H5N6亞型禽流感病毒實時熒光RT-PCR檢測方法_第1頁
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1CT值CYCLETHRESHOLD，反應管的熒光信號達到設定DEPCDIETHYLPROCARBONATERT-PCRREVERSETRANSCRIPTIONPOLYMERASECHAINREACTION熒光信號；而反應進行到延伸階段時，Taq酶發(fā)揮5’→3’的外切核酸酶功能，上的熒光基團游離出來，所發(fā)出的熒光不再為淬滅基團所吸收而被檢測儀所接收。25.2.1試劑級別HAPb：5’FAM-TCWACAGTGGCGAGTTCCCTAGCA-BHQ1-3’HAFP：5’ACRTATGACTAYCCACARTAYTCAG3’HARP：5’AGACCAGCTAYCATGATTGC3’NAPb：5’HEX-CCAATAACAGGAGGGAGCCCAGACCC-BHQ1-3’NAFP：5’CCCCACCAATGGGAACTG3’NARP：5’TCTAGGAATGCAAACCCTTTTACC3’5.2.5其他試劑樣品的采集、保存及運輸應符合GB19489、GB/T3將兩個滅菌的棉拭子于PBS溶液中浸濕，取一個棉拭子先插入活禽喉頭口及上腭裂來回刮3～5次并旋轉(zhuǎn)2～3次；將咽喉拭子和泄殖腔棉拭子一起放入盛有1mL滅菌的0.01moL/LpH7.2PBS(內(nèi)含青霉素將所采組織病料置于潔凈、滅菌并烘干的研磨器中，按質(zhì)量體積比（1:1）加入樣品保存液進行充4H5N6亞型禽流感病毒核酸提取也可以采用等效RNA提取試劑及方法：如采用自動化核酸抽提儀和配9.1反應體系配置（附錄B以AgPath-IDTMOne-StepRT-PCR試劑盒為例，列出反應體系配制表，僅供參考）將配制的每9.2.2.1反應條件設定9.2.2.2通道選擇在試驗成立的條件下，F(xiàn)AM及HEX通道結果均呈現(xiàn)Ct值≤35且呈現(xiàn)典型擴增曲線，判為熒光PCR陽性5檢測經(jīng)40個循環(huán)無Ct值且不出現(xiàn)擴增曲線，或者只出現(xiàn)單一通道有熒光信號，判為熒光PCR陰性反6A.10.01mol/LPBS(pH7.

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