實(shí)驗(yàn)十水中大腸菌群含量測定

實(shí)驗(yàn)十水中大腸菌群的測定〔綜合性實(shí)驗(yàn)〕1整理ppt一、目的要求

1．學(xué)習(xí)測定水中大腸菌群數(shù)量的多管發(fā)酵法。2．了解大腸菌群的檢測作為飲水衛(wèi)生指標(biāo)的重要性。2整理ppt二、根本原理多管發(fā)酵法包括初〔步〕發(fā)酵試驗(yàn)、平板別離和復(fù)發(fā)酵試驗(yàn)三個(gè)局部。1．初〔步〕發(fā)酵試驗(yàn)發(fā)酵管內(nèi)裝有乳糖蛋白胨液體培養(yǎng)基，并倒置一德漢氏小套管。乳糖能起選擇作用，因?yàn)楹芏嗉?xì)菌不能發(fā)酵乳糖，而大腸菌群能發(fā)酵乳糖而產(chǎn)酸產(chǎn)氣。為便于觀察細(xì)菌的產(chǎn)酸情況，培養(yǎng)基內(nèi)加有溴甲酚紫作為pH指示劑，細(xì)菌產(chǎn)酸后，培養(yǎng)基即由原來的紫色變?yōu)辄S色。溴甲酚紫還有抑制其他細(xì)菌如芽胞菌生長的作用。3整理ppt水樣接種于發(fā)酵管內(nèi)，37℃下培養(yǎng)，24小時(shí)內(nèi)小套管中有氣體形成，并且培養(yǎng)基混濁，顏色改變，說明水中存在大腸菌群，為陽性結(jié)果，但也有個(gè)別其他類型的細(xì)菌在此條件下也可能產(chǎn)氣；此外產(chǎn)酸不產(chǎn)氣的也不能完全說明是陰性結(jié)果。在量少的情況下，也可能延遲到48小時(shí)后才產(chǎn)氣，此時(shí)應(yīng)視為可疑結(jié)果，因此，以上兩種結(jié)果均需繼續(xù)做下面兩局部實(shí)驗(yàn)，才能確定是否是大腸菌群。48小時(shí)后仍不產(chǎn)氣的為陰性結(jié)果。4整理ppt2．平板別離平板培養(yǎng)基一般使用復(fù)紅亞硫酸鈉瓊脂〔遠(yuǎn)藤氏培養(yǎng)基，Endo＇smedium〕或伊紅美藍(lán)瓊脂〔eosinmethyleneblueagar，EMBagar〕，前者含有堿性復(fù)紅染料，在此作為指示劑，它可被培養(yǎng)基中的亞硫酸鈉脫色，使培養(yǎng)基呈淡粉紅色，大腸菌群發(fā)酵乳糖后產(chǎn)生的酸和乙醛即和復(fù)紅反響，形成深紅色復(fù)合物，使大腸菌群菌落變?yōu)閹Ы饘俟鉂傻纳罴t色。亞硫酸鈉還可抑制其他雜菌的生長。5整理ppt伊紅美藍(lán)瓊脂平板含有伊紅與美藍(lán)染料，在此亦作為指示劑，大腸菌群發(fā)酵乳糖造成酸性環(huán)境時(shí)，該兩種染料即結(jié)合成復(fù)合物，使大腸菌群產(chǎn)生與遠(yuǎn)藤氏培養(yǎng)基上相似的、帶核心的、有金屬光澤的深紫色〔龍膽紫的紫色〕菌落。初發(fā)酵管24小時(shí)內(nèi)產(chǎn)酸產(chǎn)氣和48小時(shí)產(chǎn)酸產(chǎn)氣的均需在以上平板上劃線別離菌落。3．復(fù)發(fā)酵試驗(yàn)以上大腸菌群陽性菌落，經(jīng)涂片染色為革蘭氏陰性無芽胞桿菌者，通過此試驗(yàn)再進(jìn)一步證實(shí)。原理與初發(fā)酵試驗(yàn)相同，經(jīng)24小時(shí)培養(yǎng)產(chǎn)酸又產(chǎn)氣的，最后確定為大腸菌群陽性結(jié)果。6整理ppt三、器材

