草花覆盆顆粒干預(yù)IgA腎病大鼠NF-kB、FN的實(shí)驗(yàn)研究

草花覆盆顆粒干預(yù)IgA腎病大鼠NF-kB、FN的實(shí)驗(yàn)研究目的:通過應(yīng)用草花覆盆顆粒對(duì)IgA腎病大鼠進(jìn)行藥物干預(yù)治療,觀察IgA腎病大鼠的一般情況、生化指標(biāo)、病理改變以及核轉(zhuǎn)錄因子-kB（NF-kB）和纖維連接蛋白（FN）表達(dá)的變化,探討草花覆盆顆粒干預(yù)IgA腎病的作用機(jī)制。方法:1.模型復(fù)制實(shí)驗(yàn):將20只體重在（150±30）g的清潔級(jí)（SD）大鼠在標(biāo)準(zhǔn)的實(shí)驗(yàn)室環(huán)境中適應(yīng)性飼養(yǎng)1周后隨機(jī)分為A（造模組）和B（空白組）兩組各10只,采用張靜等人的復(fù)合造模法(牛血清白蛋白（BSA）+脂多糖（LPS）+四氯化碳（CCL₄）復(fù)制IgA腎病大鼠模型,將BSA用蒸餾水配成100g/L,按照600mg/kg對(duì)造模組大鼠進(jìn)行灌胃,隔日1次,持續(xù)12周;同時(shí)對(duì)造模組大鼠進(jìn)行皮下注射CCL₄0.1mL和蓖麻油0.3mL,1次/只/周,共12周。并在第8周對(duì)造模組大鼠進(jìn)行尾椎注射LPS,0.5mg/只/次,在同一時(shí)段,空白組均在以上步驟中用等體積的蒸餾水灌胃,等體積生理鹽水注射。兩組大鼠于第12周末采集血液和腎臟組織后殺剪。通過比較兩組大鼠的一般情況、生化指標(biāo)以及腎組織病理改變,確定模型復(fù)制是否成功。2.草花覆盆顆粒干預(yù)IgA腎病大鼠實(shí)驗(yàn):將51只體重在（150±30g）的清潔級(jí)（SD）大鼠在標(biāo)準(zhǔn)的實(shí)驗(yàn)室環(huán)境中適應(yīng)性飼養(yǎng)1周后隨機(jī)分為空白組C（6）,模型組D（15）,科素亞組E（15）,草花覆盆顆粒組F（15）四個(gè)組,按照上述造模方法進(jìn)行造模。在持續(xù)12周造模結(jié)束后,從第13周開始每組進(jìn)行灌胃給藥,連續(xù)8周,科素亞組給予科素亞,草花覆盆顆粒組給予科素亞聯(lián)合草花覆盆顆粒,正常組和模型組每日予以等量蒸餾水灌胃,等體積生理鹽水注射。實(shí)驗(yàn)期間各組以普通飼料,凈化水喂養(yǎng)。在各組大鼠給藥期間,每日觀察大鼠實(shí)驗(yàn)前后的身體癥狀、體征、活動(dòng)狀態(tài);第12周、20周將各組大鼠置于代謝籠內(nèi)禁食、不禁水收集其24小時(shí)尿液,第20周末采集血液標(biāo)本和腎臟組織后將大鼠殺剪。統(tǒng)計(jì)分析各組腎病大鼠24小時(shí)尿蛋白定量（Pro）、血清肌酐（SCr）、胱抑素（Cysc）等數(shù)據(jù),應(yīng)用免疫熒光法檢測(cè)IgA免疫復(fù)合物沉積情況和纖維連接蛋白FN表達(dá)情況,酶聯(lián)免疫吸附法觀察核轉(zhuǎn)錄因子NF-kB表達(dá)情況。結(jié)果:1.模型復(fù)制實(shí)驗(yàn):通過比較兩組大鼠的一般情況,生化指標(biāo)、腎組織病理改變以及IgA免疫復(fù)合物沉積情況,確定模型復(fù)制成功。2.草花覆盆顆粒干預(yù)IgA腎病大鼠實(shí)驗(yàn):2.1各組大鼠一般情況比較:空白組大鼠精神和毛色良好,反應(yīng)靈敏,飲食正常。模型組、科素亞組、草花覆盆顆粒組造模前與空白組相同,造模第3周左右三組大鼠均出現(xiàn)毛色灰暗,精神不振,消瘦,懶動(dòng)等癥狀。經(jīng)藥物干預(yù)后科素亞組和草花覆盆顆粒組兩組大鼠精神狀況和食欲較前有所改善,且草花覆盆顆粒組大鼠明顯優(yōu)于科素亞組。