青霉胺驅(qū)銅神經(jīng)毒性的研究

青霉胺驅(qū)銅神經(jīng)毒性的研究青霉胺引起神經(jīng)型WD患者加重銅重分布假說----腦內(nèi)游離銅的升高青霉胺是否具有直接的神經(jīng)毒性？周香雪,李洵樺,梁秀齡,等.青霉胺治療引起肝豆狀核變性神經(jīng)癥狀加重.中華神經(jīng)科雜志,2009,41(10):674-677.BrewerGJ,TerryCA,AisenAM,etal.WorseningofneurologicsyndromeinpatientswithWilson'sdiseasewithinitialpenicillaminetherapy.ArchNeurol,1987,44(5):490-493.BrewerGJ.Therisksoffreecopperinthebodyandthedevelopmentofusefulanticopperdrugs.CurrOpinClinNutrMetabCare,2008,11(6):727-732.KalitaJ,KumarV,ChanraS,etal.WorseningofWilsonDiseasefollowingPenicillamineTherapy.EurNeurol,2014,71(3-4):126-131.研究內(nèi)容1TX小鼠青霉胺驅(qū)銅神經(jīng)毒性的研究2青霉胺對神經(jīng)細胞毒性的體外研究第一部分TX小鼠青霉胺驅(qū)銅神經(jīng)毒性的研究6月齡TX小鼠及對照小鼠TX小鼠青霉胺組TX小鼠生理鹽水組C57小鼠青霉胺組灌胃3天、7天、14天行為學(xué)評定組織銅動員情況BBB檢測HE、LFB、尼氏線粒體結(jié)構(gòu)和功能微透析獲取腦細胞外液，檢測驅(qū)銅后腦、肝、腎臟、血清、腦細胞外液銅含量技術(shù)路線青霉胺驅(qū)銅后TX小鼠發(fā)生運動障礙A:震顫、運動遲緩B:頸部肌張力障礙行為學(xué)評定早期TX小鼠運動協(xié)調(diào)障礙自主活動計數(shù)滾軸實驗游泳實驗青霉胺驅(qū)銅后各組織銅動員驅(qū)銅后腦細胞外液升高的銅來自腦結(jié)合銅肝(μg/g)腦(μg/g)腎臟(μg/g)腦細胞外液(μg/L)血清(μg/L)0102541.9362548.5209.53d63236.158.74218.7533.1青霉胺驅(qū)銅后髓鞘早期發(fā)生破壞LFB電鏡0d3d7d青霉胺驅(qū)銅后腦線粒體結(jié)構(gòu)破壞，功能降低AB第二部分青霉胺神經(jīng)細胞毒性的體外研究體外培養(yǎng)TX小鼠原代神經(jīng)元及星形膠質(zhì)細胞銅、青霉胺、銅和青霉胺共同孵育光鏡下觀察神經(jīng)元細胞MTT檢測發(fā)現(xiàn)青霉胺銅共孵育時神經(jīng)細胞活力明顯降低青霉胺絡(luò)合銅導(dǎo)致ROS產(chǎn)生增加NeuronAstrocyte青霉胺和銅絡(luò)合降低線粒體膜電位青霉胺驅(qū)銅后TX小鼠運動協(xié)調(diào)功能降低，肝、腦總銅含量降低，而血清、腎臟、腦細胞外液中游離銅升高，腦細胞外液升高的游離銅來自于腦內(nèi)蓄積的銅；驅(qū)銅早期可引起髓鞘、線粒體結(jié)構(gòu)和功能的破壞。體外培養(yǎng)證實單純青霉胺在一定濃度下不影響神經(jīng)細胞的活性，當青霉胺和銅絡(luò)合時導(dǎo)致ROS產(chǎn)生增加、線