微生物學課件：實驗七 細菌接合conjugation

實驗七細菌接合（conjugation)實驗內(nèi)容：學生操作：接合試驗

討論課：炭疽芽胞桿菌、銅綠假單胞菌鼠疫耶氏菌、放線菌屬/布魯菌

通過性菌毛使供菌與受菌接觸，將供菌的遺傳物質(zhì)轉(zhuǎn)移到受菌內(nèi)，使受菌獲得供菌某些遺傳性狀的基因轉(zhuǎn)移方式稱接合(conjugation)。只有帶有接合性質(zhì)粒的細菌才能通過接合轉(zhuǎn)移遺傳物質(zhì)。接合性質(zhì)粒包括F質(zhì)粒、R質(zhì)粒、Col質(zhì)粒等。 接合配對是由致育因子(F質(zhì)粒)的存在所決定的，因為F質(zhì)?；蚓幋a性菌毛。細菌接合實驗原理細菌性菌毛與接合過程實驗材料：（3人一組）菌株:

供菌（A）

鼠傷寒沙門氯霉素耐藥株

受菌（B）大腸桿菌氯霉素敏感株培養(yǎng)基:1ml肉湯試管3支、含氯霉素麥康凱

(MacCokey)平板3塊、不含氯霉素麥康凱(MacCokey)平板1塊（貼紙標簽）

其它器材:100μl加樣器無菌加樣器槍頭Q1:如何確定鼠傷寒沙門菌含氯霉素耐藥質(zhì)粒（R質(zhì)粒）？操作步驟分別吸取0.1ml供體菌和受體菌于2支1ml肉湯管中，另各吸取0.1ml供體菌和受體菌于1ml肉湯管中混合，置37℃溫箱1-2小時培養(yǎng)。上述培養(yǎng)物分別接種麥康凱平板，培養(yǎng)24h，觀察結(jié)果

