抗苗勒管激素與多囊卵巢不孕患者有卵的關(guān)系

抗苗勒管激素與多囊卵巢不孕患者有卵的關(guān)系

抗育苗激素（pmh）是轉(zhuǎn)化生長因子（trans塑造）。fatorsβ,TGF-β)超家族的成員之一,主要由竇前及小竇卵泡的顆粒細(xì)胞產(chǎn)生。研究表明多囊卵巢(polycysticovary,PCO)婦女的血清AMH濃度比正常婦女明顯增高,PCO患者WHOⅡ型無排卵不孕婦女血清AMH明顯增高,提示AMH增高可能與小竇卵泡數(shù)過多及卵泡生長停滯有關(guān),然而部分PCO婦女仍有正常排卵,其血清AMH水平是否有變化未見報道。血清AMH水平與卵泡生長停滯是否有關(guān)值得進(jìn)一步研究。本研究比較了正常婦女和PCO婦女之間,以及排卵正常與排卵障礙的PCO婦女之間的血清及排卵前卵泡液(follicularfluid,FF)AMH水平,探討血清AMH水平與PCO是否排卵的關(guān)系。數(shù)據(jù)和方法一、群、不同的、多模型及一般資料監(jiān)測的不同選擇2007年2月~2007年10月就診于北京大學(xué)第三醫(yī)院生殖中心的不孕癥患者102例,分為3組:正常對照組(A組)35例:因單純輸卵管因素致繼發(fā)不孕的婦女,月經(jīng)周期25~34d,B超監(jiān)測卵巢形態(tài)正常,排卵正常,性激素檢測正常,研究前3個月未使用口服避孕藥等藥物治療;PCO伴排卵正常組(B組)29例:一側(cè)或雙側(cè)卵巢直徑2~9mm的卵泡≥12個和/或卵巢體積≥10ml,月經(jīng)正常,月經(jīng)周期為25~34d,超聲監(jiān)測排卵正常;PCO伴排卵障礙組(C組)38例:一側(cè)或雙側(cè)卵巢直徑2~9mm卵泡≥12個和/或卵巢體積≥10ml,月經(jīng)稀發(fā)(周期≥35d或每年≥3個月不排卵者)或閉經(jīng)(停經(jīng)時間超過3個以往月經(jīng)周期或停經(jīng)時間≥6個月)。所有研究對象排除下丘腦垂體疾病、甲狀腺功能異常、高泌乳素血癥、子宮內(nèi)膜異位癥以及卵巢手術(shù)或放化療史等。本研究由北京大學(xué)第三醫(yī)院倫理委員會批準(zhǔn),所有患者均簽署知情同意書。二、實(shí)驗(yàn)方法1.gn的應(yīng)用所有不孕患者均采用促性腺激素釋放激素激動劑(GnRH-a)短方案超排卵。于月經(jīng)第2d(d2)記錄小竇卵泡數(shù)(D=2~9mm),開始應(yīng)用GnRH-a和促性腺激素(Gn),依據(jù)患者年齡及B超提示的小竇卵泡數(shù)確定Gn起始劑量150~450U/d;依據(jù)雌二醇水平及陰道超聲檢查卵泡發(fā)育情況,調(diào)整Gn用量;當(dāng)優(yōu)勢卵泡直徑達(dá)18mm或至少有3個直徑達(dá)16mm卵泡時,當(dāng)日注射人絨毛膜促性腺激素(humanchorionicgonadotrophin,HCG)10000IU,36h后經(jīng)陰道超聲引導(dǎo)下取卵。2.陰道超聲引導(dǎo)局部離群所有研究對象于月經(jīng)d2,早晨8:00~9:00抽取空腹靜脈血,3000轉(zhuǎn)離心3min,分離血清,-80℃保存?zhèn)溆谩Ｋ谢颊哂诓陕讶?dOPU),在陰道超聲引導(dǎo)下,選擇一個18~20mm的成熟卵泡取卵,留取單卵泡的FF。FF在3000轉(zhuǎn)離心15min,-80℃保存?zhèn)溆谩?.ff蛋白的檢測血清AMH的檢測應(yīng)用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)(美國Beckman公司)。