1、培養(yǎng)基乳糖蛋白胨發(fā)酵管〔內(nèi)有倒置小套管〕，三倍濃縮乳糖蛋白胨發(fā)酵管〔瓶〕〔內(nèi)有倒置小套管〕，伊紅美藍(lán)瓊脂平板，滅菌水；2、儀器或其他用具載玻片，滅菌帶玻璃塞空瓶，滅菌吸管，滅菌試管等。7整理ppt四、操作步驟1．水樣的采取1)自來水先將自來水龍頭用火焰燒灼3min滅菌，再開放水龍頭使水流5min后，以滅菌三角燒瓶接取水樣，以待分析。2〕池水、河水或湖水應(yīng)取距水面10～15cm的深層水樣，先將滅菌的帶玻璃塞瓶，瓶口向下浸入水中，然后翻轉(zhuǎn)過來，除去玻璃塞，水即流入瓶中，盛滿后，將瓶塞蓋好，再從水中取出。最好立即檢查，否那么需放入冰箱充分冷卻。8整理ppt2．自來水檢查〔1〕初〔步〕發(fā)酵試驗(yàn)在2個(gè)含有50ml三倍濃縮的乳糖蛋白胨發(fā)酵燒瓶中，各參加100ml水樣。在10支含有5ml三倍濃縮乳糖蛋白胨發(fā)酵管中，各參加10ml水樣〔如圖ⅩⅣ-1〕?；靹蚝?，37℃培養(yǎng)24小時(shí)，24小時(shí)未產(chǎn)氣的繼續(xù)培養(yǎng)至48小時(shí)。〔2〕平板別離經(jīng)24小時(shí)培養(yǎng)后，將產(chǎn)酸產(chǎn)氣及48小時(shí)產(chǎn)酸產(chǎn)氣的發(fā)酵管〔瓶〕，分別劃線接種于伊紅美藍(lán)瓊脂平板上，再于37℃下培養(yǎng)18～24小時(shí)，將符合以下特征的菌落的一小局部，進(jìn)行涂片，革蘭氏染色，鏡檢。9整理ppt〔a〕深紫黑色、有金屬光澤?！瞓〕紫黑色、不帶或略帶金屬光澤。〔c〕淡紫紅色、中心顏色較深?！?〕復(fù)發(fā)酵試驗(yàn)經(jīng)涂片、染色、鏡檢，如為革蘭氏陰性無芽孢桿菌，那么挑取該菌落的另一局部，重新接種于普通濃度的乳糖蛋白胨發(fā)酵管中，每管可接種來自同一初發(fā)酵管的同類型菌落1～3個(gè)，37℃培養(yǎng)24小時(shí)，結(jié)果假設(shè)產(chǎn)酸又產(chǎn)氣，即證實(shí)有大腸菌群存在。證實(shí)有大腸菌群存在后，再根據(jù)初發(fā)酵試驗(yàn)的陽性管〔瓶〕數(shù)查表ⅩⅣ-2，即得大腸菌群數(shù)。10整理ppt11整理ppt3．池水、河水或湖水等的檢查〔1〕將水樣稀釋成10-1與10-2?！?〕分別吸取1ml10-2、10-1的稀釋水樣和1ml原水樣，各裝入有10ml普通濃度乳糖蛋白胨發(fā)酵管中。另取10ml和100ml原水樣，分別注入裝有5ml和50ml三倍濃縮乳糖蛋白胨發(fā)酵液的試管〔瓶〕中。

12整理ppt〔3〕以下步驟同上述自來水的平板別離和復(fù)發(fā)酵試驗(yàn)?！?〕將100、10、1、0.1〔10-1〕ml水樣的發(fā)酵管結(jié)果查表ⅪⅤ-3，將10、1、0.1〔10-1〕、0.01〔10-2〕ml水樣的發(fā)酵管結(jié)果查表ⅪⅤ-4，即得每升水樣中的大腸菌群數(shù)。13整理ppt14整理ppt15整理ppt16整理ppt初發(fā)酵前17整理ppt初發(fā)酵后陽性管---產(chǎn)酸、產(chǎn)氣結(jié)果18整理pptEMB平板別離典型結(jié)果1---綠色金屬光澤菌落19整理pptEMB平板別離典型結(jié)果2---黑紫色不帶或略帶金屬光澤菌落20整理pptEMB平板別離典型結(jié)果3---淡紫紅色中心顏色較深菌落21整理ppt復(fù)發(fā)酵實(shí)驗(yàn)結(jié)果----產(chǎn)酸、產(chǎn)氣22整理ppt五、實(shí)驗(yàn)報(bào)告

〔1〕自來水100ml水樣的陽性管數(shù)是多少？10ml水樣的陽性管數(shù)是多少？查表ⅪⅤ-2得每升水樣中大腸菌群數(shù)是多少？〔2〕池水、河水或湖水陽性結(jié)果記“+〞；陰性結(jié)果記“-〞。查表ⅪⅤ-3得每升水樣中大腸菌群數(shù)是多少？查表ⅪⅤ-4得每升水樣中大腸菌群數(shù)是多少？23整理ppt2