2.2各組大鼠24小時(shí)尿蛋白定量比較:藥物干預(yù)前模型組、科素亞組、草花覆盆顆粒與空白組相比,Pro明顯升高,并且有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。藥物干預(yù)后,科素亞組、模型組與空白組相比,24Pro有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。草花覆盆顆粒組與空白組相比沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,而草花覆盆顆粒組與科素亞組相比有明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）。通過上表說明灌胃前后空白組大鼠沒有明顯變化,灌胃前的變化說明造模有意義。灌胃后草花覆盆顆粒組24Pro明顯低于科素亞組與模型組。說明在本次實(shí)驗(yàn)中草花覆盆顆粒組在干預(yù)大鼠24小時(shí)尿蛋白定量的治療方面優(yōu)于比科素亞組。2.3各組大鼠血清肌酐（Scr）、胱抑素（Cysc）比較:藥物干預(yù)后:模型組、科素亞組肌酐含量與空白組相比有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。草花覆盆顆粒組肌酐與空白組相比沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。草花覆盆顆粒組肌酐和模型組、科素亞組相比明顯降低,有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）。科素亞組胱抑素和模型組相比沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。說明在本次實(shí)驗(yàn)中草花覆盆顆粒組在干預(yù)肌酐和胱抑素的方面明顯優(yōu)于與科素亞組。2.4腎組織病理學(xué)觀察:光鏡下空白組腎小球大小形態(tài)正常,系膜及基質(zhì)無明顯病理改變。模型組、科素亞組、草花覆盆顆粒與空白組比較系膜及基質(zhì)明顯增厚,科素亞組及草花覆盆顆粒較空白組增厚,但同模型組相比病理改變較小。Masson三色法顯示:空白組腎小球大小正常邊緣清晰,無明顯病理改變。模型組、科素亞組、草花覆盆顆粒與空白組相比膠原纖維明顯增多并且融合?？扑貋喗M、草花覆盆顆粒模型組相比膠原纖維含量明顯減少,并且草花覆盆顆粒明顯優(yōu)于科素亞組。2.5各組大鼠NF-kB表達(dá)影響的比較:藥物干預(yù)后,模型組、科素亞組、草花覆盆顆粒組與空白組相比,NF-kB表達(dá)升高有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）,并且草花覆盆顆粒組與科素亞組更顯著（P<0.01）?？扑貋喗M、草花覆盆顆粒組與模型組相比有所改善,有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。科素亞組與草花覆盆顆粒組相比改善明顯。說明在本次實(shí)驗(yàn)中草花覆盆顆粒組和科素亞組都具有能夠降低NF-kB表達(dá)的作用,并且草花覆盆顆粒組比科素亞組療效更顯著。2.6各組大鼠FN表達(dá)的影響比較:藥物干預(yù)后草花覆盆顆粒組、科素亞組與模型組相比,FN表達(dá)明顯降低,有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）,并且草花覆盆顆粒組與科素亞組更顯著（P<0.01）。從免疫熒光圖中看出:科素亞組、草花覆盆顆粒組與模型組相比熒光點(diǎn)明顯分散。草花覆盆顆粒組與科素亞組相比熒光點(diǎn)量更少更分散。說明草花覆盆顆粒組在調(diào)控FN表達(dá)方面的影響和科素亞組相比具