血清雌二醇(E2)、卵泡刺激素(FSH)、黃體生成素(LH)、睪酮(T)、雄烯二酮(A)的檢測應(yīng)用酶放大化學(xué)發(fā)光技術(shù)(美國DPC德普全自動分析儀)。FF中AMH、E2和P的檢測采用同樣方法,但為避免FF量的差異可能引起的偏差,FF的激素濃度被調(diào)整到每克蛋白的相對含量。FF蛋白含量的檢測應(yīng)用常規(guī)的雙縮脲反應(yīng)法(美國Pierce公司的BCAProteinAssay試劑盒)。FF的激素水平表示為每克蛋白(protein,pro)中AMH、E2和P的含量。AMH的測定范圍0.05~15ng/ml。E2的測定范圍73~7340pmol/L。三、組間差異比較時采用SPSS10.0軟件系統(tǒng)進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。若數(shù)據(jù)符合正態(tài)分布,采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示,否則采用中位數(shù)和全距表示。組間差異比較時,若數(shù)據(jù)符合正態(tài)分布,采用T檢驗(yàn)和方差分析,若數(shù)據(jù)不符合正態(tài)分布,經(jīng)LN數(shù)學(xué)換算后,若新變量符合正態(tài)分布,仍采用t檢驗(yàn)和方差分析,否則采用Mann-whitneyU檢驗(yàn)和Kruskal-Wallis檢驗(yàn)。相關(guān)性使用簡單相關(guān)和偏相關(guān)分析,P<0.05有統(tǒng)計學(xué)意義。結(jié)果一、兩組bmi、2d小竇卵數(shù)和fsh水平比較各組的年齡及E2比較,差異無顯著性(P>0.05)。B組和C組的BMI、d2小竇卵泡數(shù)和FSH水平比較,差異無顯著性(P>0.05),但兩組的BMI和d2小竇卵泡數(shù)顯著高于A組,FSH水平顯著低于A組,差異有均顯著性(P<0.05)。C組的LH、LH/FSH、T及A顯著高于B組及A組,差異有顯著性(P<0.05),但B組和A組以上指標(biāo)比較,差異無顯著性(P>0.05)(表1)。二、兩組全距2.514.80ng/ml的2d血清amh水平比較B組(中位數(shù)5.87ng/ml;全距2.34~15.61ng/ml)與C組(中位數(shù)7.99ng/ml;全距3.13~14.80ng/ml)的d2血清AMH水平比較,差異無顯著性(P=0.305),但均顯著高于A組(中位數(shù)2.52ng/ml;全距0.22~10.80ng/ml)(P=0.002,P=0.000)。三、下卵前單卵干的amh和k1. B組(中位數(shù)54.77ng/gpro;全距22.3~203.3ng/gpro)和C組(中位數(shù)64.05ng/gpro;全距19.6~281ng/gpro)排卵前單卵泡的FF的AMH水平比較,差異無顯著性(P=0.221),但均顯著高于A組(中位數(shù)29.45ng/gpro;全距8.1~160.9ng/gpro),差異有顯著性(P=0.035,P=0.000)。2. 各組的排卵前單卵泡的FF的E2和P水平比較,差異無顯著性(P>0.05)(表2)。3. PCO組和正常組的FF的AMH、E2和P之間的相關(guān)分析顯示無相關(guān)性(P>0.05)。四、d血清amh與年齡的關(guān)系1. 月經(jīng)d2的血清AMH與小竇卵泡數(shù)呈正相關(guān)(r=0.53,P<0.05)。2. A組的月經(jīng)d2血清AMH與年齡呈負(fù)線性相關(guān)(r=-0.46,P<0.05),隨年齡升高,AMH顯著降低;而B組加C組(合并為PCO組)d2血清AMH與年齡無線性相關(guān)(r=-0.12,P>0.05),隨年齡升高,AMH無明顯變化。