5mL一同放入無菌的三角瓶中，搖均勻，瓶上粘貼標(biāo)簽，標(biāo)明產(chǎn)品名稱、取樣日期、批號、取樣人，以供檢驗(yàn)用。6.7如果檢驗(yàn)結(jié)果不符合標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定時(shí)，應(yīng)以加倍數(shù)量按規(guī)定選取試樣進(jìn)行檢驗(yàn)，如仍不符合標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定，該批產(chǎn)品判為不合格。7包裝、標(biāo)志、運(yùn)輸與貯存7.1微生物肥料固體菌劑內(nèi)包裝材料用聚乙烯薄膜袋，外用紙箱包裝。液體菌劑小包裝用玻璃質(zhì)疫苗瓶或塑料瓶，外包裝紙箱。顆粒菌劑用編織袋內(nèi)襯塑料薄膜袋包裝，袋口須密封牢固。7.2包裝箱(袋)上應(yīng)印有產(chǎn)品名稱、商標(biāo)、標(biāo)準(zhǔn)號、生產(chǎn)許可證號、生產(chǎn)廠名、廠址、生產(chǎn)日期、有效期、批號、凈重、防曬、防潮、易碎、防倒置等標(biāo)記。內(nèi)包裝袋上應(yīng)印有產(chǎn)品名稱、商標(biāo)、標(biāo)準(zhǔn)號、有效細(xì)菌含量，研制、生產(chǎn)單位，產(chǎn)品性能及使用說明。7.3每箱(袋)產(chǎn)品中附有產(chǎn)品合格證和使用說明書。7.4適用于常用運(yùn)輸工具，運(yùn)輸過程中應(yīng)有遮蓋物，防雨淋、防日曬及35℃以上高溫。氣溫低于0℃時(shí)需用保溫車(8～7.5微生物肥料應(yīng)貯存在常溫、陰涼、干燥、通風(fēng)的庫房內(nèi)，不得露天堆放，以防雨淋和日曬，防止長時(shí)間35℃以上高溫。碼放高度≤130cm附錄A有效活菌數(shù)測定的選擇培養(yǎng)基(補(bǔ)充件)A1根瘤菌培養(yǎng)基：K2HPO40.5g1％Na2MoO4·2H2O2mLMgSO4·7H2O0.2g1％H3BO32mLNaCl0.1g酵母膏1.0g(或酵母粉0.8g)C6H14O610g0.5％剛果紅5mLCaCO31.5gpH7.0A2固氮菌用阿須貝氏(Ashby)培養(yǎng)基：KH2PO40.2gCaCO35.0gMgSO4·7H2O0.2gC6H14O610.0gNaCl0.2gCaSO4·2H2O0.1gpH7.0A3聯(lián)合固氮菌培養(yǎng)基：(1)培養(yǎng)基：γ─CeH11O7Na5gNaCl0.1gKH2PO40.4gCaCl20.02gK2HPO40.1gFeCl30.01gMgSO4·7H2O0.2gNa2MoO4·2H2O0.002g酵母膏1.0gpH6.8～7.0(2)培養(yǎng)基：C4H4O5Na25gCaCl20.02gK2HPO40.1gNa2MoO4·2H2O0.002gKH2PO40.4gFeCl30.01gMgSO4·7H2