供體菌受體菌1ml肉湯1ml肉湯1ml肉湯0.1ml0.1ml37℃溫箱1-2小時培養(yǎng)含氯霉素麥康凱平板含氯霉素麥康凱平板含氯霉素麥康凱平板不含氯霉素麥康凱平板麥康凱平板上的兩種菌落沙門氏菌大腸桿菌Q2:如何證明大腸桿菌獲得氯霉素耐藥性是由于細菌接合，而不是由其它遺傳物質(zhì)傳遞方式而導致的變異呢？無色透明菌落無色透明菌落和粉紅色不透明菌落無菌落生長經(jīng)37℃24h培養(yǎng)后無色透明菌落和粉紅色不透明菌落含氯霉素麥康凱平板不含氯霉素麥康凱平板討論課專題白喉棒狀桿菌流感嗜血桿菌軍團菌鮑特菌炭疽芽胞桿菌銅綠假單胞菌鼠疫耶氏菌放線菌屬/布魯菌（實驗七）（實驗六）討論課注意事項：時間：20min內(nèi)容：前期選定形式：不限評分：同學間自評為主主要生物特性：形態(tài)：G+,粗大截平、竹節(jié)樣鏈狀排列，可形成芽胞（對氧化劑敏感）培養(yǎng)：多需氧、肉湯培養(yǎng)基，絮狀沉淀生長；穿刺明膠培養(yǎng)基：倒松樹狀致病特性：致?。禾烤遥╝nthrax),包括皮膚（黑色焦痂）、腸、肺炭疽毒力因子：炭疽毒素（保護性抗原結(jié)合致死因子和水腫因子構(gòu)成復合物）流行：攝食或接觸感染動物、畜產(chǎn)品免疫、預防和治療：免疫性：抗毒素、吞噬細胞，感染獲持久免疫力預防：炭疽減毒疫苗、皮上劃痕接種治療：首選青霉素G，過敏者用環(huán)丙沙星、紅霉素等檢查：標本：患者病灶取材（水泡、血液、痰、糞便等）、動物割耳、舌尖（禁室外解剖、注意防護和擴散）鏡檢：涂片G+,粗大桿菌、或熒光抗體染色分離培養(yǎng)：青霉素串珠試驗炭疽芽胞桿菌銅綠假單胞菌主要生物特性：形態(tài)：G-,有莢膜和單極鞭毛培養(yǎng)：專性需氧、產(chǎn)青膿素和綠膿素致病特性：致?。簽槟c道正常菌群，可致局部化膿，如中耳、角膜、尿道、膿胸等毒力因子：內(nèi)毒素（LPS和OEP)為主、密度感知系統(tǒng)（QS系統(tǒng)）；莢膜、酶和外毒素等流行：院內(nèi)感染常見免疫、預防和治療：免疫性：中性粒細胞吞噬為主、抗體、粘膜免疫參與預防：OEP疫苗等，防院內(nèi)感染治療：慶大霉素，多粘菌素等，注意多種耐藥性。檢查：標本：病灶取材（膿液、血液、腦脊液等）分離培養(yǎng)：血瓊脂平板見綠色水溶性色素鼠疫耶爾森菌主要生物特性：形態(tài)：屬腸桿菌科，兩端鈍圓、兩極濃染卵圓形G-,培養(yǎng)：27-30℃最適，肉湯培養(yǎng)48h可形成菌膜，搖動呈“鐘乳石”狀下沉變異：野生株呈R型菌落，人工培養(yǎng)成S型，毒力減弱（與其它菌相反）致病特性：致?。菏笠撸ㄗ匀灰咴葱浴⒓最惙ǘ倚詡魅静。?，包括腺鼠疫（腹股溝和腋下淋巴結(jié)炎）、肺鼠疫（黑死?。?、敗血癥型鼠疫毒力因子：F1抗原（莢膜抗原)、V/W抗原（抗吞噬，可胞內(nèi)寄生）、外膜蛋白、鼠毒素（細菌自溶釋放、作用心血管系統(tǒng)）、內(nèi)毒素等流行：鼠蚤叮咬或剝食感染動物免疫、預防和治療：免疫性：抗體為主，感染可獲牢固免疫力預防：滅鼠（儲存宿主）、滅蚤（傳播媒介）。無毒株EV活疫苗，皮上劃痕、皮下或皮內(nèi)注射治療：及早用抗生素、如鏈霉素聯(lián)合磺胺或四環(huán)素等合用檢查：標本：專用實驗室操作取材（穿刺淋巴液、血液、痰、分泌物等）鏡檢：涂片染色（見特性）血清學、核酸檢測等輔助。布魯氏菌主要生物特性：形態(tài)：G-,有微莢膜培養(yǎng)：需氧、分離需含5-10%CO2；不溶血，可分解尿素和產(chǎn)生H2S抵抗力：巴氏消毒法可滅菌（鮮奶）致病特性：致病：布魯氏菌病（多次菌血癥、波浪熱），引起家畜流產(chǎn)，睪丸炎、乳腺炎等，易轉(zhuǎn)為慢性毒力因子：內(nèi)毒素為主、微莢膜、侵襲性酶等流行：接觸病畜、或畜產(chǎn)品，多途徑感染免疫、預防和治療：免疫性：細胞免疫為主（布魯菌可在中性粒、巨噬細胞內(nèi)寄生）預防：避免接觸病畜；接種家畜，疫區(qū)人群接種減毒活疫苗治療：利福平聯(lián)合多西環(huán)素、四環(huán)素，神經(jīng)受累者四環(huán)素合用鏈霉素檢查：標本：血液、骨髓，動物患病臟器等分離培養(yǎng)：4-7天可形成菌落、結(jié)合H2S、血清學（檢測A和M菌體抗原）確定型別皮試（皮下注射布魯菌素）：陽性者為慢性或曾經(jīng)患過布魯氏菌病放線菌屬主要生物特性：形態(tài)：G+,有放射狀菌絲和孢子，似真菌培養(yǎng)：厭氧或微需氧（加5%CO2)、難培養(yǎng)，葡萄糖肉湯培養(yǎng)可見灰白色球形顆粒致病特性：致病：為口腔等開放通道的正常菌群，致軟組織化膿性炎癥，伴慢性肉芽腫、多發(fā)性瘺管等，面頸部感染最為常見，可引起腦膜炎、膿腫，肺部感染、腹部、盆腔感染、