復元醒腦湯對高血壓性腦出血大鼠腦組織形態(tài)學改變的干預作用

復元醒腦湯對高血壓性腦出血大鼠腦組織形態(tài)學改變的干預作用

腦出血（ch）是指核電站大腦實質的非創(chuàng)傷性出血。這是一種常見的臨床疾病，主要由高血壓引起。高血壓伴發(fā)腦內小動脈病變,當血壓驟升時破裂出血,稱為高血壓性腦出血。腦出血后引起機體和腦組織局部發(fā)生系列病理生理學反應,在血腫周圍腦組織形成水腫帶,繼而引起神經細胞及其軸突的變性和壞死。腦出血后腦水腫的預防和治療為臨床實踐中重要一環(huán),在降低患者死亡率和致殘率、改善患者生活質量方面起重要作用。臨床應用復元醒腦湯治療腦出血取得顯著臨床效果,為了進一步探討復元醒腦湯治療腦出血的作用機理,本實驗擬在建立高血壓性腦出血大鼠模型基礎上,觀測復元醒腦湯對其神經功能缺損、腦組織含水量、腦組織病理形態(tài)學改變的干預作用。1材料和方法1.1w對大鼠的生長和形態(tài)SHR大鼠80只,雄性,體重320±20g,SPF級;京都Wista(WistarKyoto,WKY)大鼠20只,雄性,體重320±20g,SPF級。由上海斯萊克實驗動物有限責任公司提供,動物合格證:SCXK(滬)2007-005,飼養(yǎng)于上海中醫(yī)藥大學附屬龍華醫(yī)院科技樓實驗動物中心。1.2儀器、設備和測試箱膠原酶Ⅶ、Sigma-AldrichInc(USA);肝素、常州千紅生化制藥股份有限公司;RBP-1型大鼠尾壓心率測定儀、北京中日友好醫(yī)院臨床醫(yī)學研究所;ZH-藍星B型腦立體定位儀、淮北正華生物儀器設備有限公司;微量進樣器、上海安亭微量進樣器廠;FA2004B電子天平、上海精密科學儀器有限公司;恒宇電熱恒溫鼓風干燥箱C01-1-BS、上海躍進醫(yī)療器械廠;電熱恒溫水箱(HH-W21-420)、上海躍進醫(yī)療器械廠;LEICACM1900冰凍切片機、LEICAInc(GER);LEICATP1020自動脫水機、LEICAInc(GER);LEICAEG1160自動包埋機、LEICAInc(GER)。1.3生藥/l-g-l復元醒腦湯(人參9g單煎、三七15g,膽南星15g,大黃9g后下等),由本院制劑室生產提供,濃度為1200g生藥/L;安宮牛黃膠囊由河北安國藥業(yè)集團有限公司生產,0.4g/粒,批號:066401。1.4實驗方法1.4.1shr大鼠隨機稱重購得動物后,適應性喂養(yǎng)1周,運用大鼠心率血壓計測定大鼠尾動脈收縮壓,SHR大鼠血壓達到21.3KPa以上后,統(tǒng)一稱重,按林氏方法應用SPSS11.5軟件包將SHR大鼠隨機分為SHR假手術組(SHRS,N=20)、SHR模型組(SHRM,N=20)、SHR安宮牛黃膠囊組(SHRTa,N=20)、SHR復元醒腦湯組(SHRTf,N=20);WKY大鼠為假手術對照組(WKYS,N=20)。1.4.2臥位未開孔口的皮膚損傷模型以任氏膠原酶加肝素聯(lián)合尾狀核注射誘導的方法建立腦出血動物模型。造模前1日,各組大鼠禁食。大鼠經10%水合氯醛(400mg/kg)腹腔麻醉。頭頂備皮后俯臥位固定于ZH-藍星B型腦立體定位儀上,正中矢狀切開頭皮,剝離骨膜,調節(jié)門齒托的高度,使動物的前、后囟處于同一水平。