卵巢顆粒細(xì)胞瘤w-1蛋白、amh、er和pr的表達(dá)及意義

卵巢顆粒細(xì)胞瘤w-1蛋白、amh、er和pr的表達(dá)及意義

卵巢gct是一種低度惡性的性早胞腫瘤。目前，國(guó)內(nèi)外對(duì)其發(fā)生和發(fā)展的研究仍然空白，關(guān)于其特定標(biāo)記的研究也很少。amh被認(rèn)為是卵巢gct中最敏感、最具特異性的標(biāo)記之一。stattig等人和gao提出，wt-1蛋白可以調(diào)節(jié)pmh的表達(dá)，wt-1基因是amh的上游調(diào)節(jié)基因。另外分泌雌激素是卵巢GCT重要的臨床特點(diǎn)。本研究分析WT-1蛋白、AMH、ER、PR在卵巢GCT的表達(dá)情況。目的是評(píng)價(jià)它們作為卵巢GCT輔助診斷指標(biāo)和評(píng)估預(yù)后的可能性,及了解WT-1蛋白在卵巢GCT發(fā)生發(fā)展過(guò)程中的作用。1材料和方法1.1患者性別、年齡37例卵巢GCT石蠟包埋標(biāo)本來(lái)源于山西醫(yī)科大學(xué)第一臨床醫(yī)學(xué)院、省婦幼院等幾家醫(yī)院2000-2008年病理檔案?；颊吣挲g16-75歲,平均(47.5±14.17)歲,30歲以內(nèi)6例,30-50歲17例,50歲以上14例,均為單側(cè)。其中28例卵巢GCT組織采用組織微陣列法,陰性者再做常規(guī)切片篩查。1.2組織病理學(xué)檢測(cè)調(diào)取相應(yīng)蠟塊重新制作HE切片,光鏡下復(fù)查以確定臨床診斷。所有病例均參照1978年WHO卵巢腫瘤分類法進(jìn)行組織學(xué)分級(jí),高分化20例,中分化11例,低分化6例。按2000年FIGO標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行臨床分期,Ⅰ期23例,Ⅱ期10例,Ⅲ期4例。另外選取2008年山西醫(yī)科大學(xué)第一臨床醫(yī)院的10例正常卵巢組織(系因子宮疾病手術(shù)切除)作為正常組。1.3免疫組化染色WT-1蛋白、ER、PR單克隆抗體及二抗,均購(gòu)于北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司,AMH單克隆抗體購(gòu)自英國(guó)AbDseroTec公司。免疫組化染色采用EnVision二步法,抗原修復(fù)均采用高壓熱修復(fù)法。每次實(shí)驗(yàn)均設(shè)陽(yáng)性和陰性對(duì)照,以PBS代替一抗作為陰性對(duì)照。1.4染色陽(yáng)性部位及陽(yáng)性細(xì)胞濃度顆粒細(xì)胞無(wú)棕黃色顆粒為陰性,有棕黃色顆粒為陽(yáng)性(WT-1蛋白、ER、PR陽(yáng)性部位均為胞核,AMH陽(yáng)性部位為胞質(zhì)),根據(jù)染色強(qiáng)度及陽(yáng)性細(xì)胞的多少,將陽(yáng)性分為:弱陽(yáng)性(+):僅在高倍顯微鏡(HPF)下看到,10個(gè)高倍視野的陽(yáng)性細(xì)胞平均數(shù)≤25%;強(qiáng)陽(yáng)性(+++):著色深,低倍鏡下顯而易見,陽(yáng)性細(xì)胞平均數(shù)≥50%;陽(yáng)性(++):介于弱陽(yáng)性與強(qiáng)陽(yáng)性之間。采用雙盲閱片法。1.5統(tǒng)計(jì)分析數(shù)據(jù)以百分率計(jì),用SPSS11.5軟件實(shí)現(xiàn)對(duì)R×C表和四格表資料的Fisher確切概率法檢驗(yàn),以α=0.05為檢驗(yàn)水準(zhǔn)。2結(jié)果2.1卵巢gct、amh、gct表達(dá)的表達(dá)免疫組化染色顯示,WT-1蛋白、ER和PR在卵巢GCT的陽(yáng)性表達(dá)表現(xiàn)為在顆粒細(xì)胞的胞核中有棕黃色顆粒,AMH的陽(yáng)性表達(dá)表現(xiàn)為在顆粒細(xì)胞的胞質(zhì)中有棕黃色顆粒,見圖1(見第1056頁(yè))。2.2h和wt-1蛋白表達(dá)水平比較在正常卵巢組織中AMH和WT-1蛋白都只有1例陽(yáng)性表達(dá),ER和PR分別有1例和2例陽(yáng)性表達(dá)。在卵巢GCT中AMH和WT-1蛋白的陽(yáng)性率都為89.2%,ER和PR陽(yáng)性率都為70.3%。WT-1蛋白、AMH和ER的表達(dá)水平腫瘤組織明顯高于正常組組織(P<0.05),且高、中分化組的表達(dá)明顯高于低分化組,Ⅰ、Ⅱ期明顯高于Ⅲ期(P<0.05)。而PR的表達(dá)在不同組之間的差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。各指標(biāo)在不同組織分化及臨床分期的表達(dá)見表1。2.3相關(guān)分析經(jīng)統(tǒng)計(jì)分析,WT-1蛋白和AMH的表達(dá)呈正相關(guān)關(guān)系,ER和PR的表達(dá)亦呈正相關(guān)關(guān)系(P<0.01),見表2和表3。