丙泊酚對內(nèi)毒素休克家兔腦組織中TLR4和NF-κB表達(dá)的影響

丙泊酚對內(nèi)毒素休克家兔腦組織中TLR4和NF-κB表達(dá)的影響目的：感染中毒性休克是重癥監(jiān)護(hù)病房中導(dǎo)致病人死亡的最重要的病因之一。在感染中毒性休克的患者中如果合并有中樞神經(jīng)系統(tǒng)的并發(fā)癥,病死率則會進(jìn)一步增加。目前對病原物質(zhì)進(jìn)入中樞神經(jīng)系統(tǒng)后的免疫過程認(rèn)識尚不清楚。在眾多的研究機(jī)制中,TOLL樣受體4(TLR4)目前已被證實在中樞神經(jīng)系統(tǒng)感染免疫中具有比較重要的作用,并且在格蘭氏陰性細(xì)菌感染的免疫過程中不可或缺。脂多糖通過TLR4介導(dǎo)的免疫通路,最終導(dǎo)致核因子-κB(NF-κB)的活化,并進(jìn)一步引起包括TNF-α、IL-6和IL-10在內(nèi)的炎癥因子的過度釋放,導(dǎo)致組織器官的進(jìn)一步損害。研究表明,通過降低NF-κB的活化程度能夠顯著地減少炎癥因子的釋放。在感染中毒性休克合并感染中毒性腦病患者的治療過程中,常常需要適度的鎮(zhèn)靜。丙泊酚是目前臨床上最常用的靜脈麻醉藥之一,也是重癥病人常用的鎮(zhèn)靜藥物。既往的研究表明：丙泊酚在鎮(zhèn)靜的同時,能夠通過減少炎癥因子的釋放,從而起到一定的器官保護(hù)作用。但這些研究主要集中在減少炎癥因子的釋放方面,而對丙泊酚通過何種途徑導(dǎo)致炎癥因子的減少目前尚未見報道。鑒于此,本研究擬采用分子生物學(xué)技術(shù)和免疫組織化學(xué)方法檢測腦組織中TLR4和NF-κBP65的表達(dá)情況,并通過檢測丙泊酚對腦組織中TLR4和NF-κBP65表達(dá)的影響,試圖從分子免疫的角度去理解丙泊酚在內(nèi)毒素休克過程中腦保護(hù)的作用的可能機(jī)制。方法：40只新西蘭白兔稱重后隨機(jī)分為四組：空白對照組(C組)、內(nèi)毒素休克一小時組(LS1h組)、內(nèi)毒素休克兩小時組(LS2h組)和內(nèi)毒素休克加丙泊酚組(LSP組)。動物麻醉固定后,進(jìn)行氣管切開,分離頸動脈和頸靜脈。頸動脈用于監(jiān)測直接動脈壓,頸靜脈用于補(bǔ)液、推藥和泵注丙泊酚。待基本生命平穩(wěn)后,在LS1h組、LS2h組和LSP組通過靜脈以0.5mg/kg的劑量緩慢注射脂多糖建立內(nèi)毒素休克模型,以平均動脈壓達(dá)到60mmHg,并穩(wěn)定60min作為休克模型建立成功的標(biāo)準(zhǔn)。C組的動物通過靜脈注射5ml生理鹽水作為空白對照。記錄三組動物在推注LPS之前(To)、推注完15min(T1)、推注完30min(T2)、推注完60min(T3)、推注完120min(T4)和休克時(T5)以及休克一小時(T6)和休克兩小時(T7)的MAP值。LS1h組在休克建立一小時后通過空氣注射法處死動物,在無菌條件下取出整個腦組織凍存。LS2h、C組和LSP組的處死方法同LS1h組,但處死時間為休克建立兩小時。腦組織中TLR4表達(dá)采用PCR檢測,NF-κBP65的表達(dá)情況采用免疫組化檢測。結(jié)果：1.與C組比較,LS1h組、LS2h組和LSP組家兔腦組織中的TLR4的表達(dá)顯著增高,而在LS1h組、LSP組和LS2h組中TLR4的表達(dá)差異沒有統(tǒng)計學(xué)意義；2.與C組比較,LS1h組、LS2h組和LSP組家兔腦組織中的NF-κBP65的表達(dá)顯著增高,與LS1h組相比,LS2h組中NF-κBP65的表達(dá)顯著增高,具有統(tǒng)計學(xué)意義；3.與LS2h組相比,LSP組中NF-κBP65的表達(dá)明顯減少。結(jié)論：1.內(nèi)毒素休克家兔腦組織中TLR4的表達(dá)較正常顯著上調(diào),且上調(diào)出現(xiàn)在休克的早期,提示內(nèi)毒素休克治療最關(guān)鍵的時刻應(yīng)該是休克的早期；2.丙泊酚能夠