頭皮下正中切口約0.8cm,于顱骨背側前囟后0.2mm、中線旁2.9mm處鉆孔,用固定于立體定位儀上的微量進樣器沿鉆孔進針,深約6mm(此處為尾狀核位置),注射含有0.5U/μl膠原酶Ⅶ和7U/μl肝素的生理鹽水1μl,緩慢退針,鉆孔處填入明膠海綿,縫合皮膚。WKY假手術組與SHR假手術組除注入尾殼核的液體為生理鹽水外,其余步驟同模型組。1.4.3灌胃反應,定期灌胃SHR復元醒腦湯組于造模成功后,每日按生藥4.22g/kg體重/d給予復元醒腦湯灌胃,每日1次,連續(xù)3天;SHR安宮牛黃膠囊對照組于造模成功后,每日按169mg/kg體重/d給予安宮牛黃膠囊灌胃,每日1次,連續(xù)3天。WKY假手術組、SHR假手術組、SHR模型組于造模成功后每日灌胃生理鹽水1ml,每日1次,連續(xù)3天。1.5測試項目和方法1.5.1血壓測定大鼠適應性喂養(yǎng)1周后,運用RBP-1型大鼠心率血壓計,在大鼠清醒狀態(tài)下經尾動脈測定收縮壓,每只大鼠測3次,取平均值。1.5.2前嘴唇戰(zhàn)略造模后3天,各組大鼠采用Bederson神經體缺損行為體征評分法進行評分。輕抓鼠尾,提起高于地面1m,正常大鼠前爪伸直。0級(0分):無神經功能缺損I級(1分):血腫對側前肢回收屈曲于腹下,同側前肢向地面伸展II級(2分):I級體征+俯臥于桌面時從血腫側向對側推大鼠時阻力降低III級(3分):I級體征+II級體征+大鼠行走時向血腫對側肢體旋轉(呈追尾狀)1.5.3腦含水量檢測腦組織含水量(BrainWaterContent,BWC)采用干濕腦重法測定。造模后3天,每組各取6只大鼠,10%水合氯醛腹腔注射麻醉后處死,迅速開顱取腦,取血腫周圍腦組織(WKY假手術組和SHR假手術組取相應部位腦組織),電子天平先稱取濕重,放入電熱恒溫鼓風干燥箱100℃烘烤24h,再稱取干重,計算腦組織含水量:1.5.4灌注鹽水、開顱取腦造模后3天,每組各取3只大鼠,10%水合氯醛腹腔注射麻醉,迅速開胸暴露心臟,灌注針頭從左心室插至主動脈根部,在右心耳處剪開作為出口,迅速灌注生理鹽水總量約200ml,至右心耳流出液體無血色后,灌注4%多聚甲醛,至大鼠四肢變硬,口唇、內臟變白,迅速開顱取腦。取病灶側(SHR假手術組和WKY假手術組取相應部位)腦組織置于10%中性甲醛溶液中固定,經梯度酒精序列脫水、浸蠟、石蠟包埋,切5μm片,蘇木精-伊紅(Hematoxylin-Eosin,HE)染色,光學顯微鏡下觀察皮層組織形態(tài)學改變。1.6統(tǒng)計學處理方法應用SPSS11.5統(tǒng)計軟件進行統(tǒng)計學分析。符合正態(tài)分布的計量資料以均數(shù)±標準差()表示,組間均數(shù)比較采用方差分析;等級資料采用Ridit分析。檢驗效能以P<0.05為差異具有顯著性,P<0.01為差異具有非常顯著性。2結果2.1w.shr模型各組大鼠shr的比較由表1可見各組大鼠神經缺損行為體征評分情況:SHR假手術組與WKY假手術組比較差異無顯著意義(P>0.05);SHR模型組、SHR安宮牛黃膠囊組和SHR復元醒腦湯組與WKY假手術組、SHR假手術組比較均具有非常顯著差異(P<0.01)。