3amh在組織、組織和臨床分期中的表達(dá)WT-1蛋白在幾種中胚層起源的組織中都有表達(dá),包括腎臟、性腺、心血管系統(tǒng)及脾臟。有研究發(fā)現(xiàn),它不僅有調(diào)節(jié)DNA轉(zhuǎn)錄和參與RNA的轉(zhuǎn)錄后過(guò)程的功能,還具有轉(zhuǎn)錄激活、轉(zhuǎn)錄抑制、誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡、抑制細(xì)胞凋亡的生物學(xué)作用。在生殖系統(tǒng)中,它不僅表達(dá)于女性性腺及男性睪丸索發(fā)生的全過(guò)程中,而且也表達(dá)于男女成人性腺組織中。在卵巢,WT-1蛋白表達(dá)于卵泡成熟過(guò)程中的顆粒細(xì)胞,尤其高表達(dá)于次級(jí)卵泡。它可抑制早期卵泡的生長(zhǎng)。在一些生殖系統(tǒng)惡性腫瘤中,包括卵巢漿液性癌、子宮內(nèi)膜癌、輸卵管癌中都有WT-1mRNA的表達(dá)。AMH是轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β(TGF-β)超家族的一個(gè)成員,它的表達(dá)僅限于性腺,由男女性腺細(xì)胞——支持細(xì)胞和顆粒細(xì)胞分泌,具有促進(jìn)苗勒管退化,參與早期性器官定向分化的作用。AMH可以抑制顆粒細(xì)胞的增生,在卵巢GCT時(shí)可成倍的增長(zhǎng)。AMH水平升高而不能抑制顆粒細(xì)胞增生的可能原因有:①AMH基因突變;②AMH相關(guān)受體缺失、減少或基因突變;③AMH上游相關(guān)調(diào)控基因或其他抑癌基因的突變或甲基化。Gao等通過(guò)體外實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)WT-1蛋白可以通過(guò)直接或間接上調(diào)AMH的表達(dá),在早期性器官的發(fā)生和性別的分化過(guò)程中發(fā)揮作用。當(dāng)其缺失或失活時(shí)AMH表達(dá)減少,而當(dāng)其過(guò)度表達(dá)時(shí)AMH表達(dá)成倍上調(diào)。WT-1基因可能為AMH的上游調(diào)控基因。本實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)WT-1蛋白和AMH在腫瘤組織中的表達(dá)明顯高于其在正常組織中的表達(dá),且相關(guān)分析表明WT-1蛋白與AMH有正相關(guān)關(guān)系,說(shuō)明WT-1蛋白還能發(fā)揮其調(diào)控AMH表達(dá)的作用,間接的反應(yīng)出WT-1基因在卵巢GCT的發(fā)生過(guò)程中沒(méi)有突變,所以WT-1蛋白沒(méi)有喪失其生物學(xué)活性。從而排除了是上游調(diào)控基因的突變?cè)斐葾MH不能抑制腫瘤性的顆粒細(xì)胞增生這一可能因素。AMH的高表達(dá)可能只是WT-1蛋白上調(diào)的結(jié)果,并且我們得出卵巢GCT的發(fā)生可能不是WT-1基因突變而影響細(xì)胞分化造成的。我們知道WT-1蛋白和AMH都在性器官的發(fā)生過(guò)程中發(fā)揮重要作用,它們都和性腺細(xì)胞的分化程度有關(guān)。這就提示我們它們的表達(dá)水平在卵巢GCT的組織分化中是一個(gè)關(guān)鍵因素。在胚胎性腺分化完成后,WT-1基因在細(xì)胞核的表達(dá)可能即被關(guān)閉,WT-1蛋白作為促分化因子的功能停止,在成熟的卵泡中不再表達(dá)。而在腫瘤發(fā)生后,WT-1基因作為一個(gè)促分化基因開始高表達(dá),腫瘤組織的分化程度和WT-1蛋白表達(dá)水平有關(guān)。同樣,在腫瘤發(fā)生后,AMH的表達(dá)水平也和細(xì)胞的分化程度有關(guān),所以WT-1蛋白和AMH的表達(dá)水平可作為腫瘤分化的指標(biāo)。同時(shí),組織分化好的病例臨床分期也大多較早,了解WT-1蛋白和AMH的表達(dá)水平有助于對(duì)預(yù)后的評(píng)估。雌孕激素主要由顆粒細(xì)胞、卵泡膜細(xì)胞和黃體細(xì)胞分泌,通過(guò)和其受體結(jié)合發(fā)揮作用。卵巢既是雌孕激素的分泌器官又是其作用的靶器官。雌激素的主要作用是促進(jìn)生殖器官的細(xì)胞增殖和分化。而卵巢GCT時(shí)可以出現(xiàn)雌激素高水平分泌的現(xiàn)象。本研究中ER的表達(dá)水平腫瘤組明顯高于正常組,且高、中分化組的陽(yáng)性率明顯高于低分化組,Ⅰ、Ⅱ期明顯高于Ⅲ期。PR的表達(dá)水平在正常組、不同組織分化及臨床分期之間的差異沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。但是兩者的表達(dá)有正相關(guān)關(guān)系。據(jù)已有研究表明,分泌雌激素是卵巢GCT的重要臨床特點(diǎn),可以提示我們卵巢GCT可能是激素依賴性的腫瘤,ER的水平可以間接的反映雌激素的水平,以了解卵巢GCT的組織分化和臨床分期情況,可作為分化好、對(duì)激素治療敏感的卵巢GCT的指標(biāo),為病理診斷和臨床選擇內(nèi)分泌治療提供