3. B組和C組的血清AMH與FSH無線性相關(guān)。A組的d2血清AMH與FSH水平呈線性相關(guān)(r=-0.50,P<0.05),但控制d2小竇卵泡數(shù)影響后,A組的d2血清AMH與FSH無線性相關(guān)(P>0.05)。4.所有研究組的d2血清AMH及FF的AMH水平與BMI、LH、T、A均無相關(guān)性(P>0.05)。比較兩組AMH水平及回歸線的斜率。正常組中,AMH與年齡呈負(fù)相關(guān)(P<0.05),隨年齡升高,AMH明顯降低。PCO組中,AMH與年齡不相關(guān)(P>0.05),隨年齡升高,AMH降低不顯著。血amh含量PCO是卵泡發(fā)育異常的典型代表之一,患者常表現(xiàn)為卵泡發(fā)育停滯在竇前和小竇卵泡階段,其小竇卵泡過多及卵泡成熟障礙的原因至今不清。近年來的研究發(fā)現(xiàn),卵泡的發(fā)生和發(fā)育受卵巢內(nèi)一些因子的自分泌和旁分泌影響,其中卵巢顆粒細(xì)胞分泌的因子——抗苗勒管激素被認(rèn)為在調(diào)控卵泡生長和發(fā)育中起到了重要的作用。動物實(shí)驗(yàn)研究提示AMH抑制卵泡生長,并可能參與了卵泡形成的兩個重要調(diào)控,即始基卵泡募集和周期募集。Baarends等研究發(fā)現(xiàn)每個卵泡有其FSH閾值,對FSH閾值低的卵泡將成為優(yōu)勢卵泡,AMH抑制FSH敏感性的作用在卵泡選擇中可能發(fā)揮作用,高水平的AMH可能會降低卵泡對FSH的敏感性,從而導(dǎo)致卵泡發(fā)育障礙,進(jìn)而無排卵。本研究PCO婦女月經(jīng)第2d的血清AMH水平顯著高于正常組,并與小竇卵泡數(shù)顯著相關(guān),與既往的研究一致。Pigny等研究發(fā)現(xiàn)PCOS患者卵泡早期的血清AMH濃度與2~5mm小竇卵泡數(shù)目相關(guān),均較正常組增加2~3倍,本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)PCO患者排卵前FF的AMH濃度顯著升高,約為正常組的2倍。與Fallat等的研究結(jié)果一致。因此,PCO患者血清AMH水平顯著升高,不僅因其小竇卵泡數(shù)顯著高于正常人,而且其排卵前單卵泡FF的AMH水平也顯著增高,提示PCO患者顆粒細(xì)胞可能存在AMH分泌異常。本研究發(fā)現(xiàn)PCO伴排卵正常組和排卵障礙組的婦女血清和FF的AMH水平無顯著差異,但均顯著高于對照組,表明PCO婦女AMH水平較正常婦女顯著升高,而在有無排卵障礙的患者間沒有差異,提示血清AMH增高可能不是造成卵泡生長停滯的原因。與Laven等的研究一致,PCO婦女增高的AMH水平可能主要是由于小竇卵泡數(shù)目增多引起的,與有無排卵無關(guān)。月經(jīng)周期正常的婦女,整個月經(jīng)期的血清AMH無明顯變化,提示AMH隨月經(jīng)周期改變極小。但AMH與小竇卵泡數(shù)顯著相關(guān),比月經(jīng)第3天卵泡刺激素、雌二醇和抑制素B更早、更準(zhǔn)確、重復(fù)性更好地反映卵巢儲備功能。本研究發(fā)現(xiàn)在正常組中血清AMH隨基礎(chǔ)FSH的增加而顯著降低,但在控制小竇卵泡數(shù)的影響后兩者無相關(guān)性,在PCO組兩者也無相關(guān)性,表明血清FSH與AMH互不影響,可作為預(yù)測卵巢儲備功能的指標(biāo)。生育年齡后期,隨年齡增加,初始募集的卵泡數(shù)量逐漸減少,血清AMH逐漸降低。既往研究顯示正常婦女隨年齡增加血清AMH明顯降低,但對PCO患者的研究結(jié)果顯示,其血清AMH濃度隨年齡增長降低并不顯著。Piltonen等的一組跟蹤調(diào)查也顯示,間隔2~6年再次檢測PCOS和正常婦女血AMH水平,