SHR安宮牛黃膠囊組、SHR復元醒腦湯組與SHR模型組比較均具有顯著差異(P<0.01);SHR安宮牛黃膠囊組與SHR復元醒腦湯組之間比較差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。2.2wy假手術組和shr復元覺腦湯組shr模型組間比較由表2可見,各組大鼠腦組織含水量情況:SHR假手術組與WKY假手術組比較差異不具有統(tǒng)計學意義(P>0.05);SHR模型組、SHR安宮牛黃膠囊組和SHR復元醒腦湯組與WKY假手術組、SHR假手術組比較具有非常顯著差異(P<0.01);SHR安宮牛黃膠囊組和SHR復元醒腦湯組與SHR模型組比較均具有非常顯著差異(P<0.01);SHR復元醒腦湯組與SHR安宮牛黃膠囊組比較無顯著差異(P>0.05)。2.3小鼠皮質細胞毒性變化WKY假手術組大鼠大腦皮層神經細胞排列緊密,胞漿淡染,核仁清楚;SHR假手術組大鼠大腦皮層神經細胞形態(tài)及數(shù)目與WKY假手術組基本相同,可見部分血管壁增厚;SHR模型組大鼠大腦皮層神經細胞數(shù)量明顯減少,細胞腫脹嚴重、排列紊亂,大量神經細胞變性,結構不清,血管內皮細胞腫脹,管腔內血細胞聚集嵌塞微血管,細胞間隙空化明顯;SHR復元醒腦湯治療組大鼠和SHR安宮牛黃膠囊組大鼠大腦皮層神經細胞腫脹程度減輕,微血管內皮細胞的損傷顯著減輕,膠質細胞增多。(見附圖)3痰瘀互結,利瀉水氣腦出血,屬中醫(yī)“中風”的范疇。中醫(yī)學有關中風的記載,始見于《內經》。唐宋以前,諸家皆從內虛邪中之說;金元以降,火、虛、痰等論始發(fā)其端;及至明清,內傷積損、氣虛血瘀、肝陽化風、血氣上逆等說愈發(fā)豐富。其病因多認為與風、火、痰、虛、瘀密切相關。我們在長期臨床過程中發(fā)現(xiàn),中風大多為中老年人,正氣虧虛為中風的基礎?！峨s病源流犀燭·中風源流》云:“人至五六十歲,氣血就衰,乃有中風之病”。《景岳全書·非風》云:“卒倒多由昏憒,本皆內傷積損頹敗而然”。氣虛則痰瘀內生,痰、瘀分別是津、血的病理產物,一旦生成,又成為新的病理過程啟動之因。痰是水液代謝障礙形成的病理產物,痰的生成同脾腎功能密切相關。腎者主水,腎氣不足則水液蒸騰氣化無力,聚而為痰;脾主運化,脾不健運則水濕不化,痰濁內生?！皻鉃檠畮洝?氣虛無力推動血液運行而為瘀血。痰、瘀又可相互促生,膠著為患。痰瘀內阻,郁而化熱,熱極生風;或陰血虧虛,水不涵木,肝陽化風,風火相煽,發(fā)為中風。針對中風“正氣虧虛、痰瘀互結、風火相煽”病機,采取復元醒腦為主,佐以逐瘀化痰、泄熱息風等促進醒腦開竅之法,自擬復元醒腦湯治療腦出血取得良好臨床療效。本方人參、三七、大黃、膽南星等藥共用。人參大補元氣,補脾益肺,脾氣健運,肺氣宣暢,則痰濁自消,氣為血帥,氣盛血行,瘀血自消,可達扶正祛邪之目的,為治本之藥;三七止血不留瘀,針對出血性中風止血,并且可以達到化瘀目的;大黃通腑瀉下,清熱解毒,兼具活血化瘀之功,與三七合用一通一澀,止血不留瘀;膽南星清熱化痰,息風定驚。諸藥合用,方小力專,起“復元醒腦、逐瘀化痰、泄熱熄風”之功。既往對于中醫(yī)藥對腦出血干預作用的實驗研究表明,中藥對腦出血大鼠神經功能有較好的改善作用,同時能明顯降低大鼠腦水腫程度。本實驗結果證實模型組大鼠神經缺損行為顯著惡化,腦組織含水量